四川省卫生厅科研基金(070235)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- STAT1特异性siRNA真核表达载体的构建及体外转染优化被引量：1
- 2009年
- 目的:构建STAT1特异性siRNA真核表达载体,并转染人气道上皮细胞(16HBE)。方法:根据GeneBank数据库提供的STAT1基因两种变异体的共同核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链siRNA,再转化为能表达其小发卡结构RNA(small hairpin RNA,shRNA)的DNA序列,并将其连接到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的pGenesil-1.1真核表达载体上,将其转染至气道上皮(16HBE)细胞中,观察荧光表达,鉴定其转染效率。结果:通过酶切鉴定和序列测定,成功地构建了二条表达小干扰RNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功转染到(16HBE)细胞株中,质粒/脂质体为1μg:2μl条件,能有效地转染细胞,转染效率达到50%以上。结论:成功构建siRNA真核表达载体并能成功体外转染,为下一步气道炎症性疾病的基因沉默研究奠定了良好的基础。
- 贾晓琴熊瑛王宋平李平
- 关键词：小干扰RNA转染RNA干扰
