目的：建立并确证实时定量PCR（RT-PCR）定量检测生物基质中质粒DNA的方法,并应用于治疗性核酸疫苗HIV-PV的体内生物分布研究。方法：建立SYBR Green荧光定量PCR绝对定量方法（Q-PCR）,考察方法的特异性、灵敏度、精密度、准确度以及生物基质对PCR的抑制效应。小鼠尾静脉注射裸质粒DNA、小鼠尾静脉注射和灌胃2种途径免疫HIV-PV DNA疫苗,考察建立的Q-PCR方法对于不同形式的质粒DNA疫苗以及不同免疫方式的适用性。结果：Q-PCR方法可特异检测目标DNA,定量检测范围为10-10^7拷贝/100 ng基因组DNA（gDNA）,定量下限（LLOQ）为10拷贝/100 ng gDNA。批内和批间精密度分别〈11%和8%;由高至低4种浓度（10^7,10^4,100,10拷贝/100 ng gDNA）QC样品准确度分别为（1.57±0.02）%,（1.60±0.01）%,（2.20±0.02）%和（2.28±0.02）%。用Q-PCR方法成功得到不同形式DNA疫苗和不同免疫途径（尾静脉注射和灌胃HIV-PV疫苗）下该质粒DNA的生物分布模式。结论：利用RT-PCR技术,建立了符合DNA疫苗生物分布研究要求的定量检测生物基质中质粒DNA的方法学,并成功应用于不同质粒DNA疫苗形式和不同免疫途径下的DNA疫苗的生物分布研究。
