广东省自然科学基金(S2011010004808)
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 相关作者：卢华定赵慧清吕璐璐戴驭虎王昆更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外培养包埋透明质酸/壳聚糖/质粒DNA纳米粒的壳聚糖支架负载软骨细胞被引量：2
- 2014年
- 目的 观察包埋透明质酸（HA）/壳聚糖（CS）/质粒DNA （pDNA）纳米粒的壳聚糖支架对软骨细胞生物学性状的影响及基因转染能力,探讨其作为基因活化软骨组织工程支架的可行性.方法 构建包埋HA/CS/pDNA纳米粒的壳聚糖支架,负载兔关节软骨细胞体外培养,1～2周后通过扫描电镜、组织学、免疫组织化学、倒置相差显微镜及激光共聚焦显微镜检测支架对软骨细胞表型及功能的影响,以及基因转染的能力.结果 支架孔径为100～300 μm,孔孔隙率为（86.0±1.2）％;软骨细胞在包埋HA/CS/pDNA纳米粒的支架中贴附良好,维持表型稳定,1～2周时实验组分泌蛋白多糖及Ⅱ型胶原等软骨细胞外基质较对照组明显增多,1周时测得支架中的HA/CS/pDNA纳米粒介导基因转染软骨细胞并表达绿色荧光蛋白.结论 包埋HA/CS/pDNA纳米粒的壳聚糖支架细胞相容性良好,能转染培养的软骨细胞表达绿色荧光蛋白.
- 卢华定吕璐璐赵慧清戴驭虎
- 关键词：壳聚糖软骨细胞
- 壳聚糖酶基因在软骨细胞中的表达及对壳聚糖介导基因转染的影响
- 2014年
- [目的]探讨携带壳聚糖酶(CSN)基因的重组慢病毒感染软骨细胞后影响CSN活性的因素,及CSN在壳聚糖(CS)/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞中的作用。[方法]构建携带CSN和红色荧光带白(RFP)基因的重组慢病毒(LV-CSN)并感染兔关节软骨细胞,流式细胞仪及荧光显微镜检测其感染率;二硝基水杨酸比色法(DNS)检测对CSN活性的影响因素;以CS/DNA纳米粒介导体外基因转染软骨细胞,检测CSN对CS/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞的作用。[结果]带RFP基因的LV-CSN感染软骨细胞后48 h和第7 d,RFP表达率分别为(91.40±0.98)%和(91.67±1.00)%,二者差异无统计学意义(P=0.583)。p H值、温度及铜离子浓度对CSN的活性有明显影响。LV-CSN感染软骨细胞后CS/DNA组的基因转染效率显著高于裸p DNA组和CS/DNA组(P<0.05),但铜离子可以拮抗这种作用。[结论]在一定时间内LV-CSN感染软骨细胞后可稳定表达CSN,CSN的活性受p H值、温度及铜离子浓度的影响;CSN可提高CS/DNA对软骨细胞的基因转染效率,铜离子则可拮抗这种作用。
- 连礼熠卢华定陈明伟
- 关键词：壳聚糖酶壳聚糖非病毒基因载体基因转染软骨细胞
- 透明质酸/壳聚糖/pEGFP纳米粒介导体外基因转染关节软骨细胞与滑膜细胞的比较被引量：2
- 2012年
- [目的]以透明质酸(HA)修饰的壳聚糖(CS)/质粒DNA(pDNA)纳米粒介导体外基因转染关节软骨细胞与滑膜细胞,以明确其作为非病毒基因载体治疗关节疾病的潜能。[方法]将HA修饰的CS与负载增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的pDNA以复凝聚法制成纳米粒,以扫描电镜检测纳米粒形态;激光粒度仪测定其粒径、Ze-ta电位及分散度(PDl);凝胶电泳阻滞试验检测HA/CS和pDNA的结合力及pDNA的释放;体外转染兔关节软骨细胞与滑膜细胞,以流式细胞仪及荧光显微镜检测转染效率。[结果]HA/CS/pDNA纳米粒多呈球形,粒径平均为(142.5±20.3)nm,表面Zeta电位平均为(25.99±8.48)mV,分散度平均为(0.283±0.089),可有效保护pDNA免受核酸酶的降解;通过调节pH值至7.5以上或加入壳聚糖酶可促使纳米粒中的pDNA释放;体外转染实验证明HA/CS/pDNA纳米粒能介导pEGFP转染软骨细胞和滑膜细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白,其对软骨细胞的转染能力较强,比裸pEGFP和CS/pEGFP纳米粒有更高的转染效率(P<0.05);但对滑膜细胞的基因转染效率较低,与CS/pEGFP纳米粒无明显差别(P>0.05)。[结论]复凝聚法制备的HA/CS/pDNA纳米粒是一种有效的新型非病毒基因转染载体,在体外可介导基因转染关节软骨细胞和滑膜细胞,其转染效率具有明显的细胞依赖性。
- 吕璐璐卢华定陆慧琼张富程赵慧清
- 关键词：壳聚糖透明质酸基因转染软骨细胞滑膜细胞
- 聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒的制备及介导体外转染关节软骨细胞被引量：3
- 2013年
- 背景:壳聚糖对软骨细胞具有良好的生物相容性和可降解性,但存在基因转染效率偏低的缺陷。目的:构建负载增强型绿色荧光蛋白基因的聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒,检测其理化性能,以及体外对关节软骨细胞的基因转染效率。方法:将聚乙烯亚胺共价连接于壳聚糖骨架上构建聚乙烯亚胺-壳聚糖复合物,再将聚乙烯亚胺-壳聚糖与负载增强型绿色荧光蛋白基因的质粒DNA以复凝聚法制成纳米粒,以扫描电镜检测纳米粒形态,Zeta电位粒度分析仪测定其粒径、表面电位;凝胶电泳阻滞实验观察聚乙烯亚胺-壳聚糖和质粒DNA的结合力。以聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒、裸质粒DNA、脂质体2000及壳聚糖/DNA纳米粒转染体外培养的兔关节软骨细胞,流式细胞仪及荧光显微镜检测基因转染率;激光共聚焦显微镜检测DNA的入核情况。结果与结论:聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒多呈球形,粒径为(154.6±18.6)nm,表面Zeta电位为(24.68±6.82)mV,可有效保护质粒DNA免受DNaseⅠ的降解。体外转染实验证明聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒能介导增强型绿色荧光蛋白基因转染关节软骨细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白,转染率达(23.80±1.74)%,转染率高于裸质粒DNA组及壳聚糖/DNA纳米粒组(P<0.05),与脂质体2000组无显著差别(P=0.522)。表明聚乙烯亚胺-壳聚糖/DNA纳米粒能有效保护质粒DNA免受核酸酶降解,对关节软骨细胞有良好的基因转染能力。
- 卢华定戴驭虎连礼熠吕璐璐赵慧清
- 关键词：壳聚糖聚乙烯亚胺非病毒基因载体
- 转化生长因子β1基因缓释的壳聚糖纳米粒制备及体外检测被引量：3
- 2012年
- 背景:壳聚糖作为一种非病毒载体,具有低毒性、低免疫原性、良好的生物相容性以及带可高正电荷密度的特性,易与带负电荷的DNA通过静电作用形成相互作用体避免核酸酶的降解。目的:构建负载重组人转化生长因子β1基因的壳聚糖纳米粒,检测其体外缓释转化生长因子β1基因及对软骨细胞基因转染等性能。方法:将壳聚糖与负载增强型绿色荧光蛋白基因和转化生长因子β1基因的质粒DNA(pDNA)以复凝聚法制成壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒。结果与结论:制备的壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒呈球形,粒径、表面电位与pH值相关,随着pH值升高,粒径增大,表面电位减少。纳米粒可有效保护pDNA免受核酸酶的降解。纳米粒的pDNA包封率为(87.5±2.3)%;pDNA可从纳米粒中缓慢释放。体外转染实验证实壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒能转染软骨细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白。提示壳聚糖/pEGFP-TGF-β1纳米粒能有效保护pDNA免受核酸酶降解,具有良好的缓释转化生长因子β1基因的能力,并能介导基因转染软骨细胞。
- 卢华定吕璐璐赵慧清王昆
- 关键词：转化生长因子Β1壳聚糖基因载体
- 壳聚糖-负载增强型绿色荧光蛋白基因的质粒DNA纳米微球体外转染软骨细胞的能力及影响因素被引量：2
- 2011年
- 目的探讨壳聚糖介导体外基因转染软骨细胞的能力及不同条件下基因转染率的变化，以筛选最佳转染条件。方法将壳聚糖与负载增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的质粒DNA（pDNA）以复凝聚法制成壳聚糖／pEGFP纳米微球，用扫描电镜检测纳米微球的形态，Zeta电位粒度分析仪测定其粒径、表面电位及分散度。以脂质体为对照，观察对软骨细胞的毒性。体外转染兔关节软骨细胞，以裸pDNA及脂质体为对照，流式细胞仪及荧光显微镜检测基因转染率。检测在不同pH值、N／P比值及pDNA剂量下壳聚糖／pEGFP纳米微球介导对软骨细胞的转染率变化。结果壳聚糖／pEGFP纳米微球呈球形，平均粒径为（141．5±26．7）nm，表面Zeta电位平均为（17．8±3．9）mV，分散度平均为0．227±0．025。细胞毒性试验显示壳聚糖／pEGFP纳米微球与软骨细胞相容性良好，与脂质体比较差异有统计学意义（P〈0．05）。体外转染实验证实壳聚糖／pEGFP纳米微球能转染软骨细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白，在pH值为7．0、N／P为5、pDNA浓度为4．0μg／mL时基因转染率最高，48h转染率达10．9％±0．2％。结论复凝聚法制备的壳聚糖／pEGFP纳米微球是一种有效的非病毒基因转染系统，细胞毒性小，对软骨细胞有一定基因转染能力，其转染率与pH值、N／P比值及pDNA剂量等密切相关，pH值为7．0、N／P为5、pDNA浓度为4．0μg／mL是其最佳转染条件。
- 卢华定赵慧清吕璐璐王昆
- 关键词：壳聚糖绿色荧光蛋白质类转染软骨细胞
- 壳聚糖-聚乙烯亚胺/质粒DNA纳米粒介导体外基因转染关节滑膜细胞被引量：1
- 2013年
- 目的 以聚乙烯亚胺（PEI）共价连接壳聚糖（CS）骨架上构建CS-g-PEI（CP）/质粒DNA（pDNA）纳米粒,探讨其在体外对关节滑膜细胞的转染能力.方法 复凝聚法制作CP/pDNA纳米粒,扫描电镜检测纳米粒形态,Zeta电位粒度分析仪测定其粒径、表面电位；凝胶电泳阻滞实验观察CP和pDNA的结合力；体外转染兔关节滑膜细胞,48 h后流式细胞仪及荧光显微镜检测转染效率；激光共聚焦显微镜检测1 ～2h时DNA的入核情况.结果 CP/pDNA纳米粒略呈球形,粒径为（142.0±20.3） nm,表面Zeta电位为（25.99 ±8.48） mV,可有效保护pDNA免受DNase I的降解.体外转染实验证明CP/pDNA纳米粒能介导pEGFP转染滑膜细胞并在细胞内表达绿色荧光蛋白,转染率达（22.25±1.89）％,比裸pDNA及CS/pDNA纳米粒组有更高的转染效率（P＜0.05）.结论 CP/pDNA纳米粒是一种有效的新型非病毒基因转染系统,对关节滑膜细胞具有良好的基因转染能力.
- 卢华定戴驭虎赵慧清吕璐璐
- 关键词：壳聚糖聚乙烯亚胺基因载体滑膜细胞
