国家自然科学基金(30572345)
- 作品数：17 被引量：47H指数：5
- 相关作者：方峰舒赛男李亚男刘兴楼李革更多>>
- 相关机构：华中科技大学吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 调节性T细胞在小鼠巨细胞病毒感染胚胎成纤维细胞机制中的免疫调控作用
- 2007年
- 目的体外研究调节性T细胞(Treg)在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)感染小鼠巨细胞病毒(MCMV)机制中的免疫调节作用。方法采用尼龙毛柱和MACSTreg磁珠法获得纯化的Treg和去除Treg的T细胞(TdepTreg),建立TdepTreg和添加Treg的T细胞与感染MCMV的MEF(MEFMCMV)体外共培养细胞模型。用蚀斑法检测共培养细胞上清中感染性病毒量;流式细胞术检测共培养体系中Tc1(CD3+CD8+IFN-γ+),Tc2(CD3+CD8+IL-4+),Th1(CD3+CD8-IFN-γ+),Th2(CD3+CD8-IL-4+)细胞比率变化;双抗体夹心ELISA法检测共培养细胞上清中转化生长因子-β(TGF-β)和IL-10蛋白表达水平。结果TdepTreg与MEFMCMV共培养3d后上清中感染性病毒量较感染对照组显著降低,同时效应性T细胞各亚群比率较非感染对照组显著增加。向TdepTreg-MEFMCMV体系中添加Treg可增加共培养体系中感染性病毒量,同时Tc1、Tc2和Th1细胞比率显著减少,且均与Treg比率存在剂量相关性;而Th2比率仅在Treg比率增至20%时显著低于感染对照组。添加Treg的共培养体系中IL-10和TGF-β蛋白表达水平随Treg比率增加而增高,与Treg存在正性相关。结论Treg可通过IL-10、TGF-β等途径抑制效应性T细胞的免疫保护作用,并且由于Treg抑制作用的不均衡性,导致Th1/Th2和Tc1/Tc2平衡失调,创造了一个利于CMV增殖的免疫环境。
- 李亚男方峰舒赛男甄宏周玉峰董永綏李革
- 关键词：巨细胞病毒调节性T细胞转化生长因子-Β白介素-10
- 大蒜新素对巨细胞病毒感染小鼠细胞因子TGF-β_1的影响被引量：2
- 2008年
- 目的探讨大蒜新素对全身播散型小鼠巨细胞病毒（MCMV）感染模型鼠转化生长因子β1（TGF—β1）基因转录和蛋白表达的影响。方法建立MCMV全身播散型感染BALB／c小鼠模型，将60只模型鼠随机分为安慰药组和大蒜新素（25mg·kg^-1·d^-1）治疗组，并设60只同期模拟感染小鼠为对照，随机分为模拟对照组和大蒜新素对照组，每组30只。于药物治疗后1，3，7，14和28d获取血清和脾细胞（体外培养刺激物为灭活MCMV抗原）。用双抗体夹心EUSA法检测血清和脾细胞培养上清TGF-β1水平；用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测脾细胞TGF—β1 mRNA表达强度。结果安慰药组在治疗后3d血清TGF—β1水平即显著上升达高峰，随后逐渐下降，但至28d仍明显高于模拟对照组；其脾细胞TGF-β1 mRNA和蛋白表达变化一致，均在治疗后3d明显增高，7d达高峰，28d回落到稍高于模拟对照组水平。与安慰药组比较，大蒜新素治疗组3d后血清和脾细胞培养上清TGF-β1水平均有降低，以治疗后3～7d差异最为显著；而脾细胞TGF-β1 mRNA表达与大蒜新素对照组相近。结论MCMV在急性感染期可诱导免疫抑制因子TGF—β1基因转录和蛋白表达明显增高，而大蒜新素治疗可完全阻遏病毒诱导的脾细胞TGF—β1基因转录，并明显降低模型鼠血清和脾细胞TGF-β1表达水平.
- 杨助锋方峰舒赛男朱单丹李亚男李革董永绥
- 关键词：大蒜新素巨细胞病毒
- T细胞免疫对小鼠星形胶质细胞巨细胞病毒感染的保护作用
- 2006年
- 目的:研究T细胞免疫对小鼠星形胶质细胞巨细胞病毒(CMV)感染时的免疫保护作用。方法:建立小鼠T细胞与感染巨细胞病毒的同系小鼠星形胶质细胞体外共培养的细胞模型。通过显微镜观察和绿色荧光染料CFSE标记后流式细胞术检测方法来判断T细胞克隆增殖情况;以ELISA检测共培养上清中IFNγ和TNFα的含量;通过观察星形胶质细胞感染CMV后特异性的细胞病变和PCR方法检测星形胶质细胞内CMVDNA的负荷量来了解T细胞针对CMV的免疫保护作用。结果:在共培养3d后,可见到少量的T细胞克隆形成,CFSE标记的方法显示发生过增殖的T细胞占T细胞总数的(6.68±0.61)%,与未加CMV刺激的对照组有显著性差异(P<0.01)。共培养上清中的IFNγ浓度为(22.9±3.4)ng/L,而对照组为<8ng/L(P<0.05)。但在试剂盒检测范围内各组均未检出TNFα。共培养的T细胞能够减少31.25%～75%的细胞病变产生,减少～75%的CMVDNA负荷量。共培养3d的培养细胞上清也具有免疫保护作用。而将具有免疫保护作用的T细胞与感染CMV的星形胶质细胞继续培养3d,发现T细胞的增殖明显减少(1.83±0.25)%,培养上清中未检出IFNγ,CMVDNA的负荷量无减少,提示T细胞的免疫功能受到抑制。结论:小鼠星形胶质细胞在感染CMV后能够刺激T细胞增殖活化;T细胞免疫能够发挥一定程度的保护作用,这种保护作用有部分是由分泌性的细胞因子介导的;T细胞活化后功能很快受到抑制,其中的机制有待进一步研究。
- 甄宏方峰周玉峰李革董永绥
- 关键词：巨细胞病毒感染T淋巴细胞细胞免疫星形胶质细胞
- 鼠巨细胞病毒感染小鼠感染性病毒滴度和基因表达的研究被引量：6
- 2011年
- 目的观察鼠巨细胞病毒(MCMV)全身播散感染小鼠唾液腺的感染性病毒滴度,唾液腺、肝、脾和肾MCMV DNA及mRNA水平,以了解MCMV感染小鼠易感组织和器官内的病毒状况。方法 30只BALB/c幼龄小鼠腹腔接种MCMV(Smith株),在感染后1、3、7、14、28、60、75、90和120 d,各随机处死3只小鼠。噬斑法检测唾液腺感染性病毒滴度,实时定量PCR和逆转录PCR(RT-PCR)分别检测唾液腺、肝、脾和肾内MCMV DNA水平及mRNA表达。结果感染后7 d开始,噬斑法在唾液腺内检测到MCMV,14 d达到高峰,28 d以后不能再检测到;唾液腺、肝、脾和肾MCMV DNA在感染后1 d就可检测到,并持续到感染后120 d;唾液腺MCMV mRNA在感染后45 d不能检测到,而肝和肾MCMV mRNA在感染后28 d,脾MCMV mRNA在感染后14 d不能检测到。结论 MCMV感染的幼龄小鼠在感染28 d后不再排毒,在感染45 d后病毒不再复制,而在长达120 d的急慢性感染期内,病毒长期存在。
- 刘兴楼舒赛男王慧张慧娟李革方峰
- 关键词：鼠巨细胞病毒小鼠
- 急慢性MCMV感染对小鼠脾细胞Foxp3/T-bet/GATA-3蛋白表达水平的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:在整体水平研究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠辅助性T细胞亚群Th1、Th2和调节性T细胞(Treg)分化特异性转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3蛋白表达水平的影响。方法:建立MCMV播散型感染模型,依据主要脏器内病毒滴度,确定感染后28天为本模型急、慢性期界定点。42只模型鼠分别于接种MCMV Smith株后第1、3、7、14、28、45天和60天各处死6只,分离脾细胞;另设42只正常小鼠作为模拟感染对照。Western blot法检测脾细胞中特异转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3蛋白表达水平。结果:MCMV感染后第3天T-bet蛋白表达显著增高达峰值,与模拟感染对照组比较有显著差异(P<0.01),随后下降,第28天后降至模拟感染对照组相当水平;而GATA-3蛋白表达在感染后第3天开始升高,第7天达峰值(P<0.01),第14天开始缓慢下降,但至第60天仍显著高于模拟感染对照组(P<0.05);Foxp3蛋白表达在感染后7天明显低于模拟感染对照组,第28天降至最低(P<0.01),第45天和60天表达明显上调,并显著高于模拟感染对照组水平(P<0.05)。结论:感染急性期,MCMV上调Th1/Th2特异性转录因子T-bet和GATA-3的蛋白表达;感染慢性期,MCMV诱导Treg特异性转录因子Foxp3蛋白表达上调,同时显著抑制T-bet和GATA-3蛋白表达,提示CMV诱导Foxp3表达增加可能是其抑制宿主抗病毒免疫,导致慢性持续性感染的重要原因。
- 李亚男方峰朱单丹舒赛男杨助峰李革
- 关键词：T-BETGATA-3FOXP3
- 大蒜新素对巨细胞病毒感染小鼠脾细胞TGF-β1和IL-10的抑制作用被引量：3
- 2010年
- 目的:研究大蒜新素对巨细胞病毒(CMV)感染鼠的免疫抑制性细胞因子TGF-β1和IL-10的影响,探讨大蒜新素的抗CMV机制。方法:建立非免疫抑制性鼠巨细胞病毒(MCMV)全身播散性感染小鼠模型;双抗体夹心ELISA法检测感染后1,3,7,14,28,45,60,75,90,120d正常对照组、病毒感染组和药物治疗组小鼠脾细胞培养上清中TGF-β1和IL-10水平的时序性变化。结果:MCMV感染后,TGF-β1和IL-10分泌均显著升高,并呈现出急慢性期两次高峰的特点。大蒜新素治疗对MCMV感染鼠各时间点TGF-β1水平均有下调作用,且对其急性期分泌高峰的抑制更明显。大蒜新素治疗对IL-10的急性期分泌高峰影响不明显,却显著下调慢性期IL-10的分泌高峰。结论:大蒜新素能显著抑制MCMV感染后TGF-β1和IL-10分泌,进而增强机体细胞免疫功能而有利于机体清除MCMV病毒,这可能是大蒜新素抗CMV的另一作用机制。
- 周华舒赛男杨助峰刘兴楼朱单丹方峰
- 关键词：巨细胞病毒大蒜新素TGF-Β1IL-10
- 鼠巨细胞病毒对小鼠调节性T细胞分化和效应性T细胞活化的影响被引量：3
- 2008年
- 目的在整体水平探讨小鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对小鼠调节性T细胞（Treg）亚群CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞分化和CD4^＋CD25^＋Foxp3^-效应性T细胞（TE）活化的影响。方法建立全身播散型MCMV感染小鼠模型，依据主要脏器内病毒滴度，确定感染后第28天为本模型急、慢性期界定点。42只小鼠分别于感染MCMV后第1、3、7、14、28、45和60天处死6只；另设42只小鼠作为对照。流式细胞术检测CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Treg和活化的CD4^＋CD25^＋Foxp3^-TE在脾单个核细胞中所占比率变化。结果MCMV感染急性期CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Treg比率持续降低，第28天左右降至最低值，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；随后直线上升，第45天高于基线，第60天升至峰值，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；CD4^＋CD25^＋Foxp3^-TE在感染后第3～7天高于对照组（P〈0．05），其后持续下降，在感染后第45天和第60天显著低于对照组水平（P〈0．05）。Treg／CD4^＋CD25^＋TE比率在感染后第3～14天显著降低（P〈0．05）；随后逐渐上升，在感染后第45天和第60天均显著高于对照组（P〈0．05）。结论MCMV可在慢性感染期诱导CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋Treg种群扩增，抑制CD4^＋CD25^＋Foxp3^-TE活化增殖，这可能是MCMV逃避特异性免疫而实现长期潜伏的机制之一。
- 李亚男方峰舒赛男朱单丹杨助峰李革董永绥
- 关键词：效应细胞FOXP3
- 大蒜新素降低鼠巨细胞病毒播散性感染小鼠病毒DNA载量研究被引量：3
- 2010年
- 目的用大蒜新素治疗鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)播散性感染小鼠至慢性期,检测小鼠唾液腺、肝、脾和肾组织内MCMV DNA载量动态变化,在整体水平上观察大蒜新素抗MCMV的长期疗效。方法BALB/c幼鼠60只,腹腔接种MCMVSmith株建立MCMV播散性感染模型,随机分为大蒜新素治疗组和模拟治疗组各30只,接种病毒后24 h,两组分别腹腔注射大蒜新素25 mg.kg-1.d-1和0.9%氯化钠注射液0.2 mL,qd,共120 d。于治疗后1,3,7,14,28,45,60,75,90和120 d,每组随机选择小鼠3只,取唾液腺、肝、脾和肾组织,采用real time PCR法检测组织内MCMV DNA载量。结果模拟治疗组小鼠唾液腺内MCMV DNA载量最高,在治疗后14 d(感染后15 d)达高峰;肝、脾和肾内病毒DNA载量治疗后7 d达峰值;治疗28 d(感染29 d)后,各组织内病毒DNA载量明显减少,尤其是肝、脾和肾组织病毒DNA呈持续低水平(进入慢性期)。与模拟治疗组比较,大蒜新素治疗组治疗后7,14和28 d唾液腺、脾和肾内MCMVDNA载量显著降低;治疗后7和14 d肝内病毒DNA载量明显降低。进入慢性期后,两组小鼠各脏器病毒DNA载量差异无显著性。结论大蒜新素长期治疗不能完全清除CMV,但在急性感染期(病毒增殖高峰期)能显著降低脏器内病毒DNA载量。
- 刘兴楼舒赛男罗丹李亚男王慧田佳方峰
- 关键词：大蒜新素巨细胞病毒播散性DNA载量
- 小鼠巨细胞病毒感染对调节性T细胞扩增的影响及机制被引量：1
- 2009年
- 目的在体内外水平研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对调节性T细胞(Treg)扩增的影响及其可能的机制。方法建立全身播散型MCMV慢性感染模型,分别采用Western blot法和流式细胞术动态检测小鼠脾细胞中Foxp3的蛋白表达强度和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率;模拟MCMV感染细胞的免疫环境,建立T淋巴细胞与MCMV感染的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)共培养细胞模型,在培养前和共培养3d后检测T淋巴细胞中的Foxp3蛋白表达水平及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率,RT-PCR方法检测MEF中转化生长因子(TGF)-βmRNA表达水平,双抗体夹心ELISA方法检测共培养上清中TGF-β蛋白表达水平。结果整体研究发现,MCMV在感染慢性期可显著增加T淋巴细胞中Foxp3的蛋白表达水平和CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率。体外细胞模型发现,MCMV感染在体外同样可以上调T细胞中的Foxp3蛋白表达和Treg细胞比率。TGF-β在MEF中的基因表达和上清中的蛋白表达在MCMV感染后显著增加。结论MCMV感染在体内外均可诱导Treg在数量上的扩增和功能上的活化;MCMV感染导致宿主细胞TGF-β表达水平升高,可能是其在外周诱导Treg种群扩增的重要机制之一。
- 李亚男周玉峰舒赛男刘兴楼葛海霞方峰
- 关键词：巨细胞病毒调节性T细胞转化生长因子Β
- CD4^＋CD25^＋调节性T细胞抑制效应性T细胞在MCMV感染中的免疫作用被引量：7
- 2008年
- 目的通过细胞水平探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）在T淋巴细胞与感染小鼠巨细胞病毒（MCMV）的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）共培养体系中发挥的免疫作用。方法建立小鼠T细胞与感染MCMV的同系MEF（MEFMCMV）体外共培养细胞模型。通过噬斑法检测共培养上清中感染性病毒量；Western blot方法检测辅助性T细胞亚群TH1／TH2特异性转录因子T-bet／GATA-3蛋白表达水平；ELISA法检测共培养上清中细胞因子IL4、IL-10和IFN-γ表达水平。结果去除Treg的T细胞（TdepTreg）与MEFMCMV共培养3d后可显著减少上清中的感染性病毒量；同时TH1／TH2上游特异性转录因子T-bet／GATA-3和下游细胞因子IL4、IL-10和IFN-γ的蛋白质表达水平显著升高。向共培养体系中添加Treg后病毒负荷量显著增加；T-bet／GATA-3和IFN-γ蛋白表达水平下降；IL-10蛋白表达水平在Treg比率为1％～2％时与TdepTreg组比较无显著差异，在Treg比率增至5％～20％时较TdepTreg组显著增加；而IL-4表达水平与TdepTreg组比较无显著差异，上述效应均与Treg添加比率成剂量相关性。结论巨细胞病毒感染小鼠成纤维细胞后能激活效应性T细胞增殖活化，而Treg可抑制效应性T细胞在MCMV感染中的免疫保护作用。
- 李亚男方峰甄宏舒赛男周玉峰董永绥
- 关键词：效应细胞GATA-3
