浙江省自然科学基金(Y2090805)
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 相关作者：严泽军蒋军辉程跃胡嘉盛施小东更多>>
- 相关机构：宁波大学宁波市第一医院中山大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Survivin启动子的克隆及其在膀胱癌细胞BIU87中的活性鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的克隆Survivin启动子的有效片段,并检测其在人膀胱癌细胞株BIU87和人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中的转录活性。方法用PCR扩增Survivin基因的启动子片段,克隆入荧光素酶报告质粒pGL3-Basic,构建pGL3BSurvivin重组质粒,用脂质体法瞬时转染BIU87及SV-HUC-1中,检测Survivin启动子在细胞中的转录活性。同时构建含CMV启动子的pGL3BCMV重组质粒作为阳性对照。48h后收集转染细胞与荧光素酶底物反应,检测荧光素酶活性。结果成功克隆440 bp的Survivin基因启动子,并构建了携带有Survivin基因启动子的pGL3Basic真核表达载体,转染BIU87细胞后的荧光素酶活性为2 286.98±440.21,而SV-HUC-1荧光素酶活性为12.32±1.16,两者差异有统计学意义(<0.01)。结论本实验成功克隆的Survivin启动子在BIU87细胞中表现出较高的肿瘤特异性活性,其有可能作为调控元件用于膀胱癌的靶向性基因治疗。
- 严泽军程跃蒋军辉胡嘉盛施小东黄坚成
- 关键词：SURVIVIN启动子膀胱肿瘤
- Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌细胞T24侵袭能力的影响被引量：1
- 2013年
- 目的以Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIG1转染人膀胱癌细胞系T24细胞,观察其对T24细胞侵袭能力的影响。方法 Ad-Surp-LRIG1转染T24细胞,用RT-PCR和Westernblot检测细胞中LRIG1的表达水平,并采用Transwell小室测定转染后细胞侵袭能力的变化。结果 Ad-Surp-LRIG1转染人膀胱癌T24细胞后,与对照组和空白对照组相比,体外侵袭实验显示实验组细胞的侵袭能力明显下降。LRIG1的mRNA和蛋白表达水平明显升高,而EGFR的mRNA和蛋白表达水平则显著降低(P<0.01)。结论 Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIG1能够在T24细胞中有效表达,并显著抑制T24细胞的侵袭能力。
- 蒋军辉严泽军程跃蒋照辉谢国海
- 关键词：LRIG1基因肿瘤侵袭腺病毒载体
- Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌细胞BIU87生长的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:构建Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl,并检测其对人膀胱癌细胞BIU87生长的影响。方法:将经同源重组产生的重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl在293细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测其滴度。用Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl分别感染人膀胱癌细胞BIU87及人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1,MTT法评估Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl对BIU87细胞生长的抑制作用。结果:当感染复数(MOI)=25时,Ad-Surp-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率为74.56%,在SV-HUC-1细胞中转染率为0,差异有统计学意义(χ2=58.64,P<0.05);Ad-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率为68.27%,在SV-HUC-1细胞中转染率为72.52%,差异无统计学意义(χ2=0.075,P>0.05)。Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl在BIU87细胞中的转染效率相比,差异无统计学意义(χ2=0.016,P>0.05)。与PBS相比,Ad-Surp-LRIGl和Ad-LRIGl均能明显抑制BIU87细胞的生长,转染后第4天这一差异显著(F=15.96,P<0.05),而Ad-Surp-LRIGl组和Ad-LRIGl组细胞生长速度无明显差异。结论:成功构建了含有Survivin启动子驱动LRIG1基因的重组复制腺病毒Ad-Surp-LRIGl并鉴定正确,Ad-Surp-LRIGl能选择性转染人膀胱癌细胞BIU87,在体外能明显抑制膀胱癌细胞BIU87的生长。
- 严泽军程跃蒋军辉胡嘉盛施小东黄坚成
- 关键词：SURVIVIN启动子LRIG1基因
- Survivin启动子驱动的LRIG1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建含Survivin启动子和LRIG1基因的重组复制缺陷型腺病毒并进行鉴定,为肿瘤基因治疗的研究奠定基础。方法应用分子克隆技术将Survivin启动子连接至pLRIGl-GFP上构建出pEGFP-Surp-LRIGl,将其与含有5型腺病毒右臂的质粒Pbhge3通过Lipofectamine2000共转染至人胚肾293细胞,经同源重组产生重组腺病毒Ad-Surp-LRIGl。Ad-Surp-LRIGl在人胚肾293细胞中大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化,测其滴度。结果 pEGFP-Surp-LRIGl经酶切鉴定正确,扩增得到的Ad-Surp-LRIGl经PCR扩增证实为Survivin启动子驱动的LRIG1重组腺病毒,滴度为2.3×1010pfu/ml。结论成功构建出含有Sur-vivin启动子和LRIG1基因的重组复制缺陷型腺病毒并鉴定正确,可用于下一步膀胱癌基因治疗的研究中。
- 严泽军程跃蒋军辉胡嘉盛施小东黄坚成
- 关键词：腺病毒载体SURVIVIN启动子LRIG1基因
- Survivin启动子调控腺病毒介导富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1基因治疗膀胱癌的实验研究被引量：8
- 2012年
- 目的探讨Survivin启动子驱动的重组腺病毒Ad—Surp—LRIG1对膀胱癌的治疗作用及机制。方法用Ad—Surp—LRIG1和Ad—LRIG1分别感染人膀胱癌细胞BIU87及人膀胱上皮永生化细胞SV—HUC-1，根据报告基因表皮生长因子受体（EGFR）表达的不同计算病毒的细胞转染率。MTF法评估Ad—Surp—LRIG1和Ad—LRIG1对BIU87细胞生长的抑制作用。建立膀胱癌裸鼠移植瘤模型，将成瘤裸鼠随机分为3组，Ad—Surp—LRIGI组（尾静脉注射Ad—Surp—LRIG1上清液）、AD-LRIG1组（尾静脉注射Ad—LRIG1上清液）、PBS组（尾静脉注射PBS），观察各组裸鼠移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线；RT—PCR检测各组肿瘤组织中LRIG1和EGFRmRNA的表达。结果当感染复数（MOI）=25时，Ad—Surp—LRIG1在BIU87细胞中的转染效率为74．56％，在SV—HUC-1细胞中转染率为0，差异有统计学意义（f=58．640，P=0．ooo）；Ad—LRIGl在BIU87细胞中的转染效率为68．27％，在SV-HUC-1细胞中转染率为72．52％，差异无统计学意义（x2=0．075，P=0．784）。Ad—Surp—LRIG1和Ad—LRIG1在BIU87细胞中的转染效率相比，差异无统计学意义（X2=0．016，P=0．898）。与PBS液对照组比较，Ad-Surp—LRIG1和Ad-LRIG1均能明显抑制BIU87细胞的生长，转染4d后这一差异有统计学意义（F=15．960，P=0．000），而Ad—Surp—LRIG1组和Ad—LRIG1组细胞生长速度无明显差异。Ad—Surp-LRIG1组肿瘤生长速度明显慢于其他2组，治疗结束后Ad—Surp—LRIG1组肿瘤质量小于其他2组，差异有统计学意义（F=97．860，P=0．000），Ad—LRIG1组与PBS组相比差异无统计学意义（t=1．73，P=0．06）。与其他2组比较，Ad—Surp—LRIG1组LRIG1mRNA表达水平明显升高（F=851．343，P=0．000），而EGFRmRNA表达水平则显著降低（F=591．205，P=0．000）。结论Ad—Surp-LRIG1能选择性转染人膀胱癌细胞BIU87，在体内外均能明显抑制膀胱癌的生长，
- 严泽军程跃蒋军辉胡嘉盛施小东
- 关键词：腺病毒科凋亡抑制蛋白质类膜糖蛋白类基因疗法
- 携带有Survivin启动子的重组腺病毒载体的构建及鉴定
- 2012年
- 目的构建携带有Survivin启动子的重组腺病毒载体,检测其在人膀胱癌细胞株BIU87和人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中的表达。方法用PCR扩增Survivin基因的启动子片段,构建分别携带Survivin启动子和CMV启动子的真核表达载体pSurp-EGFP和pCMV-EGFP,体外连接法制备重组腺病毒Adeno-SP-EGFP和Adeno-CMV-EGFP,分别转染BIU87及SV-HUC-1,荧光显微镜下观察EGFP的表达。结果成功克隆440 bp的Survivin基因启动子,并构建了携带有Survivin基因启动子的重组腺病毒Adeno-SP-EGFP,其转染BIU87及SV-HUC-1后,在荧光显微镜下可以观察到BIU87细胞呈现出较强绿色荧光,而SV-HUC-1细胞中仅有散在少量绿色荧光。结论成功制备的携带有Survivin启动子的重组腺病毒Adeno-SP-EGFP在BIU87细胞中表现出较高的肿瘤特异性活性,为下一步进行肿瘤特异性的基因治疗研究奠定了基础。
- 严泽军程跃蒋军辉胡嘉盛施小东黄坚成
- 关键词：SURVIVIN腺病毒载体膀胱肿瘤基因治疗
- Survivin启动子控制LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌裸鼠移植瘤的治疗被引量：2
- 2012年
- 【目的】探讨Survivin启动子控制LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌裸鼠移植瘤的治疗作用及机制。【方法】建立膀胱癌裸鼠移植瘤模型,将成瘤裸鼠随机分为3组,Ad-Surp-LRIGl组(尾静脉注射Ad-Surp-LRIGl上清液)、AD-LRIG1组(尾静脉注射Ad-LRIGl上清液)、PBS组(尾静脉注射PBS),观察各组裸鼠移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线;RT-PCR和Western blot分别检测各组肿瘤组织中LRIG1和EGFR mRNA和蛋白的表达。【结果】Ad-Surp-LRIGl组肿瘤生长速度明显慢于其他2组,治疗结束后Ad-Surp-LRIGl组肿瘤较其他2组轻,差异有统计学意义(F=97.86,P<0.001),Ad-LRIGl组与PBS组相比差异无统计学意义(t=1.73,P=0.06)。与其他两组相比,Ad-Surp-LRIGl组LRIG1的mRNA和蛋白表达水平明显升高,而EGFR的mRNA和蛋白表达水平则显著降低(P<0.01)。【结论】Ad-Surp-LRIGl在体外均能明显抑制膀胱癌的生长,其机制可能部分与LRIG1能下调EGFR的表达有关。
- 孙家媛何振宇李凤岩管迅行严泽军
- 关键词：腺病毒载体膀胱肿瘤SURVIVIN启动子LRIG1基因
