国家重点基础研究发展计划(2005CB522403)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
- 相关作者：邓大君周静张宝珍更多>>
- 相关机构：北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细胞荧光素酶报告基因试验受CpG岛甲基化状态影响
- 2009年
- 目的研究细胞内源性上皮型钙黏素基因（E-cadherin，CDH1）启动子CpG岛甲基化状态是否影响报告基因试验的结果。方法甲基化特异性PCR法测定8种人肿瘤细胞系CDH1启动子CpG岛甲基化状态，免疫印迹法测定其蛋白表达；根据该基因启动子-73位A／C多态和单倍体型构建2组长短不同的CDH1启动子-荧光素酶报告基因[pGI3-A（-73]）／-C（-73]）和pGL3-H1／-H4]，活性差异采用t检验进行统计分析。结果（1）CDH1在MCF7、MKN74、PC-3和AGS细胞中CpG岛未甲基化，除AGS外均存在CDH1表达；在HeLa、BGC823、A549和RKO细胞中CpG岛甲基化并且无表达；（2）在CDH1未甲基化细胞系MCF7、MKN74、PC-3和AGS中pGL3-C（-73）报告基因活性（分别为：0．78±0．10、0．17±0．01、0．11±0．01、1．19±0．18）均显著高于pGL3-A（-73）报告基因活性（分别为：0．30±0．08、0．07±0．01、0．07±0．01、0．39±0．04）（t值分别为：-6．298、-12．349、-8．128、-7．388，P值均〈0．01），而在CDH1甲基化细胞中则相反[HeLa、BGC823、A549和RKO细胞中pGL3C（-73）、报告基因活性分别为：0．09±0．02、0．13±0．02、0．05±0．01、0．01±0．00，pGL3-A（-73）活性分别为：0．16±0．01、0．25±0．01、0．11±0．03、0．03±0．00，pGL3-C（-73）活性低于pGL3-A（-73），t值分别为：5．958、11．189、3．661、13．866，P值均〈0．05]；（3）在MKN74和RKO细胞中，pGL3-H1／-H4的启动子活性分别为1．57±0．23／0．94±0．06和0．38±0．02／0．50±0．04，差异亦存在统计学意义（t值为4．577和-4．915，P值为0．010和0．003），并且在两种细胞中活性相反。结论细胞内源性目的基因CpG岛甲基化状态对报告基因试验结果可能有重要影响，高活性基因型的启动子也是容易受抑制的启动子。
- 张宝珍邓大君
- 关键词：钙黏着糖蛋白类CPG岛甲基化
- 人组织样品中SNCG基因CpG岛甲基化拷贝数定量分析被引量：6
- 2007年
- 目的建立准确测定肿瘤组织中SNCG基因CpG岛甲基化拷贝的含量的方法.方法利用亚硫酸氢钠修饰-克隆测序法确定胃组织该CpG岛中关键性CpG位点,然后利用限制性内切酶建立了测定该位点甲基化状态的分析法(COBRA),再利用变性高效液相色谱技术进行定量.结果对2个肿瘤细胞系、2个正常人胃黏膜样品、2对原发性胃癌及其癌旁非癌组织进行分析发现,在该CpG岛的16个CpG位点中,-88位等5个CpG位点的甲基化状态与整个CpG岛的甲基化状态一致;利用限制性内切酶Acil能够区分该位点甲基化状态:在该位点未甲基化时(GTGG)不能酶切,而甲基化时(GCGG)酶切敏感;在变性高效液相色谱仪上甲基化片段和非甲基化片段能够完全分离;根据色谱峰面积可知两者的比例,在1.25%~100%范围内有良好的线性关系,重现性较好;对克隆测序样品进行限制性内切酶-变性高效液相色谱测定,结果与克隆测序一致.结论建立的限制性内切酶-变性高效液相色谱法能够定量测定SNCG基因CpG岛甲基化.
- 周静文贤子邓大君
- 关键词：CPG岛甲基化
- 乳腺癌组织中APC和Bikunin基因异常甲基化
- 2007年
- 目的探讨APC和Bikunin基因甲基化状态与乳腺癌临床病理特征之间的相关性.方法采用甲基化特异性聚合酶链反应法检测152例乳腺癌组织中APC和Bikunin基因的甲基化状态.结果乳腺癌组织中APC基因启动子区CpG岛甲基化频率为40.8%,其甲基化状态与肿瘤大小有相关(X^(2)=4.041;P=0.044),但是与患者年龄、生存期、肿瘤的病理类型、组织学分级、临床分期、淋巴结转移以及雌激素或孕激素受体等状态无相关性;Bikunin基因启动子区CpG岛甲基化频率为24.6%,与肿瘤的临床病理学特征无相关性.结论APC和Bikunin基因启动子区CpG岛异常甲基化是乳腺癌组织中的频发事件,与乳腺癌的预后无相关性.
- 陈扬霖解云涛文贤子邓大君
- 关键词：甲基化CPG岛
- 引物延伸-变性高效液相色谱法检测去甲基化活化16型乳头状瘤病毒被引量：1
- 2007年
- 目的建立1种检测16型乳头状瘤病毒(HPV16)7862nt上CpG位点非甲基化的方法.方法培养宫颈癌SiHa和CaSki细胞系,提取基因组DNA,通过亚硫酸氢钠修饰将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶,PCR法预扩增包含该位点的HPV序列,针对该CpG位点5'端序列设计并合成延伸引物,再在同时含ddTrP和ddCTP的体系中进行延伸反应,用变性高效液相色谱法同时分离检测2种延伸产物.结果在SiHa细胞的延伸产物中仅能够检测到代表未甲基化位点的ddTTP延伸产物(保留时间6.7 min),而在CaSki细胞的延伸产物中不仅能够检测到ddTTP的延伸产物,还能检测到代表甲基化位点的ddCTP的延伸产物(保留时间6.3 min).结论所建立的引物延伸-变性高效液相色谱联合检测法能够同时检出感染细胞中非甲基化活化和甲基化失活的HPV病毒拷贝,灵敏度达1/500(0.2%).
- 白桦邓大君
- 关键词：甲基化
