国家自然科学基金(81102428)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 蛋白激酶A对小鼠皮层神经元酸敏感离子通道的调节
- 2013年
- 目的 :探讨蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)对小鼠皮层神经元酸敏感离子通道(acid sensing ion channels,ASICs)功能的影响及机制。方法:取原代培养小鼠皮层神经元,通过应用钙影像、全细胞膜片钳、免疫荧光和Western Blot等技术,分别观察PKA激动剂和抑制剂对ASICs功能的影响及机制。结果:(1)在给予PKA激动剂或抑制剂前神经元ASICs电流幅值约为(224.2±17.59)pA(n=15),预孵育PKA激动剂forskolin(10μmol/L)使电流幅值减小为(108±14.67)pA(n=9),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),而预孵育PKA抑制剂PKAI(5μmol/L)则使电流幅值增加为(306.3±22.9)pA(n=12),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);(2)在给予PKA激动剂或抑制剂前,酸诱导的胞内钙△F/F值为(0.708±0.07)(n=20),PKA激动剂forskolin(10μmol/L)使其减少为(0.140±0.013)(n=17),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),PKA抑制剂PKAI(5μmol/L)使其增加为(0.978±0.108)(n=19),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);(3)在加入forskolin或PKAI 24 h后,神经元ASIC1总荧光密度无明显改变(P>0.05),但神经元ASIC1膜荧光密度从对照组的(78.58±7.42)(n=32)减少到forskolin孵育后的(31.41±3.38)(n=57),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),而PKAI孵育后神经元ASIC1膜荧光密度增加到(118.29±11.50)(n=34),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 :PKA通过影响ASICs膜分布负性调节小鼠皮层神经元ASICs电流及由酸诱导的胞内钙增加。
- 黄超胡壮丽张伟
- 关键词：皮层神经元酸敏感离子通道蛋白激酶A电流钙离子
- 静息态和活化态星形胶质细胞ASICs亚细胞分布研究
- 2013年
- 目的:探讨酸敏感离子通道(acid sensitive ion channels,ASICs)在大鼠静息态和活化态星形胶质细胞亚细胞分布变化及调控。方法:取大鼠静息态和活化态星形胶质细胞,通过应用免疫荧光、全细胞膜片钳和Western Blot等技术,观察ASICs在静息态和活化态星形胶质细胞亚细胞分布变化及可能机制。结果:(1)ASICs在静息态和活化态星形胶质细胞分别主要分布于细胞核或胞质/胞膜。以ASIC1为例进行分析,发现ASIC1胞核荧光密度在静息态和活化态星形胶质细胞分别为(54.32±1.29)(n=36)和(22.27±0.96)(n=34),而ASIC1胞质/胞膜荧光密度在这两种星形胶质细胞分别为(6.14±0.39)(n=38)和(37.45±1.31)(n=36),这种分布差异在功能学上表现为ASIC1电流的增加,即ASIC电流由静息态的10%增加到活化态的30%;(2)静息态和活化态星形胶质细胞之间ASICs蛋白表达总量差异无统计学意义;(3)活化态星形胶质细胞炎症指示蛋白诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达较静息态星形胶质细胞显著增多;用小胶质细胞原性炎症因子白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)刺激静息态星形胶质细胞,可使静息态星形胶质细胞ASIC1从胞核转向胞质/胞膜。结论:ASICs在静息态星形胶质细胞主要分布于胞核,而在活化态星形胶质细胞主要分布于胞质/胞膜;IL-1β可能调控星形胶质细胞ASICs由胞核转移至胞质/胞膜。
- 黄超张伟
- 关键词：星形胶质细胞胞质胞膜酸敏感离子通道
- 热休克蛋白70激动剂SW02对脂多糖诱导的巨噬细胞iNOS表达的调控及机制被引量：2
- 2016年
- 目的观察热休克蛋白70(Hsp70)激动剂SW02对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及一氧化氮(NO)生成的作用,并探讨其作用机制。方法采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症模型,将细胞随机分为DMSO组、DMSO+LPS(1 mg·L^(-1))组、SW02组和SW02+LPS(1 mg·L(-1))组。Western blot法测定蛋白表达;Griess试剂法测定NO含量;实时定量PCR法测定iNOS mRNA表达;染色质免疫共沉淀法(ChIP)检测核因子κB(NF-κB)与iNOS启动子结合能力变化。结果 SW02明显抑制由LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS蛋白、mRNA表达和NO释放(SW02+LPS组iNOS表达量和NO生成量明显低于DMSO+LPS组,P<0.01或P<0.05);SW02不影响由LPS诱导的RAW264.7细胞κB-α抑制子(IκB-α)降解(SW02+LPS组IκB-α表达量与DMSO+LPS组比差异无显著性,P>0.05)和NF-κB入核(SW02+LPS组细胞质、细胞核NF-κB表达量与DMSO+LPS组比差异无显著性,P>0.05);SW02明显抑制由LPS诱导的NF-κB与iNOS启动子结合(SW02+LPS组NF-κB与iNOS启动子结合量明显低于DMSO+LPS组,P<0.05)。结论 SW02抑制巨噬细胞iNOS表达和NO生成,其机制可能与抑制NF-κB与iNOS启动子结合有关。
- 花慧莲黄超
- 关键词：热休克蛋白70诱导型一氧化氮合酶RAW264.7细胞
