国家自然科学基金(81100006)
- 作品数：10 被引量：47H指数：4
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- 微小RNA-29a在肺结核患者血清中的表达及其生物学功能预测分析被引量：8
- 2013年
- 目的分析微小RNA-29a（miR-29a）在肺结核患者血清中的表达，并对miR-29a的靶基因进行功能预测分析，为深入研究miR-29a与结核病感染调控机制的关系及其生物学功能奠定基础。方法病例组为未经治疗的活动性肺结核患者65例，对照组为健康志愿者45例，清晨空腹抽取静脉血，分离血清。用TRIzol试剂获取血清中总RNA，对RNA样本进一步纯化，通过紫外分光光度计和凝胶电泳检测RNA提取质量。用核酸杂交和荧光定量PCR检测miR-29a在血清中的表达。运用TargetScan与PicTar软件综合预测miR-29a的靶基因，取两者的交集作为靶基因。采用DAVID数据库对miR-29a预测的靶基因集合进行基因本体论（GO）注释描述分类，并分别提取GO的3类注释信息。采用网络调控分析软件Cytoscape中的插件BINGO进行GO注释的显著性分析。对靶基因集合进行生物通路富集分析。结果核酸杂交结果表明，病例组血清中miR-29a表达（854±93）显著高于对照组（80±22），差异有统计学意义（t=3．541，P〈0．05）。荧光定量PCR结果表明，病例组血清中miR-29a表达（1．35±0．62）显著高于对照组（0．18±0．07），差异有统计学意义（t=2．987，P〈0．05）。预测miR-29a的靶基因集合分别富集在转录调控等生物学过程、金属离子结合活性等分子功能及细胞外基质等细胞组分；miR-29a的靶基因集合显著富集于KEGG通路数据库中的黏附、细胞外基质受体相互作用等7个信号转导通路和Biocarta通路数据库中的整联蛋白信号通路、钙黏蛋白信号通路和Wnt信号通路等信号通路中。结论活动性肺结核患者血清中miR-29a表达显著上调，miR-29a的靶基因参与细胞黏附、转录调控等生物学过程。
- 付玉荣伊正君李建花高昆山
- 关键词：微RNAS计算生物学
- let-7c与其靶基因细胞因子在肺结核痰液中的表达及其功能分析被引量：3
- 2013年
- 目的检测microRNA let-7c及其靶基因细胞因子在肺结核患者痰液中的含量变化,并用生物信息学技术和软件对let-7c的功能进行预测分析,为进一步阐明let-7c在结核感染中的作用奠定基础。方法用核酸杂交和定量PCR检测健康对照和活动性肺结核病人的痰液中let-7c的含量;用TargetScan与PicTar预测let-7c的靶基因,用DAVID数据库和Cyto-scape的BINGO插件对let-7c的预测靶基因进行GO注释分析和生物通路分析;用ELISA法检测let-7c靶基因细胞因子IL-10与IL-6在痰液中的水平变化。结果杂交和PCR结果表明:let-7c在活动性肺结核患者痰液中的含量均比健康对照组显著降低(P<0.05)。let-7c预测靶基因的GO注释结果富集在负性调节细胞间通讯等生物学过程及胞外基质构成等分子功能方面(P<0.05);在KEGG通路数据库中let-7c预测靶基因主要富集于MAPK、钙离子信号通路与TGF-beta信号通路等方面(P<0.05)。痰液中let-7c的靶基因细胞因子IL-10的含量显著增高。结论 let-7c在活动性肺结核感染病人痰液中的含量明显降低,let-7c靶基因细胞因子IL-10明显增高,let-7c的靶基因主要参与细胞信号通讯、刺激反应、信号转导等生物学过程。这些结果为进一步深入研究let-7c在结核感染中调控功能奠定了基础。
- 伊正君付玉荣吴晓燕许福亮
- 关键词：肺结核靶基因IL-10生物信息学
- 肺结核患者痰液细胞和血清中miR-618的水平变化及功能预测被引量：5
- 2013年
- 目的检测肺结核患者痰液和血清中miR-618的水平变化及miR-618靶基因细胞因子IL-13的含量,并用生物信息学技术和软件对miR-618的功能进行预测分析。方法收集健康对照和活动性肺结核患者的痰液和血清,用核酸杂交和实时定量PCR(qRT-PCR)检测痰液和血清中miR-618的水平。用ELISA检测IL-13的含量。TargetScan预测miR-618的靶基因,用DAVID数据库和Cytoscape的BINGO插件对miR-618的预测靶基因进行GO注释分析和生物通路分析。结果杂交和qRT-PCR结果显示:miR-618在活动性肺结核患者痰液和血清中的水平均比健康对照组显著降低(P<0.05)。IL-13含量虽然在对照组和结核组中无统计学差异,但在结核组有增高的趋势。miR-618预测靶基因的GO注释结果富集在转录调控等生物学过程、DNA结合等分子功能等方面(P<0.05);在KEGG通路数据库中miR-618a预测靶基因主要富集于TGF-β信号通路中(P<0.05)。结论 miR-618在活动性肺结核感染患者痰液和血清中的含量都明显降低,miR-618的靶基因主要参与转录调控、RNA代谢等生物学过程。
- 伊正君付玉荣吴洪娟赵山
- 关键词：肺结核IL-13靶基因生物信息学
- T-SPOT.TB技术在潜伏结核感染者免疫抑制剂治疗中的临床应用被引量：3
- 2015年
- 目的探讨T-SPOT.TB技术在潜伏结核感染(LTBI)者免疫抑制剂治疗中的筛查效果,为预防和控制LTBI提供新的依据。方法应用T-SPOT.TB试剂盒对162例需要应用免疫抑制的患者进行结核分枝杆菌特异性T细胞的检测;同时对所有病例做结核菌素皮肤试验(TST);对其中28例T-SPOT.TB技术筛查阳性患者应用抗TNF-α生物制剂治疗前均给予预防性抗结核药物治疗4个月并随访1年。结果 T-SPOT.TB阳性率为36.4%,确诊率为94.9%;TST阳性率为28.4%,确诊率为69.6%。T-SPOT.TB阳性率和确诊率与TST相比,差异有统计学意义(P<0.05);通过对28例T-SPOT.TB技术筛查阳性,给予预防性抗结核药物治疗4个月的患者1年的随访,结果无一例结核病发生。结论 T-SPOT.TB技术在检测LTBI敏感性强、特异性高,是快速诊断结核感染的有效手段;在应用免疫抑制剂对LTBI的筛查诊断中具有重要临床价值。
- 毕艳伊正君付玉荣
- 关键词：结核病毒潜伏期T-SPOT.TB结核菌素皮肤试验免疫抑制剂
- 潜伏结核感染者CD4＋T细胞miR-29家族、靶基因IFN-γ的表达及生物信息学分析被引量：8
- 2013年
- 目的探讨潜伏结核感染和活动性缔结核感染对患者外周血CD4^＋T细胞内miR-29家族及其靶基因IFN-γ表达的影响。方法于2012年3-12月，在山东省潍坊市某两家医院选取调查对象并分为3组：活动性肺结核组（30例）、潜伏结核感染（LTBI）组（25例）和健康对照组（30名）。分离纯化3组受试者外周血中的CD4^＋T细胞；州核酸杂交与荧光定量PCR检测CD4^＋T细胞内miR-29a、miR-29b和miR-29c的表达；用定量PCR检测miR-29靶基因IFN-γ的表达；用TargetScan与PicTar联合预测miR-29家族的靶基因；用David数据库和Cytoscape软件对miR-29家族的预测靶基因进行皋因本体论（GO）和京都基因和基因组百科仝书（KEGG）生物通路富集分析。结果miR-29a、miR-29b和miR-29c在活动性肺结核组、LTBI组和健康对照组CD4^＋T细胞中的表达水平均不同（P〈0．05）：miR-29b和miR-29c在活动性肺结核组的表达（561．63±65．36，281．85±42．78）高于健康对照组（260．74±38．69，128．21±19．98），低于LTBI组（2030．29±321．68，620．93±79．14）；miR-29a在对照组的表达水平（913．95±104．73）高于活动性结核组（323．37±54．38），低于LTBI组（4782．13±567．81）。靶基凶IFN-γ在3组之间的表达水平亦不同（P〈0．05）：LTBI组（0．45±0．09）低于健康埘照组（1．00），而高于活动性结核组（0．11±0．03）。miRNA-29家族的预测靶基冈的GO功能富集于细胞外基质结构成分、转录调节活性等分子功能方面；在KEGG的通路数据库中，miR-29家族预测靶基因集合屁著富集于局部黏附信号通路、调节细胞骨架与mTOR信号通路等方面。结论LTBI和活动性结核感染明显增加了患者外周血CD4^＋T细胞内miR-29家族的表达，降低了其靶基因IFN-γ的表达，从而影响了信号通路等生物学过程。
- 伊正君付玉荣李建花张波
- 关键词：计算生物学MIR-29IFN-Γ
- 潜伏结核感染的分子机制研究进展被引量：3
- 2013年
- 潜伏结核感染是活动性结核病的主要来源,也是结核病防控的关键,但是潜伏结核感染的机制尚未完全明确。近年来,在分子水平上对潜伏结核感染所做的大量研究表明,许多重要分子参与了潜伏结核感染的发生过程,进一步阐释了潜伏结核感染的发生机制,为潜伏结核感染诊断、治疗及新疫苗的研发开辟了新方向。现就结核潜伏感染的分子机制研究进展进行综述。
- 张波伊正君付玉荣
- 关键词：结核分子机制
- 分枝杆菌噬菌体D29 holin基因的克隆及其编码蛋白的生物信息学分析被引量：1
- 2016年
- 目的研究分枝杆菌噬菌体D29holin基因编码蛋白的理化特点及生物学特性,分析噬菌体抗结核菌的潜力。方法根据GenBank中登录的分枝杆菌噬菌体D29holin基因序列设计上、下游引物,以分枝杆菌噬菌体D29基因组为模板,PCR扩增holin基因,构建重组质粒pET32a-holin,进行双酶切鉴定、测序鉴定及生物信息学分析。结果 PCR扩增得到序列正确的holin基因产物并成功构建重组质粒pET32a-holin。进化分析显示分枝杆菌噬菌体D29holin基因与已知有尾分枝杆菌噬菌体Chy1、Chy4、Chy5holin基因亲缘关系较近。生物信息学分析显示,该基因编码Holin蛋白为稳定、疏水性蛋白,具有2个跨膜区域和亲水性C-端;二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲为主,有信号肽,蛋白序列中存在2个丝氨酸磷酸化位点。结论分枝杆菌噬菌体D29 Holin蛋白的两个跨膜区及亲水性C-端构象发生变化,有助于阐明Holin"定时"打孔及启动噬菌体裂解细菌的机制,为研发抗结核Holin多肽药物奠定了基础。
- 张德峰付玉荣伊正君
- 关键词：分枝杆菌噬菌体生物信息学分析
- 耻垢分枝杆菌调节蛋白TrpD的原核表达及纯化
- 2015年
- 目的克隆编码耻垢分枝杆菌调节蛋白TrpD的基因并在大肠杆菌中进行蛋白表达及纯化。方法利用PCR技术从耻垢分枝杆菌中扩增TrpD基因,构建重组表达质粒pET-32a(+)-TrpD;以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性重组菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,在变性条件下对目的蛋白进行镍离子亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Westem blot鉴定目的蛋白的表达及反应原性。结果扩增了TrpD基因,克隆于表达载体pET-32a(+)中,PCR筛选和酶切鉴定获得阳性克隆,测序证实正确。经诱导在大肠杆菌中表达出相对分子质量(Mr)为56000的目的蛋白。结论已成功构建TrpD基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效蛋白表达及纯化,为进一步研究TrpD蛋白在结核病中的致病机制提供了依据。
- 刘艳伊正君付玉荣刘丹毕艳
- 关键词：耻垢分枝杆菌原核表达多克隆抗体
- 噬菌体治疗细菌感染的研究进展被引量：2
- 2013年
- 噬菌体是一种细菌依赖性病毒,在治疗细菌特别是耐药性细菌感染方面,与传统的抗生素比较具有独特的优势,其代谢动力学及给药途径是目前的研究热点。噬菌体裂解酶作为一种新的治疗手段,具有比活性噬菌体制剂更多的优点。文中就噬菌体在细菌感染治疗方面的作用机理、给药途径和基因工程的应用,及噬菌体裂解素的研究进展进行综述,对噬菌体治疗细菌感染提出展望。
- 裴景亮付玉荣
- 关键词：细菌噬菌体裂解酶给药途径细菌感染
- 噬菌体裂解酶作用机制及用于细菌感染治疗的研究进展被引量：16
- 2018年
- 噬菌体裂解酶具有高效性、高稳定性、潜在广泛杀菌性和安全性,能特异性的杀灭细菌而且不容易使细菌产生耐药性。在有噬菌体存在的情况下,噬菌体侵入细菌并编码产生裂解酶,裂解酶在细菌内"自内裂解"细菌,在没有噬菌体存在的情况下,穴蛋白协助裂解酶"自外裂解"细菌。此外,本文还回顾了裂解酶对革兰阳性菌如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌,阴性菌如鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌感染的治疗新进展。
- 朱丹祝思路付玉荣伊正君
- 关键词：噬菌体裂解酶抗菌机制
