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三七总皂苷抑制K562细胞mTOR信号通路活性的实验研究被引量：3: 2015年; 目的探讨三七总皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）对体外培养K562细胞m TOR信号通路相关分子表达及活性的影响。方法不同浓度的PNS（50~800μg/m L）干预体外培养K562细胞24~72 h后,MTT比色法检测PNS对K562细胞增殖的抑制作用;AO/EB双荧光染色法观察细胞死亡及凋亡状况;RT-PCR检测m TOR、p70S6K、4E-BP1 mRNA表达变化;Western blot检测m TOR、p70S6K、4E-BP1及p-m TOR、p-p70S6K、p-4E-BP1蛋白表达量的变化。结果与对照组相比,浓度为100~800μg/m L的PNS能够抑制K562细胞增殖（P〈0.05）,促进K562细胞凋亡及死亡（P〈0.05）,PNS对K562细胞72 h的IC50为（229.07±2.36）μg/m L;100、200、400μg/m L PNS作用于K562细胞72 h后m TOR蛋白表达量及mRNA表达量降低（P〈0.05）,且磷酸化蛋白p-m TOR（Ser2448）、p-p70S6K（Thr229/389）及p-4E-BP1（Thr37/46）表达水平也随着药物浓度的增加而降低（P〈0.05）。结论 PNS能够抑制K562细胞m TOR信号通路的活性,这可能是PNS抑制K562细胞增殖的机制之一。; 翟玮玮李玉云杨向荣于北凯王露李见; 关键词：三七总皂苷 K562细胞 M

人凋亡相关因子基因RNA干扰慢病毒载体的构建与包装被引量：1: 2015年; 目的:构建人凋亡相关因子(Fas)基因短发夹RNA慢病毒载体,实现沉默人脐带间充质干细胞Fas基因的表达。方法:根据Fas基因mRNA序列,设计4组靶向Fas基因的短发夹RNA序列,合成、退火形成双链DNA片段,与经过DNA内切酶Bam HⅠ、EcoRⅠ双酶切后的LV3载体连接转入感受态细胞,对长出的克隆进行菌落PCR鉴定,并对阳性克隆进行测序及比对分析。通过转染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。结果:经酶切及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功,通过荧光显微镜观察证明病毒转入293T细胞,感染效率>90%,并获得高滴度的慢病毒载体,病毒滴度为3×108TU/ml。结论:成功构建人Fas基因RNA干扰慢病毒载体,为下一步转染脐带间充质干细胞提供理论参考。; 王露李见翟玮玮李玉云; 关键词：RNA干扰慢病毒载体 293T细胞

重组表达人IDO基因慢病毒载体的构建及鉴定: 2014年; 目的:构建重组表达人吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)基因的慢病毒载体。方法:设计相应引物,从含有人IDO基因的cDNA文库中,利用聚合酶链反应(PCR)方法钓取人IDO基因的全长编码区片段。将目的基因与经酶切线性化的慢病毒载体pGC-FU进行定向的连接,将产物转化细菌感受态细胞。对长出的克隆进行菌落PCR鉴定,并对阳性的克隆进行测序及比对分析。重组慢病毒及辅助包装质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况;采用Wester blot检测IDO-GFP融合蛋白的表达情况;实时荧光定量PCR检测慢病毒浓缩液的滴度。结果:成功获取人IDO基因编码区序列,人IDO基因慢病毒转染质粒连接正确;293T细胞中产生慢病毒颗粒;IDO基因在细胞内稳定表达;人IDO基因重组慢病毒载体的滴度为2×108TU/ml。结论:成功构建并包装出高滴度的人IDO基因重组慢病毒表达载体,为下一步转染目的细胞奠定了实验基础。; 李见王露李玉云; 关键词：基因表达慢病毒载体 293T细胞

脐带血间充质干细胞的分离培养及诱导表达IDO对免疫介导再生障碍性贫血小鼠的治疗研究: 2012年; 目的:从人脐带血中分离和培养脐带血间充质干细胞(umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UCB MSCs),探讨其吲哚胺2,3-过氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)活性对MSCs治疗再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)的影响。方法:采集足月分娩儿脐带血,淋巴细胞分离法分离培养UCB MSCs。倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物表达,成骨与成脂诱导鉴定UCB MSCs分化潜能。建立免疫介导AA小鼠模型,尾静脉输注经γ-干扰素(IFN-γ)诱导的UCBMSCs,观察对AA小鼠的治疗效果。结果:UCB MSCs培养1周可见少量贴壁梭形细胞,于3周左右细胞生长形态较均匀,成纤维样、平行排列或漩涡状;传代细胞1周即可见80%左右融合。流式检测细胞表面标志物,不表达造血标志物CD34,CD44、CD73阳性表达率分别为94.36%和92.48%。UCB MSCs经IFN-γ诱导表达IDO活性,对AA小鼠造血恢复具有治疗作用。结论:脐血分离培养的MSCs在IFN-γ诱导作用下,其IDO基因表达对于免疫介导AA小鼠模型具有治疗作用。; 魏晓巍李玉云张强; 关键词：再生障碍性贫血间充质干细胞免疫介导

人脐带源间充质干细胞移植对再生障碍性贫血小鼠免疫保护的研究: 2016年; ①目的探讨人脐带源间充质干细胞(umbilical cord-mesenchymal stem cells,UC-MSCs)对免疫介导的再生障碍性贫血(AA)小鼠模型的治疗作用及其发挥免疫抑制作用的机制。②方法自然贴壁法分离、纯化UC-MSCs并进行体外培养和扩增;制备免疫介导的AA小鼠模型。模型制成后,将培养的UC-MSCs以1×106/kg的剂量经尾静脉注入模型鼠体内。RT-PCR法检测UC-MSCs对AA小鼠外周血及骨髓中单个核细胞γ-干扰素(IFN-γ)mRNA表达的影响,MTT法测定UCMSCs对异基因淋巴细胞增殖效应的影响,进一步探讨其发挥免疫抑制作用的机制。③结果输注UC-MSCs后AA小鼠外周血象、骨髓病理学特征等明显改善;UC-MSCs对异基因淋巴细胞增殖有明显抑制作用;与模型组比较,输注UC-MSCs可明显降低造血负调控因子IFN-γmRNA表达水平(P<0.05),恢复造血。④结论 AA小鼠输注UC-MSCs可使其骨髓造血衰竭情况明显改善;其机制与UC-MSCs可抑制T淋巴细胞的增殖及抑制造血负调控因子IFN-γmRNA表达有关。; 张英杰郝晓娜郝艳梅李玉云; 关键词：脐带源间充质干细胞再生障碍性贫血免疫保护

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安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2012A198)