国家自然科学基金(30800511)
- 作品数：9 被引量：38H指数：4
- 相关作者：施瑞华朱宏郝波唐娜娜金海林更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院南京医科大学南通大学第二附属医院更多>>
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- 血管内皮钙黏附素下调对食管鳞癌细胞血管生成拟态、增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2012年
- 背景:血管内皮钙黏附素(VE-cad)作为血管生成拟态的重要调控分子在多种高侵袭性肿瘤中均存在表达,参与肿瘤的发生、发展过程。前期研究发现食管鳞癌细胞中亦存在VE-cad表达。目的:探讨微小RNA(miRNA)干扰技术下调VE-cad对食管鳞癌细胞血管生成拟态形成、细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:将已成功构建的VE-cad miRNA干扰质粒稳定转染Eca109、TE13细胞,同时设置阴性对照组(转染空质粒)和空白对照组(未转染)。荧光显微镜观察单克隆转染效率,三维培养观察细胞管腔样结构形成的能力,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测VE-cad、EphA2、LN5γ2 mRNA和蛋白表达,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡。结果:荧光显微镜显示Eca109、TE13细胞稳定转染效率均达90%以上。与阴性对照组和空白对照组相比,干扰组细胞管腔样结构数目明显减少(P<0.01),VE-cad、EphA2、LN5γ2 mRNA和蛋白表达明显受抑(P<0.01),细胞增殖能力明显下降(P<0.05),凋亡率明显增高(P<0.05)。结论:miRNA干扰技术能有效抑制食管鳞癌细胞Eca109、TE13的VE-cad表达。VE-cad通过下调EphA2和LN5γ2表达抑制血管生成拟态的体外形成,并影响细胞增殖和凋亡。VE-cad可能成为食管鳞癌分子靶向治疗的新靶点。
- 王璐施瑞华王频丁宗励朱宏凌亭生华杰冯亚东
- 关键词：食管肿瘤RNA干扰血管生成拟态细胞增殖
- 缺氧诱导因子-1α和己糖激酶-Ⅱ在食管鳞状细胞癌中的表达及对糖酵解的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨人食管鳞状细胞癌中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和已糖激酶-Ⅱ（HK-Ⅱ）的表达变化及对糖酵解的影响。方法缺氧条件（1％氧浓度）下培养TE13及Eca109细胞，设置不同缺氧时间（分别为6、12、24、48h），并以常氧培养（20％氧浓度）为对照。Western印迹检测HIF-1α及HK-Ⅱ的蛋白表达变化；经RNA干扰技术特异性静默HIF-1α，利用实时定量PCR及Western印迹检测HIF-1α和HK-Ⅱ的表达变化；分光光度法检测常氧和缺氧条件下细胞培养液中细胞的乳酸浓度变化。结果①缺氧条件下，TE13及Eca109细胞中HIF-1α表达均随缺氧时间延长而逐渐升高（P〈O．05），在缺氧12h表达达到高峰，后表达又随时间延长而下降。TE13及Eca109细胞缺氧12h后HK-Ⅱ表达均较常氧培养明显增强（P〈0．05）。②实时定量PCR法检测显示，常氧条件下被干扰的TE13／shRNA和Eca109／shRNA细胞中HIF-1dRNA表达量较未干扰的TE13、Eca109细胞明显减弱（P〈O．05）。HK-ⅡRNA表达结果与HIF-1 RNA一致。③常氧及缺氧培养时，HK-Ⅱ蛋白在TE13／shRNA和Eca109／shRNA细胞的表达均较未干扰的TE13、Eca109细胞明显减弱，差异有统计学意义（P〈0．05）。④缺氧时TE13和Eca109细胞乳酸分泌量为14．707±3．594和15．062±3．901，较常氧时增多（6．070±1．839和6．891±1．592，P〈0．05）。TE13／shRNA、Eca109／shRNA乳酸分泌量较未静默TE13、Eca109细胞显著减少，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论食管鳞癌中HIF-1α及HK—Ⅱ在缺氧条件下表达明显增强，HK—Ⅱ表达及乳酸浓度与HIF-ICt表达密切相关，HIF-1α可能通过HK-Ⅱ影响细胞的糖酵解水平。
- 唐娜娜朱宏金海林张伟锋何桂钧郝波施瑞华
- 关键词：糖酵解缺氧诱导因子-1食管肿瘤
- 雷帕霉素对食管癌细胞缺氧诱导因子-1α和糖酵解途径的影响被引量：3
- 2013年
- 目的:观察雷帕霉素(Rapamycin)对人食管癌细胞TE1、TE13中HIF-1α的抑制作用及糖酵解途径相关基因表达的影响;分析mTOR信号通路与糖酵解途径的关系。方法:分别取TE1、TE13细胞株,常氧及缺氧条件下分别予以Rapamycin作用后,将两株细胞各分为四组:①正常对照组,即未处理组(N);②缺氧处理组(H);③常氧Rapamycin处理组(N+R);④缺氧Rapamycin处理组(H+R)(即雷帕霉素预处理1小时后缺氧培养)。采用实时定量PCR检测细胞中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白及己糖激酶Ⅱ(HK-Ⅱ)、葡萄糖载体蛋白1(GLUT-1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)等糖酵解相关基因mRNA的表达,Western印迹检测HIF-1α及HK-Ⅱ、GLUT-1、LDHA等糖酵解相关基因蛋白的表达。结果:缺氧处理后与正常对照组相比,HIF-1α、HK-Ⅱ、GLUT-1蛋白表达及mRNA明显增强,而LDHA表达无明显变化;Rapamycin预处理后,正常对照组及缺氧处理组HIF-1α、HK-Ⅱ、GLUT-1的表达均明显降低,LDHA无明显变化。结论:常氧及缺氧条件下,雷帕霉素可抑制食管癌细胞HIF-1α及糖酵解相关基因的表达,提示阻断mTOR通路可抑制食管肿瘤细胞的糖酵解途径。
- 何桂钧朱宏施瑞华
- 关键词：雷帕霉素MTOR缺氧诱导因子-1Α细胞缺氧
- EGF对食管鳞癌细胞HIF-1α基因表达及功能的影响被引量：5
- 2013年
- 目的研究表皮生长因子(EGF)对人食管鳞癌细胞株HIF-1α基因表达及功能的影响及其对血管生成拟态相关基因表达的影响。方法将人食管鳞癌细胞株Eca-109、TE13分为试验组(加入含EGF 100μg/L的无血清DMEM培养液)和对照组(加入无血清DMEM培养液),分别于常氧及缺氧下培养。应用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞HIF-1α蛋白与血管内皮钙黏附素(sVE-cadherin)、层黏连蛋白(Laminin5γ2)、酪氨酸蛋白激酶受体(EphA2)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因蛋白的表达,应用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测HIF-1α与sVE-cadherin、EphA2和MMP-2 RNA的表达,基质胶(Matrigel)三维培养显微镜下观察并计数两组细胞的管状结构。结果常氧和缺氧情况下,与对照组比较,试验组Eca-109、TE13细胞HIF-1α蛋白与sVE-cadherin、Laminin5γ2、EphA2基因蛋白的表达及sVE-cadherin、EphA2 RNA水平的表达均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);而对MMP-2基因蛋白的表达及RNA水平的表达无明显影响,差异无统计学意义(P>0.05)。Eca-109、TE13细胞均可形成典型的管网状结构,试验组在EGF作用下数目增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在常氧和缺氧情况下EGF均可促进Eca-109、TE13细胞HIF-1α蛋白与sVE-cadherin、EphA2等基因蛋白及RNA的表达,均可形成典型的管网状结构,且EGF能有效促进肿瘤细胞体外血管生成拟态形成。
- 潘琦施瑞华朱宏凌亭生郝波
- 关键词：表皮生长因子食管肿瘤基因表达调控
- 缺氧对食管癌细胞缺氧诱导因子-1α及己糖激酶表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨不同缺氧程度对食管癌细胞株TE1中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)及糖酵解关键酶表达的影响。方法 TE1细胞分别在正常氧分压和缺氧条件下培养,缺氧时间设定为6、12、24及48h,使用Western blot方法检测缺氧培养不同时间后细胞中HIF-1α及糖酵解关键酶己糖激酶II(Hexokinase-II,HK-II)的蛋白水平表达变化。结果常氧及缺氧条件下TE1细胞中HIF-1α及HK-II均有表达,缺氧后表达均较常氧培养时明显增强,且随缺氧时间不同而呈先增多后减少的动态变化。结论低氧能够增加食管癌细胞中HIF-1α及HK-II表达而促进糖酵解进程,联合抑制HIF-1α和糖酵解酶可能成为治疗食管癌的潜在的靶点。
- 唐娜娜唐娜娜施瑞华
- 关键词：缺氧诱导因子-1Α糖酵解食管癌
- 食管胃底静脉曲张破裂出血患者短期预后的危险与保护因素分析被引量：7
- 2015年
- 目的分析食管胃底静脉曲张破裂出血患者短期预后的危险与保护因素。方法将2011年5月~2013年5月收治的175例肝硬化食管胃底静脉曲张破裂出血患者分为出院时生存（生存组）164例和住院期间死亡（死亡组）11例,并分析两组的临床资料。结果生存组患者仅1次出血比例明显高于死亡组（P〈0.05）,≥2次比例则明显低于死亡组（P〈0.05）;Child-Push分级A、B级比例均明显比死亡组高（P〈0.05）,C级比例明显比死亡组低（P〈0.05）;MELD评分明显比死亡组低（P〈0.05）;血白细胞计数、国际标准化比率（INR）均明显比死亡组低（P〈0.05）;血钠明显比死亡组高（P〈0.05）,凝血酶原时间明显比死亡组短（P〈0.05）。结论肝硬化食管胃底静脉曲张破裂出血的短期预后危险因素包括出血次数、Child-Push分级、MELD评分、血白细胞计数、凝血酶原时间;保护因素包括血钠、血白蛋白。
- 张莉朱宏
- 关键词：食管胃底静脉曲张破裂出血短期预后
- RNA干扰HIF-1α对食管癌细胞糖酵解相关基因表达的影响被引量：10
- 2010年
- 目的:探讨常氧及缺氧培养对RNA干扰的缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及糖酵解相关基因表达的影响。方法:选择3组细胞分别为食管鳞癌Eca-109细胞稳定转染HIF-1α siRNA及空质粒的Eca-109细胞,予以常氧和缺氧培养,缺氧培养时间分别为6、12、24、48h,采用Western blot检测HIF-1α蛋白表达,Western blot和RT-PCR检测3组细胞常氧和缺氧条件下糖酵解相关基因(Glut-1、LDH-A、HK-Ⅱ)的表达,分光光度法分别测定3组细胞常氧和缺氧培养下胞液中乳酸脱氢酶(LDH)、己糖激酶(HK)酶活性。结果:Eca-109细胞缺氧条件下培养,HIF-1α蛋白表达较常氧时增高,干扰细胞常氧下HIF-1α几乎无表达,缺氧后亦无增强。常氧和缺氧条件下,干扰细胞Glut-1、LDH-A、HK-Ⅱ mRNA和蛋白表达较未干扰细胞明显减弱(P<0.05),干扰细胞胞液LDH、HK活性较未干扰细胞明显减少(P<0.05)。结论:RNA干扰能抑制Eca-109细胞的HIF-1α基因表达,进而不同程度减少Glut-1、LDH-A、HK-Ⅱ糖酵解相关基因的表达。
- 张伟锋朱宏曾楷峰金海林施瑞华郝波
- 关键词：糖酵解RNA干扰缺氧诱导因子-1Α
- 江苏汉族人群白细胞介素-23受体基因多态性与炎症性肠病及其表型的关系被引量：7
- 2011年
- 目的探讨江苏汉族人群中IL一23受体基因多态性与炎症性肠病及其表型的关系。方法选取178例炎症性肠病患者[溃疡性结肠炎（UC）135例，克罗恩病（CD）43例]和134例健康对照，检测IL-23受体基因的6个单核苷酸多态性位点（rs11805303、rs1343151、rs11465804、rs11209032、m17375018、rs11465788）的基因多态性，分析其与UC、CD各临床表型的关联性。结果rs11805303的T等位基因频率在UC中为60．4％，高于对照组（50．4％），P=0．020。UC的基因一表型分析显示，rs17375018位点的基因多态性与结肠炎活动性指数（UCDAI）即UC的严重程度相关，携带等位基因G的患者倾向于发生轻度UC。CD的基因一表型分析显示，rs17375018位点的A等位基因频率在诊断年龄≤25岁的CD患者中明显高于诊断年龄〉25岁的患者（41．7％比22．0％，P=0．050，OR=2．532，95％C／0．988～6．494）；rs11805303位点的基因型与CD的诊断年龄、病变范围有关联性（P值分别为0．039和0．044）；rs17375018位点的A等位基因携带者发生肠外表现的几率较等位基因G携带者低（23．1％比46．7％，P=0．040，OR=2．917，95％CI 1．027～8．283）。结论在江苏汉族人群中，rs11805303是UC的易感基因位点，同时rs11805303、rs17375018位点的基因多态性与UC、CD的临床表型有关联性。
- 赵晓丹沈方程张红杰沈秀云王亚民杨晓钟屠惠明邰雅宏施瑞华
- 关键词：多态性单核苷酸炎性肠疾病
- 小干扰RNA抑制缺氧诱导因子-1α表达对食管癌细胞糖酵解的影响
- 2013年
- 目的观察人食管鳞状细胞癌细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对糖酵解的影响并探讨其可能的作用机制。方法TEl3、Ecal09细胞常氧（O2体积分数为0．20）及缺氧（0z体积分数为0．01）培养，缺氧时间为6、12、24、48h，RNA干扰法稳定静默HIF-1α获得TE13/小干扰（si）HIF、Ecal09／siHIF细胞，培养方法和时间同TEl3、Ecal09。Western印迹法检测HIF-1α的表达变化；分光光度法检测培养上清液中乳酸浓度变化；实时定量PCR检测葡萄糖转运蛋白-1（GLUT-1）、乳酸脱氢酶A（LDHA）的mRNA表达变化；Western印迹法检测GLUT-1、LDHA蛋白表达变化。t或t’检验用于分析不同缺氧时间对HIF-1a蛋白表达的影响，组间差异比较采用单因素方差分析。结果TEl3、Ecal09细胞缺氧后HIF-1α表达增强，12h达高峰（t=6．11，8．31，P〈0．05）。常氧条件下，TEl3／siHIF和Ecal09／siHIF细胞乳酸分泌分别为（1．24±0．33）、（1．28±0．37）mmol／L，较TEl3和Ecal09细胞显著下降[（3．25±1．34）、（4．91±1．69）mmol／L，t=2．53、3．59，P均〈0．053；TEl3、Ecal09细胞缺氧后乳酸分泌增多[（6．48±1．73）、（8．02±1．95）mmol／L，t=2．715、2．050，P均〈0．053，TEl3／siHIF、Ecal09／siHIF细胞缺氧后乳酸分泌无明显增多（P〉0．05）。TEl3／siHIF和Ecal09／siHIF细胞中，GLUT-1、LDHA的mRNA表达均明显受抑（常氧：t=6．98、3．92、7．25、3．67，P均〈0．05），GLUT-1蛋白表达明显减弱（常氧：t=4．57、16．56，缺氧：t=6．19、6．09，P均〈0．05），LDHA蛋白表达稍减弱（P〉0．05）。结论抑制人食管鳞状细胞癌中HIF-1a可降低细胞的糖酵解水平，该途径可能涉及GLUT-1、LDHA的表达抑制；除HIF-1α以外，LDHA的蛋白表达可能同时存在其他调控因素。
- 唐娜娜朱宏何桂钧郝波施瑞华
- 关键词：缺氧诱导因子1,Α亚基糖酵解
