国家科技重大专项(2002BA514A18)
- 作品数：3 被引量：51H指数：3
- 相关作者：王志亮宋翠平张松林汪招雄陈焕春更多>>
- 相关机构：农业部动物检疫所华中农业大学青岛市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家科技部农业科技成果转化资金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 甲型流感病毒荧光RT-PCR检测方法的设计和检定被引量：6
- 2005年
- 目的 设计甲型流感病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法并对其进行检定。方法 用DNAStar和PrimerPremier5. 0软件设计甲型流感病毒荧光PCR检测所用引物和探针 ;在GenBank中进行Blast以及电子对比证明其具有高度的特异性和保守性 ;和标准RT-PCR进行比较 ,检测此方法的灵敏度。结果 所设计的引物和探针高度特异和保守 ,灵敏度比标准RT-PCR方法高 3～ 27倍 ,并且反转录和PCR可合并为一步。结论 设计了甲型流感病毒TaqMan检测方法 ;该方法具有特异。
- 陈继明王志亮逄增昌孙承英孙映雪宋翠平弋英
- 关键词：甲型流感病毒荧光PCRRT-PCR方法荧光RT-PCR检测反转录
- 用多重PCR鉴别猪伪狂犬病野毒与疫苗毒的研究被引量：41
- 2005年
- 根据基因库中的猪伪狂犬病病毒(PRV)各基因的序列,设计了与PRV的 gB、gD、gE基因序列互补的3对引物。对样品中的PRV DNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为549 bp(gB)、429 bp(gD)、366 bp(gE)。用这3对引物对三基因缺失疫苗毒的样品DNA模板进行多次多重 PCR扩增,均能稳定得到与设计相符合的2条特异性条带。敏感性试验结果表明,多重 PCR可以检测到 106 pg三基因缺失疫苗毒或756 pg PRV野毒的核酸模板量。特异性试验结果表明,以正常对照细胞及猪圆环病毒和猪细小病毒DNA为模板进行多重PCR扩增,均无任何条带。
- 刘丽娜何启盖陈焕春刘正飞张松林汪招雄
- 关键词：猪伪狂犬病基因缺失疫苗PRVGE基因酸模
- 重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体的ELISA研制——Ⅲ.ELISA试剂盒保存条件被引量：4
- 2006年
- 对应用重组N蛋白抗原检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的EL ISA诊断方法的主要成分(抗原包被板、酶标二抗、阳性血清、阴性血清)及组装成的试剂盒的保存条件进行了摸索。分别用5种方法对抗原包被板处理,结果表明用真空包装机抽真空后充入氮气法处理效果最好;酶标二抗在酶标抗体保存液中保存,能很好地保持EL ISA测定结果的稳定性。对其他试剂盒组成成分的保存期分别测定后,组装成试剂盒,测定试剂盒的保存期为12个月。
- 吴延功徐天刚王志亮张喜悦王君玮宋翠平刘佩兰徐培莲宋芳
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA保存期
