广西壮族自治区自然科学基金(0832144)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 相关作者：罗彬肖绍文林永达谢小薰范蓉更多>>
- 相关机构：广西医科大学第一附属医院广西医科大学广西中医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西研究生教育创新计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 顶体素结合蛋白真核表达载体的构建及其在肝癌细胞株的表达被引量：1
- 2011年
- 目的:构建ACRBP真核表达载体,建立稳定表达ACRBP的人肝癌细胞株,为后继研究该基因的功能奠定基础。方法:以pMAL-C2/ACRBP重组质粒作为模板进行PCR,扩增出ACRBP编码区cDNA,并与真核表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1/ACRBP重组质粒。通过Fugene HD将该重组质粒转染至ACRBP表达阴性的肝癌细胞株HepG2,经G418筛选阳性克隆获得稳定转染株。RT-PCR和免疫组织化学方法检测HepG2细胞中ACRBP的表达情况。结果:pEG-FP-N1/ACRBP真核表达载体经测序证实插入序列完全正确;ACRBP基因已经稳定转染至HepG2细胞中并获得表达。结论:成功构建了pEGFP-N1/ACRBP真核表达载体并将其转染HepG2后,能稳定地表达ACRBP。
- 罗彬云翔林永达肖绍文闫光华何少健贺菽嘉陈芳谢小薰
- 关键词：基因克隆转染
- 癌睾丸抗原OY-TES-1在脑胶质瘤中的表达及其抗体血清学分析被引量：4
- 2011年
- 背景与目的:胶质瘤是最常见的原发性恶性脑肿瘤,预后差,生存率低。近年来,以利用癌睾丸(cancer-testis,CT)抗原作为靶抗原行肿瘤免疫治疗已成为研究的热点,而OY-TES-1是CT抗原家族中的一员。本研究拟了解OY-TES-1在脑胶质瘤中的mRNA表达及其抗体出现情况,探讨将OY-TES-1应用于肿瘤免疫治疗及辅助诊断的可能性。方法:收集51例脑胶质瘤患者肿瘤组织标本及配套血清,107例健康人血清。通过RT-PCR,从mRNA水平研究OY-TES-1在脑胶质瘤组织中的表达;用酶联免疫吸附分析技术(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测患者及健康人血清OY-TES-1抗体;同时对OY-TES-1 mRNA的表达及血清抗体出现的临床意义做初步分析。结果:在脑胶质瘤患者中OY-TES-1 mRNA阳性率为80.4%(41/51),血清OY-TES-1抗体阳性率为15.7%(8/51),健康人血清则为阴性。OY-TES-1 mRNA的表达和血清抗体的出现均与脑胶质瘤患者的年龄、性别、病理分级、肿瘤大小等临床指标无关。结论:OY-TES-1在脑胶质瘤中存在较高的表达,并能引起部分患者的体液免疫反应,有望作为胶质瘤免疫治疗的靶抗原。
- 李希圣严峻罗彬贺菽嘉范蓉林永达罗昱肖绍文谢小薰
- 关键词：OY-TES-1胶质瘤免疫治疗
- 肿瘤睾丸抗原OY-TES-1氨基端截短蛋白及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2011年
- 目的获得原核表达的OY-TES-1氨基端截短蛋白(OY-TES-1-N),并制备其多克隆抗体。方法扩增编码OY-TES-1-N 268个氨基酸(A6-R273)的cDNA序列;将PCR产物插入原核表达载体pMAL-C2,构建重组质粒,并转化DH5α菌;通过蓝白斑筛选、DNA测序筛出阳性菌;在优化条件下用IPTG对阳性菌进行诱导表达MBP/OY-TES-1-N融合蛋白;上Amyloseresin亲和层析柱纯化,行Western blot鉴定。以融合蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备抗血清,经活化琼脂糖微球纯化后,采用ELISA法及Western blot法分别检测抗血清的效价和多克隆抗体的特异性。结果成功诱导表达出MBP/OY-TES-1-N融合蛋白。以该蛋白免疫新西兰兔制备抗血清,抗体效价为1∶1 000,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合。结论成功地表达并纯化了MBP/OY-TES-1-N融合蛋白,并制备了特异性多克隆抗体。
- 陈玉升韦连登范蓉罗彬何少健林永达陈芳谢小薰肖绍文
- 关键词：OY-TES-1融合蛋白克隆纯化多克隆抗体
