国家自然科学基金(31270883)
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
- 相关作者：张舟闵伟勇刘丽刘倩倩夏思远更多>>
- 相关机构：沈阳药科大学上海师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育委员会创新基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 辣木改善糖尿病及并发症的研究进展被引量：1
- 2018年
- 目的介绍药用植物辣木改善糖尿病及并发症的研究进展,为辣木药理机制研究提供参考。方法通过查阅国内外相关文献,对辣木改善糖尿病及并发症进行比较全面的总结和综述。结果总结了糖尿病的发展概况,糖尿病及并发症的种类;辣木的生物学特性,辣木的主要功能性成分;以及药用植物辣木改善糖尿病及并发症的研究进展。结论辣木作为补充和替代性药用植物,在改善糖尿病及并发症的方面有显著的作用效果,具有良好的应用前景,应深入探究其药理机制,为进入下一步开发利用提供参考。
- 高成王帆张舟
- 关键词：药用植物辣木糖尿病糖尿病并发症
- pBK-CMV ⊿-EGFP-SNAT2质粒载体构建及其表达鉴定(英文)
- 2012年
- SNAT2是SLC38基因家族编码的Na+偶联中性氨基酸转运蛋白中属于system A的成员之一.它在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用.增强型绿色荧光蛋白EGFP的连接对于SNAT2在细胞表达中的定位以及检测都有很大的帮助.采用PCR扩增和酶切技术将EGFP连接到质粒pBK-CMV⊿-SNAT2中SNAT2的N端.通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和测序验证得到pBK-CMV⊿-EGFP-SNAT2质粒载体,将构建好的质粒瞬时转染进人胚肾细胞(HEK293 cells)用Western blot和激光共聚焦电子显微镜检测EGFP-SNAT2的表达与亚细胞定位.结果表明:EGFP-SNAT2在细胞中正确表达并定位于细胞膜上.pBK-CMV⊿-EGFP-SNAT2质粒载体的构建对于进一步研究SNAT2的结构和功能具有重要意义.
- 李洋张舟
- 关键词：EGFP
- 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(SNAT2)多克隆抗体的制备
- 2013年
- 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(SNAT2)属于SLC38家族,参与小的中性氨基酸跨膜转运,在哺乳动物组织中广泛表达.SNAT2的功能紊乱可以导致许多神经性疾病,如阿尔茨海默症、帕金森症等.采用PCR方法扩增得到SNAT2氨基端75个氨基酸的编码序列,构建重组质粒pET28a-SNAT2-75aa,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达重组蛋白.利用组氨酸标签蛋白经镍柱亲和纯化后得到了纯度在95%以上的SNAT2氨基端蛋白SNAT2-75aa,将其作为免疫原免疫新西兰大白兔,从而获得SNAT2多克隆抗体.采用巯丙基琼脂糖凝胶6B(Thiopropyl sepharose)固定抗原亲和纯化法进一步对该抗体进行纯化,纯化后的抗体效价至少提高10倍.蛋白免疫印迹确定该抗体对SNAT2具有高度的特异性,表明SNAT2多克隆抗体制备的成功,为进一步研究SNAT2蛋白的结构和功能奠定了生化基础.
- 刘丽闵伟勇张舟
- 关键词：转运蛋白抗体蛋白纯化
- 大鼠中性氨基酸转运蛋白HA-SNAT3融合蛋白的构建和鉴定(英文)
- 2014年
- 钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT3是SLC38基因家族N系统的成员之一,主要在脑部和视网膜的星形胶质细胞中表达,负责转运谷氨酰胺,在脑部和肝脏的谷氨酸-谷氨酰胺循环中发挥重要作用.为了方便检测SNAT3在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接的方法将HA标签连接到质粒pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT3中大鼠SNAT3的N端,构建了真核生物表达载体pBK-CMVΔ-SNAT3.用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染进人胚肾细胞(HEK293T cells),通过Western blotting检测HA-SNAT3融合蛋白的表达.结果表明,HA-SNAT3能够正确在细胞膜上表达.pBK-CMVΔ-SNAT3表达载体的成功构建对于进一步研究SNAT3的结构和功能提供了有效方法.
- 陈琛张舟
- 大鼠谷氨酰胺转运蛋白SNAT1-EGFP融合蛋白的构建与鉴定
- 2017年
- 目的利用分子生物学方法构建大鼠谷氨酰胺转运蛋白1重组质粒p EGFP-N1-SNAT1并进行鉴定。方法对载体p EGFP-N1和质粒p BK-CMV(Δ[1098-1300])-SNAT1双酶切,纯化后连接,构建重组质粒p EGFP-N1-SNAT1。用Western blot检测融合蛋白的表达,采用免疫荧光检测SNAT1在细胞膜上的表达和定位。结果成功构建重组质粒p EGFP-N1-SNAT1并正常表达、定位于细胞膜上。结论重组质粒p EGFP-N1-SNAT1的成功构建为研究SNAT1的结构和功能提供了有效工具。
- 袁燕蒙葛玉丹张舟
- 关键词：融合蛋白增强型绿色荧光蛋白
- 噬菌体展示技术在多肽类药物开发中的应用被引量：3
- 2017年
- 目的对噬菌体展示技术在多肽类药物开发中的应用进行综述。方法通过查阅近年来国内外相关文献30篇,对其进行分析和归纳总结。结果近年来,利用噬菌体展示技术筛选特异性多肽取代抗体作为导向分子在导向药物研发中取得了很大的成功,目前已有很多运用噬菌体展示技术开发多肽类药物的成功案例。作者主要介绍通过噬菌体展示技术筛选特异性多肽在癌症、心功能障碍及神经性疾病、免疫性疾病和寄生动物及细菌病毒感染病等方面的应用。结论噬菌体展示技术是多肽类药物开发的重要手段,该技术越来越成熟,基于该技术筛选到的多种靶向多肽已经商业化或进入临床试验。
- 刘倩倩夏思远张舟
- 关键词：噬菌体展示多肽药物
- 大鼠谷氨酰胺转运蛋白EGFP-SNAT3融合蛋白的表达与鉴定
- 2014年
- SLC38基因家族编码的Na+偶联的中性氨基酸转运蛋白3(SNAT3)是System N中的一员.它在大脑谷氨酸-谷氨酰胺循环以及肝细胞质膜的谷氨酰胺转运等生理过程中发挥着重要作用.为了方便检测SNAT3在细胞膜上的表达与定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接技术将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与SNAT3的N末端连接,通过菌液PCR、酶切和DNA测序验证得到pBK-CMV(Δ[1098-1300])-EGFP-SNAT3重组真核表达质粒.用脂质体转染法将构建好的质粒瞬时转染进入人体胚肾细胞(HEK293T cells),利用激光扫描共聚焦显微镜和Western blot技术检测EGFP-SNAT3融合蛋白的表达和亚细胞定位.结果表明,EGFPSNAT3重组质粒在细胞中正确表达并定位于细胞膜上.EGFP-SNAT3重组质粒的成功构建将有助于日后进一步研究SNAT3的结构和功能.
- 李敏闵伟勇张舟
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白质粒构建
- N-糖酰胺酶F(PNGase F)在大肠杆菌中的表达纯化及其脱糖基化作用鉴定
- 2013年
- N-糖酰胺酶F(PNGase F)是由革兰氏阴性菌——脑膜炎脓杆菌分泌的一种分子量为34.8 kDa的去糖基化酶.本研究通过PCR技术扩增出945 bp的N-糖酰胺酶F基因,经酶切、连接,构建了大肠杆菌表达载体pET28a-PNGase F.将pET28a-PNGase F转入大肠杆菌BL21中,16℃诱导表达及Ni柱纯化后,SDS-PAGE鉴定,获得超过95%纯度的可溶性表达的N-糖酰胺酶F.对Na+依赖的中性氨基酸转运蛋白1(SNAT1)和2(SNAT2)进行脱糖基化作用检测,结果证明:纯化的N-糖酰胺酶F对SNAT1和SNAT2具有高效的脱糖基化作用.
- 闵伟勇刘丽张舟
