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‘变叶海棠’幼叶cDNA文库构建及CHS基因克隆被引量：4: 2011年; 为了理解苹果类黄酮代谢的分子机制,以富含类黄酮‘变叶海棠’苹果幼叶为材料,利用SMART法构建一个苹果叶片全长cDNA文库。初级文库滴度为2.28×104 cfu/mL,库容为3.30×106个独立克隆,重组率100%,插入片段平均长度大于1.5kb。并对随机取16个重组子进行测序,经分析完整全长cDNA为7条。并从测序中获得一个查尔酮合酶(Chalcone sythase,CHS)基因,该基因cDNA全长1548bp,有一个1 170bp的开放阅读框,编码含389个氨基酸残基的蛋白,蛋白的理论分子质量为42.44KDa,等电点5.65,该基因与已知苹果CHS基因高度同源。并构建该基因植物表达载体,用冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105。; 张利义张彩霞康国栋田义王强王强; 关键词：CDNA文库 CHS基因

苹果种间杂种腐烂病抗性QTL定位: 苹果腐烂病[Valsa ceratosperma(Tode et Fr.)Maire]是中国苹果三大病害之一,在各苹果产区都有发生。苹果树一旦感染该病,发病轻者削弱树势、降低产量,重者树枝枯死、全树死亡。苹果腐烂病在生产...; 谭贻王忆张新忠李天红韩振海; 关键词：苹果苹果腐烂病 QTL

苹果MdGLRs家族基因生物信息学鉴定和表达分析被引量：9: 2012年; 利用生物信息学策略对苹果MdGLRs家族基因编码蛋白的氨基酸序列的基本特征、二级结构、跨膜区域、亲疏水性、基因亚细胞定位及保守结构域进行了预测和分析,与拟南芥AtGLRs家族的20个基因进行了氨基酸序列比对和进化树分析,并对这些基因在不同营养生长器官中进行了表达分析。结果表明,苹果MdGLRs家族包含32个基因,分为3个亚族,大部分基因编码800个氨基酸以上,多含有3个跨膜区域,二级结构主要以α–螺旋、无规则卷曲、折叠延伸链为主;亚细胞定位预测发现,MdGLRs蛋白主要定位在内质网和质膜上;MdGLRs蛋白的保守结构域是S1-M1-M2-M3-S2-M4;大多数基因在根、茎、叶中普遍都有表达,在叶中的表达量最高。; 罗华胡大刚张连忠郝玉金; 关键词：苹果谷氨酸受体生物信息学

湖北海棠MhWRKY42基因克隆及表达分析被引量：3: 2013年; 从湖北海棠上克隆到1个WRKY基因,开放阅读框(ORF)长度为1 818个核苷酸,编码606个氨基酸。该基因氨基酸序列与拟南芥AtWRKY42的一致性为39.38%,具有WRKY基因家族典型保守结构域,即N端为WRKYGQK,C端为Cx4-5Cx22-23HxH;蛋白三级结构和拟南芥AtWRKY42相似,具有4个β折叠;系统进化树上与AtWRKY42聚在同一分支,属于WRKY基因家族GroupⅡb成员,命名为MhWRKY42(GenBank登录号:JX112905)。实时荧光定量RT-PCR分析表明,MhWRKY42基因在各个器官中都有表达,其中在果实中表达量最高,根和总花次之;在花中,以花萼表达量最高,子房和雄蕊次之;其受盐、低温、苹果白粉病诱导表达;外源IAA处理诱导其下调表达;而MhWRKY42基因表达受ABA、水分胁迫的影响小。; 罗昌国乔玉山渠慎春张计育王三红王宏刘丹章镇; 关键词：湖北海棠 WRKY转录因子基因克隆胁迫

湖北海棠5A基因进化与表达分析: 2011年; 以水杨酸(SA)诱导的湖北海棠双链cDNA为模板,克隆湖北海棠5A基因并对其序列进行比对分析,用邻位法构建进化树;以根、茎、叶等器官的单链cDNA为模板、以半定量及NCBI数据库相关EST分析研究其5A基因的表达特性,以探讨湖北海棠真核生物蛋白翻译起始因子5A基因序列、表达及进化的相关信息。结果表明:(1)湖北海棠5A基因编码框长度为477个核苷酸,编码159个氨基酸,其序列与部分已报道的双子叶植物一致性达91%,与单子叶植物、细菌、古细菌、藻类一致性分别为96%、55%、70%、63%。(2)蛋白的三级结构显示湖北海棠5A蛋白与拟南芥5A蛋白也十分相似;基因进化分析显示湖北海棠5A基因沿着细菌、古细菌、藻类的进化路径,最后与月季聚在同一分枝中。(3)基因表达分析表明,湖北海棠5A基因不仅在根、茎、叶、花、果实、种子等器官中表达,而且在不同的发育时期和各种胁迫条件下表达,具有组成性表达的特点。; 罗昌国乔玉山张计育薛华柏高志红渠慎春章镇; 关键词：湖北海棠基因进化基因表达

湖北海棠类甜蛋白基因MhPR5的克隆与表达特性分析被引量：8: 2013年; 从基因组DNA及经水杨酸处理的全长cDNA文库中分别克隆获得湖北海棠〔Malus hupehensis(Pamp.)Rehd.〕类甜蛋白基因MhPR5的全编码区序列,并对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量RT-PCR技术分析了该基因在湖北海棠各组织中的表达特性以及经非生物胁迫(200 mmol.L-1NaCl和4℃低温)和生物胁迫〔苹果轮纹病病原菌(Physalospora piricola Nose)和苹果蚜虫(Aphis citricola van der Goot)〕后MhPR5基因的表达特性。结果表明:克隆获得的MhPR5基因全编码区的cDNA序列长度为741 bp,编码246个氨基酸残基;该基因的基因组DNA序列长度为1 106 bp,包含1个内含子;该基因编码的蛋白质相对分子质量为25 520,等电点为pI 4.72。MhPR5基因的核苷酸序列与苹果(M.domestic Borkh.)、梨〔Pyrus pyrifolia(Burm.f.)Nakai〕和桃〔Prunus persica(Linn.)Batsch.〕PR5基因核苷酸序列的同源性分别为98%、95%和82%,该基因编码的氨基酸序列与苹果、梨和桃PR5基因编码的氨基酸序列的同源性分别为97%、94%和52%。MhPR5基因编码的蛋白质含有16个保守的半胱氨酸残基和5个保守的带负电荷的氨基酸残基,在N端还含有1个由25个氨基酸残基组成的信号肽。MhPR5基因在湖北海棠组培苗的根、茎和叶中均能表达,在根中的相对表达量最高、叶中最低;生物和非生物胁迫均可诱导MhPR5基因的表达,说明MhPR5基因在湖北海棠抵御生物和非生物胁迫过程中可能具有非常重要的作用。; 张计育渠慎春乔玉山章镇郭忠仁; 关键词：湖北海棠克隆生物胁迫非生物胁迫

Genome-wide identification of the radiation sensitivity protein-23(RAD23)family members in apple(Malus×domestica Borkh.)and expression analysis of their stress responsiveness被引量：1: 2017年; Radiation sensitivity proteins-23 （RAD23） are DNA repair factors participate in the ubiquitin/proteasome system （UPS）. Although the genome-wide analysis of RAD23 family members has been conducted in some species, little is known about RAD23 genes in apple （Malusxdomestica Borkh.）. We analyzed this gene family in M. domestica in terms of genomic locations, protein and promoter structures, and expressions in response to stresses. Various members showed a ubiqui- tous pattern of expression in all selected apple parts. Their expressions were altered under chilling, heat, and hydrogen peroxide treatments, as well as abscisic acid （ABA） treatment and water deficiency, suggesting their possible roles in plant stress responses. These results provide essential information about RAD23 genes in apple and will contribute to further functional studies.; WANG NaGONG Xiao-qingMA Feng-wang; 关键词：MALUS

苹果抗ASPV病毒RNAi载体构建及转化砧木M26的研究被引量：3: 2016年; 为获得抗病毒的转基因植物新材料,采用同源重组法构建了抗苹果茎痘病毒的植物表达载体,并对苹果砧木材料M26进行了遗传转化,成功获得了转基因阳性植株。首先以感病的皇家嘎拉叶片为材料,反转录合成c DNA第一链,采用PCR方法克隆获得了489 bp的ASPV外壳蛋白基因的保守片段,通过TOPO克隆技术将该基因片段连接进入载体p ENTR/SD/D,构建了入门克隆载体p EN-ASPV,再通过LR反应置换该片段连接进入目标载体p Hellsgate12,构建了RNAi植物表达载体Phe-ASPV,并采用冻融法转入根癌农杆菌菌株EHA105中,获得了可用于植物遗传转化的工程菌EH-ASPV。采用农杆菌介导的方法转化苹果砧木M26叶盘,经抗生素筛选和脱菌培养获得了Kan抗性芽,进一步进行生根培养后获得了完整的Kan抗性植株,对生根植株提取总RNA后RT-PCR检测结果显示,RNAi表达载体上携带的外源基因片段(489 bp)已成功转入苹果砧木材料M26中,并在转基因植株内RNA水平上得到表达。获得的转基因新材料,为进一步通过病毒接种进行抗病性评价及抗病毒分子育种奠定了基础。; 田莉莉牛良; 关键词：苹果茎痘病毒 CP基因 RNAI载体

湖北海棠MhRAR1基因的克隆与表达分析: RAR1(required forMla12 resistance)是大麦抗白粉病基因和多种植物抗病(resistance,R)基因介导的抗病信号途径中的重要信号元件。RAR1基因最早利用突变体发现并从大麦中分离,明确了...; 张计育渠慎春乔玉山郭忠仁章镇; 关键词：湖北海棠基因表达; 文献传递

苹果MYB12基因的克隆及生物信息学分析: 2017年; 以野生型苹果"丽江山荆子"果皮为材料,利用对已公布的"金冠"苹果基因组的生物信息学分析,设计1对特异性引物,克隆了MdMYB12转录因子,其基因片段全长为1 042bp,在对其进行生物信息学分析后发现,包含873bp开放阅读框(ORF),编码290个氨基酸。对拟南芥127个MYB基因家族与所克隆的MdMYB12基因构建系统进化树发现,相对于拟南芥中其他MYB基因家族其他基因MdMYB12基因与AtMYB12、AtMYB11及AtMYB111缘关系较近处于同一进化分支上。; 周兰张利义朴永振朴宇刘冰雁; 关键词：苹果克隆生物信息学分析

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国家高技术研究发展计划(2011AA100204)

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