广东省科技计划工业攻关项目(2008B030301345)
- 作品数：18 被引量：24H指数：3
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- DNA聚合酶θ与肿瘤关系的研究进展
- 2013年
- DNA聚合酶θ(POLQ)是DNA聚合酶A家族成员之一,在肿瘤细胞和部分人体正常组织中高表达。POLQ通过参与DNA损伤耐受,在维持人体细胞染色体稳定从而避免疾病的发生过程中起着重要的作用。同时POLQ因其低保真度的特性导致组织细胞突变易感性,其表达异常增高及缺陷均可导致肿瘤等疾病的发生。笔者就目前关于POLQ参与损伤耐受的机制、低保真度导致突变易感性以及其在肿瘤发展中作用的研究进展作一综述。
- 李学孝吴爱国
- 关键词：肿瘤病理生理学DNA聚合酶突变
- Let-7a对人乳腺癌细胞生长的抑制作用及机制被引量：5
- 2010年
- 目的探讨let-7a对人乳腺癌MCF-7细胞株的抑制作用及机制。方法分别用lipofectami-neTM2000介导的let-7a转染MCF-7细胞株(实验组)和siRNA转染细胞株(阴性对照组),并设空白对照组(脂质体转染组)。使用荧光显微镜观察细胞转染效率;CCK-8法检测细胞增殖抑制率;半定量RT-PCR法检测IMP-1 mRNA的表达;Western blot法测定转染48 h后IMP-1蛋白的表达水平。结果实验组和阴性对照组的细胞转染效率无明显差别;let-7a组细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组及空白对照组(均为P<0.05),且具有时间和浓度依赖性;let-7a组的IMP-1 mRNA表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组(F=220.384,P=0.000);在MCF-7细胞中存在IMP-1蛋白表达,let-7a转染组特异性条带明显弱于两个对照组。结论 let-7a对人乳腺癌MCF-7细胞增殖有抑制作用,其机制可能与抑制IMP-1的基因表达有关。
- 吴凯吴爱国马雷杨华峰邵国利
- 关键词：乳腺肿瘤微小RNA细胞转染
- 5-杂氮-2′-脱氧胞苷对实验性乳腺癌肺转移的影响
- 2010年
- 目的探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对乳腺癌MDA-MB-231细胞实验性肺转移的影响及可能的机制。方法将MDA-MB-231细胞分为对照组与5-Aza-CdR处理组,通过半定量RT-PCR(SqRT-PCR)与甲基化特异性PCR(MSP)方法检测两组细胞的乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1),CXC趋化因子受体-4(CXCR4)基因的mRNA表达及启动子区甲基化的状况。分别将两组细胞通过边缘尾静脉注射至BALB/c nu/nu裸鼠体内(每组5只)。5周后,用荧光定量RT-PCR(FqRT-PCR)检测裸鼠肺组织内的目的基因HPRT及内参GAPDH的mRNA丰度。结果对照组和处理组细胞的BRMS1相对灰度值(IDV)分别为0与0.39±0.001,处理组BRMS1 mRNA表达较对照组明显上调(P<0.05),5-Aza-CdR使BRMS1启动子区甲基化的CpG岛B完全去甲基化;CXCR4相对IDV分别为0.58±0.003与0.58±0.01,两组间差异无统计学意义(P>0.05),CXCR4启动子区CpG岛1的非甲基化状态亦无明显改变。对照组与处理组细胞的裸鼠肺脏HPRT和GAPDH的Ct值分别为:24.75±1.55,16.19±0.69与27.61±1.67,17.48±0.96,2-ΔΔCt=0.34,处理组裸鼠肺脏HPRTmRNA丰度明显低于对照组,肺组织内转移癌较少。结论 5-Aza-CdR通过去甲基化机制重新激活肿瘤转移抑制基因BRMS1的表达,从而降低了MDA-MB-231细胞实验性肺转移能力。
- 沈三弟吴爱国赵志
- 关键词：乳腺肿瘤基因甲基化
- Let-7a对人乳腺癌MCF-7细胞的作用及机制探讨被引量：2
- 2010年
- 目的观察Let-7a对体外生长的人乳腺癌MCF-7细胞株的抑制作用,并探讨其作用机制。方法分别用LipofectamineTM2000介导的Let-7a和siRNA转染人乳腺癌细胞株MCF-7(分别为Let-7a组、空白对照组和阴性对照组),半定量RT-PCR法检测两组C-myc mRNA表达;Western blot法测定转染24 h后C-myc蛋白的表达水平;CCK-8法检测细胞增殖抑制率。结果Let-7a组的C-myc mRNA表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组,P均<0.01;在MCF-7细胞中存在相对分子质量62 kD的特异性条带,与C-myc相对分子质量相符,Let-7a组特异性条带明显弱于对照组;Let-7a组细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组(P<0.05),且具有时间和浓度依赖性。转染24 h后,Let-7a组凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。结论Let-7a对体外生长的人乳腺癌MCF-7细胞增殖有抑制作用;其机制可能为抑制C-myc基因的表达。
- 吴凯吴爱国马雷杨华峰孟艳辉
- 关键词：C-MYC基因乳腺癌微小RNA细胞转染
- 靶向S100A4的shRNA对乳腺癌MCF-7细胞体外侵袭力及迁移力的影响
- 2009年
- 目的探讨靶向S100A4短发夹RNA(shRNA)对MCF-7细胞侵袭力和迁移力影响的作用机制。方法构建S100A4基因特异性shRNA表达载体,使用QRT-PCR和Western blot检测转染后MCF-7细胞中S100A4的表达水平,经过脂质体介导将S100A4-shRNA表达载体转染入MCF-7细胞,G418筛选及克隆化培养。采用Trans-well小室法和划痕试验检测MCF-7细胞侵袭力和迁移力变化。结果经测序鉴定证实S100A4-shRNA表达载体成功构建。转染48h后,所构建的S100A4-shRNA-1表达载体能有效抑制MCF-7细胞中S100A4表达;MCF-7细胞形态无显著变化,但侵袭力和迁移力明显下降。结论S100A4在乳腺癌细胞侵袭和转移过程中扮演重要角色,通过沉默其表达可抑制MCF-7的侵袭力和迁移力从而抑制其转移。
- 马雷吴爱国纪术峰杨华峰
- 关键词：乳腺癌S100A4SHRNA侵袭力
- 短发夹RNA沉默促肝细胞再生磷酸酶-3基因表达对乳腺癌MCF-7细胞生长和侵袭能力的影响被引量：1
- 2011年
- 目的构建以促肝细胞再生磷酸酶-3（PRL-3）为靶基因的短发夹状小干扰RNA（short hairpin RNA,shRNA）表达载体,并探讨PRL-3-shRNA表达载体对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法 构建PRL-3基因特异性shRNA表达载体,使用脂质体法将PRL-3-shRNA表达载体转染入MCF-7细胞。采用Real-ti me PCR和Western blot分别检测转染后MCF-7细胞中PRL-3基因mRNA和蛋白的表达;运用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测转染后MCF-7细胞的增殖水平,用流式细胞仪检测细胞凋亡的情况;采用Transwell小室法检测细胞侵袭力变化。计量资料采用单因素方差分析或重复测量方差分析。结果 酶切鉴定和测序分析证实PRL-3-shRNA表达载体成功构建。转染成功后,shRNA-1~3组PRL-3基因mRNA表达分别为（0.31±0.27）、（0.15±0.14）和（0.31±0.03）,与空白组和阴性组（1.00±0.00、0.98±0.18）相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。PRL-3-shRNA-2组PRL-3蛋白的表达量明显低于阴性组和空白组（0.50±0.02比0.91±0.03和0.89±0.02,P〈0.05）;PRL-3-shRNA-2转染入MCF-7细胞后能明显降低其增殖水平（P〈0.05）;PRL-3-shRNA-2组凋亡率明显高于空白组和阴性组[（8.37±1.85）%比（1.60±1.58）%和（0.16±0.05）%,P〈0.05];Transwell小室侵袭实验显示,PRL-3-shRNA-2组穿膜细胞数明显低于阴性组和空白组（P〈0.05）。结论 沉默PRL-3基因表达可抑制MCF-7细胞的增殖,促进凋亡。
- 钟琰吴爱国纪术峰沈三弟
- 关键词：促肝细胞再生磷酸酶-3
- 5-杂氮-2′-脱氧胞苷降低了乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外迁移能力被引量：2
- 2010年
- 目的探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对高转移性人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外迁移能力的作用及可能的机制。方法实验分为对照组与5-Aza-CdR处理组,分别通过Transwell趋化迁移及划痕实验、半定量逆转录PCR(SqRT-PCR)、甲基化特异性PCR(MSP)等方法检测MDA-MB-231细胞的体外迁移能力、乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1)与CXC趋化因子受体-4(CXCR4)基因表达、BRMS1与CXCR4启动子区甲基化状况。结果对照组与处理组细胞穿过Transwell聚碳酸酯滤膜的数量分别为1 290.00±214.64与673.00±44.00,处理组细胞穿膜数量明显减少(P<0.05);24、36、48 h时间点对照组与处理组细胞划痕愈合率分别为20.34±0.69、59.31±0.38、91.77±0.13与20.19±0.67、49.32±0.24、69.47±0.46,其中36 h与48 h时间点处理组愈合率明显降低(P<0.05);对照组与处理组BRMS1的相对于内参GAPDH的灰度值(IDV)分别为0与0.39±0.001,处理组BRMS1 mRNA表达明显上调(P<0.05),5-Aza-CdR使BRMS1启动子区甲基化的CpG岛B完全去甲基化,对照组与处理组CXCR4的相对于内参GAPDH的IDV分别为0.58±0.003与0.58±0.01,两组比较差异无统计学意义(P>0.05),CXCR4启动子区CpG岛1的非甲基化状态亦无明显改变。结论 5-Aza-CdR通过去甲基化机制重新激活肿瘤转移抑制基因BRMS1的表达,从而降低了MDA-MB-231细胞体外迁移能力。
- 沈三弟吴爱国赵志
- 关键词：基因甲基化迁移
- Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后的体外实验研究
- 2010年
- 目的:探讨Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后对MCF-7细胞的影响。方法:利用脂质体将真核表达载体pIRES2-EGFP-Noxa瞬时转染至乳腺癌MCF-7细胞。通过RT-PCR检测转染后mRNA的表达情况。MTT比色法测定细胞增殖的抑制。Hoechst33342检测细胞的凋亡情况。结果:Noxa基因转染后在乳腺癌MCF-7细胞中成功表达,其转染后24、48、72h后mRNA表达量逐渐增高。Noxa基因的表达使得乳腺癌MCF-7细胞出现增殖抑制,其24、48、72h抑制率之间的差异具有显著性(P<0.05)。Hoechst33342染色显示Noxa基因转染后细胞出现凋亡,其24、48、72h凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P<0.05)。结论:Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后能够抑制细胞增殖并促进其凋亡。
- 赵志吴爱国沈三弟
- 关键词：乳腺肿瘤转染
- 5-杂氮-2'-脱氧胞苷对乳腺癌MCF-7细胞实验性肺转移的影响
- 2010年
- 目的:探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对非浸润性人乳腺癌MCF-7细胞实验性肺转移的影响及可能的机制。方法:将MCF-7细胞分为对照组与5-Aza-CdR处理组,分别通过半定量RT-PCR(semi-quantitative RT-PCR,SqRT-PCR)与甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测两组细胞的CXC趋化因子受体-4(CXCR4)、乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1)的mRNA表达与启动子区甲基化状况。然后分别将两组细胞通过边缘尾静脉注射到BALB/c nu/nu裸鼠体内,5周后,用荧光定量RT-PCR(fluorescent quantitative RT-PCR,FqRT-PCR)检测裸鼠肺组织内的目的基因HPRT mRNA丰度。结果:处理组CXCR4mRNA表达明显上调(P<0.05),5-Aza-CdR使CXCR4启动子区甲基化的CpG岛1完全去甲基化;两组BRMS1mRNA表达无明显差异(P>0.05),BRMS1启动子区CpG岛B的非甲基化状态亦无明显改变。处理组裸鼠肺脏HPRT mRNA丰度高,转移癌组织较多。结论:5-Aza-CdR通过去甲基化机制上调了促转移基因CXCR4的表达,从而增强了MCF-7细胞实验性肺转移能力。
- 沈三弟吴爱国邵国利
- 关键词：乳腺肿瘤基因甲基化
- miRNA-125b-1对乳腺癌SKBR-3细胞放射敏感性的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨miRNA-125b-1对乳腺癌SKBR-3细胞放射敏感性的影响,及其对靶基因HER-2蛋白表达的影响。方法合成miRNA-125b-1并通过lipofectamineTM2000转染SKBR-3细胞,分别用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot法检测HER-2mRNA和蛋白质表达水平的变化;流式细胞仪检测细胞周期;四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖抑制率;经不同剂量X线照射后,平板克隆形成实验计算细胞存活率,用单击多靶数学模型进行曲线拟合作图,求曲线参数D0、Dq和N值,比较细胞放射敏感性的变化。RT-PCR和Western blot定量结果的组间比较采用单因素方差分析,细胞周期及细胞增殖实验结果的组间比较采用重复测量方差分析。结果 miRNA-125b-1转染后的SKBR-3细胞中HER-2mRNA(F=447.78,P=0.00)和蛋白质水平(F=10.07,P=0.01)显著下降;转染后的SKBR-3细胞出现了G2M期阻滞;miRNA-125b-1组细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组(F=163.28,P=0.00);曲线拟合后显示,转染后的细胞(D0=1.87,Dq=2.68,N=4.21)与对照组(D0=2.51,Dq=4.10,N=5.11)相比D0,Dq和N值均下降(SER=1.34,P<0.05),提示细胞放射敏感性增加。结论 miRNA-125b-1使乳腺癌SKBR-3细胞的放射敏感性增加,可为HER-2阳性的乳腺癌提供新的治疗方法。
- 胡斌吴爱国李学孝纪术峰王梦川吴凯邵国利
- 关键词：乳腺肿瘤放射疗法微小RNA人表皮生长因子受体2
