山西省科技攻关计划项目(20090311037)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 相关机构：山西农业大学更多>>
- 发文基金：山西省科技攻关计划项目山西省青年科技研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 钙激活酶激活蛋白基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化被引量：3
- 2012年
- 构建钙激活酶激活蛋白基因(UK114)的原核表达载体并优化其表达条件,为其高效表达提供试验依据。以UK114 cDNA为模板,通过PCR方法扩增钙激活酶激活蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中,酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,在保持菌种不改变的前提下,分别改变IPTG的浓度、培养时间、菌体浓度、培养温度等来优化表达条件。结果显示,原核表达载体pGEX-4T-3-UK114成功构建,可在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约40 kD的GST-UK114融合蛋白。在IPTG浓度为0.3 mmol/L,诱导温度为32℃,诱导时间为4 h,菌体密度OD600为0.6的条件下,目的蛋白表达量最高。试验成功构建原核表达载体pGEX-4T-3-UK114且获高效表达,为研究UK114生物学活性及产品开发提供了试验基础。
- 尹淑琴常泓范艳朱宏梁娟
- 关键词：原核表达
- 重组UK114蛋白编码基因的序列特征及表达分析被引量：1
- 2019年
- UK114蛋白对调节calpain活性具有重要作用,为了初步研究UK114蛋白的生物学特性,在测序的基础上,克隆和鉴定了UK114蛋白基因,分析该蛋白结构及功能预测。提取山羊肝脏中的总RNA,通过特异性引物扩增,获得UK114蛋白基因的序列,利用生物信息学方法分析了UK114蛋白的理化性质、信号肽、疏水性、糖基化、磷酸化位点,并对其二、三级结构进行预测。结果表明,克隆所得到的重组UK114蛋白基因由414个核苷酸组成,编码137个氨基酸的蛋白,其分子量约为14 ku,等电点为6.19;该蛋白氨基酸组成中丙氨酸含量最高,占15.3%,缺乏组氨酸和色氨酸;该蛋白结构中不存在信号肽,也没有糖基化位点,存在多个磷酸化位点;蛋白质二级结构中α螺旋占到了35.04%,不规则卷曲占到37.23%,β折叠占21.17%;三级结构中α螺旋位于N端,β折叠主要位于C端。该蛋白没有信号肽和糖基化位点,说明该蛋白不是分泌蛋白,不能发生糖基化,说明结构相对来说不是很稳定;有多个磷酸化位点,决定了其功能的多样性和复杂性。研究结果可为后期的蛋白质功能研究提供一定的理论依据。
- 张晓红宋彩丽殷惠军尹淑琴常泓
- 关键词：基因克隆生物信息学分析
- 线粒体钙蛋白酶系统
- 2017年
- [目的]综述线粒体蛋白酶系统的成员、功能及调控。[方法]文献综述法。[结果]钙蛋白酶一直被看作是细胞质酶,但是近几年的研究证明CAPN1、CAPN2和CAPN10存在于线粒体中,并在坏死和凋亡细胞死亡等一系列病理生理情况下起重要作用。[结论]本文概述了线粒体蛋白酶系统的主要特征及它在细胞、普通生化和病理生理学中的一些作用。
- 常泓尹淑琴袁建琴
- 关键词：线粒体CAPN1钙蛋白酶抑制蛋白细胞凋亡
- 重组UK114工程菌的高密度发酵培养
- 2015年
- 为了鉴定重组UK114基因工程菌是否稳定表达,并进行初步的高细胞密度发酵试验。将重组基因工程菌BL21(DE3)/p GEX-4T-3-UK114进行菌种的传代培养并酶切检测;在保持菌种不变情况下,在5 L高密度发酵罐中,采用补料分批培养方法进行高密度发酵。结果表明,重组基因工程菌BL21(DE3)/p GEX-4T-3-UK114传代20代后质粒稳定存在,高密度发酵结束菌体浓度OD600大于50,融合蛋白量占菌体总蛋白量的31%,其含量达到2.1 g/L,工程菌获高效表达。
- 尹淑琴常泓范艳朱宏梁娟
- 关键词：高密度发酵GST融合蛋白
