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白藜芦醇生物合成基因克隆及转化金针菇研究: 白藜芦醇(Resveratorl,简称Res)是一种重要的植物抗毒素,具有抗癌、抗炎症、心血管保护等多种保健功能.然而,在白藜芦醇在天然植物体内的含量非常低,用传统的提取方法白藜芦醇成本很高,因此采用基因工程手段进行异源...; 黄秀琴郭丽琼李小明林俊芳尤琳烽袁致浩谭铭琛; 关键词：白藜芦醇基因克隆金针菇异源表达

DBAT酶的同源建模及与多样性底物对接被引量：4: 2018年; 10-去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰基转移酶(DBAT)是紫杉醇生物合成途径中催化10-去乙酰巴卡亭Ⅲ生成巴卡亭Ⅲ的一个关键酶,由于其催化效率低,使得天然巴卡亭Ⅲ和紫杉醇含量都很低,紫杉醇细胞工厂的构建也受到严重制约。本研究利用MODELLER同源建模软件,构建了未报道晶体结构的DBAT三维结构模型,结合分子动力学模拟DBAT在稳定状态前后氨基酸的位置变化,分析关键氨基酸改变对酶催化活性的影响,获得位点His162和Arg365。利用虚拟定点突变和分子对接技术,推断His162为关键活性氨基酸残基,Arg365的空间位阻效应可影响催化反应过程。本研究为后续DBAT催化机理的解析提供潜在靶点,并为DBAT分子设计奠定基础。; 黄佳俊林淑玲欧阳萍兰魏韬郑倩望叶志伟叶志伟林俊芳; 关键词：紫杉醇同源建模分子对接

白藜芦醇合酶基因的克隆及其在灰盖鬼伞中的表达研究: 植物次生代谢物(Plant secondary metabolites)白藜芦醇(Resveratrol,Res)是一种植物保护素(Phytoalexin),对病原菌有防御作用.该化合物是一种抗氧化剂,具有抗癌、抗炎、预...; 李小明郭丽琼黄秀琴林俊芳林钟石; 关键词：白藜芦醇基因克隆共转化异源表达

茯苓鲨烯合酶基因的克隆与生物信息学分析: 获苓是中国传统的药用真菌,三萜类化合物是茯苓的重要药用成分,鲨烯合酶(SQS)是三萜类化合物生物合成途径中的一个关键酶,它可以催化两分子的法呢基焦磷酸合酶(FPP)缩合形成鲨烯焦磷酸(PSPP)随后PSPP通过重排形成鲨...; 王建荣林俊芳郭丽琼温家明关爽英; 关键词：茯苓三萜鲨烯合酶反向PCR

生物合成对香豆酸大肠杆菌工程菌的构建: 2016年; 对香豆酸是一种具有预防心血管疾病、抗氧化和抗菌消炎等生物活性的酚类物质,同时,它也是高价值苯丙烷类保健营养品(如白藜芦醇)的前体。本研究希望创制出一种生物合成对香豆酸的方法,以缓解对香豆酸的供求问题。把带有粘红酵母(Rhodotorula glutinis)酪氨酸解氨酶(Rg TAL)基因的组成型表达载体转化大肠杆菌ATCC31884,并通过PCR鉴定后,获得重组菌株。对重组菌株进行发酵培养,对发酵液进行高效液相色谱检测,确定工程菌具有生物合成对香豆酸的能力。随后通过优化L-酪氨酸的添加量和工程菌的发酵时间,最终确定,底物L-酪氨酸的添加量为0.5 m M,发酵时间为36 h,检测发酵液中的对香豆酸含量最高,为161.23 mg/L。这表明,Rgtal基因在重组大肠杆菌中成功得到了表达,并且能利用自身代谢和外源添加的L-酪氨酸生物合成对香豆酸。; 梁景龙郭丽琼林俊芳何泽琪; 关键词：对香豆酸大肠杆菌生物合成

紫杉烯合酶基因遗传转化金针菇的研究被引量：6: 2013年; 利用紫杉烯合酶基因(ts)和潮霉素抗性基因(hph),采用PEG转化法共转化金针菇的原生质体。研究结果表明,18个拟转化子中有8个转化子同时整合了ts基因和hph基因,两个基因的共转化率为44.44%;RT-PCR鉴定结果表明,7个金针菇转化子实现了外源ts基因的转录。金针菇转化子在不含潮霉素(HmB)的PDA平板上经5次继代培养后仍检测到有HmB抗性,说明外源基因在金针菇转化子的无性繁殖(即有丝分裂)过程中是稳定的。本研究为通过基因工程手段定向、快速改良金针菇品种以及利用金针菇作为生物反应器生产一些具有重大经济价值的外源基因产物奠定了基础。; 康林芝林俊芳黄秀琴郭丽琼梁科; 关键词：金针菇

花生白藜芦醇合酶基因的克隆与生物信息学分析被引量：1: 2012年; 利用Protparam、iPSORT prediction、ProtScale、SOPMA、Swiss-Modeling和Scan Prosite等生物信息学工具分别对其理化性质、信号肽、疏水性、亲水性、二级结构和三级结构进行分析。以花生粤油45总DNA和总RNA为模板,采用PCR和RT-PCR技术克隆花生白藜芦醇合酶基因的DNA和cDNA序列,并利用SWISS-PROT、DNAMAN等生物信息学工具对其基因和蛋白质序列进行了分析。测序结果显示,该基因的DNA和cDNA序列长度分别为1 498 bp和1 251 bp,cDNA序列具有完整的开放性阅读框,编码389个氨基酸的多肽。该白藜芦醇合酶氨基酸368-378位点上存在芪合酶家族的特征位点GVLFGFGPGLT。同源性分析表明,其碱基序列与已报道的花生白藜芦醇合酶基因的一致性为99%,其氨基酸序列与已报道的花生白藜芦醇合酶氨基酸序列的一致性为100%。; 黄秀琴郭丽琼李小明林俊芳袁致浩谭铭琛; 关键词：花生白藜芦醇合酶基因克隆

棘孢木霉木聚糖酶Ⅱ结构基因和上游调控区的克隆及分析: 2011年; 作者克隆及分析了棘孢木霉木聚糖酶Ⅱ结构基因和上游调控区,并获得了内源启动子。根据木霉属木聚糖酶Ⅱ结构基因及上游调控区的保守性,以棘孢木霉基因组DNA为模板,进行简并PCR扩增,产物纯化并克隆至T载体,经酶切鉴定后进行序列分析。扩增获得片段长1 875 bp,由795 bp的木聚糖酶II结构基因和1 080 bp的上游调控区组成。结构基因编码223个氨基酸,具有糖基水解酶第11家族的典型保守区域。上游调控区具备核心启动子和转录起始点,有CAAT-Box,TATA-Box等启动子特征元件,分析其还有CreI,AreA,XlnR,Ace1,AlcR等转录因子结合位点。综上表明,克隆的1 080 bp上游调控区是典型的丝状真菌基因启动子,可作为内源启动子用于构建棘孢木霉高效外源基因表达系统。; 庞漫宇郭丽琼林俊芳; 关键词：基因克隆启动子

灰树花固体发酵茶青的研究: 2012年; 以茶青为发酵培养基质,对灰树花固体发酵过程中的各种内含物含量的变化及其品质进行了研究。结果表明,灰树花的最佳发酵培养基成分及培养条件:中叶茶,2%大豆粉,接种量1%,培养温度25℃,培养时间9d。发酵后其菌质的有效成分为:茶多酚1.78%,游离氨基酸0.77%,酚氨比2.3,多糖4.69%。与发酵前比较其多糖含量增加了31.7%,茶多酚降解了77.8%,游离氨基酸降低了26.7%,酚氨比降低了69.9%,茶叶品质得到很大改善。; 马立青郭丽琼林俊芳邹毓琳; 关键词：多糖茶多酚氨基酸茶青

灰盖鬼伞组合表达紫杉醇生物合成酶基因的研究: 紫杉醇是从红豆杉属植物树皮中提取分离出来的一种次生代谢物,具有显著抗癌效果,是目前应用最广泛的天然抗癌药物之一.但因资源匮乏,单纯从含量甚微的天然红豆杉植物中提取紫杉醇无法满足临床需求,故紫杉醇的药源问题已引起人们的极大...; 尤琳烽郭丽琼卢俊南林俊芳黄秀琴; 关键词：紫杉醇灰盖鬼伞代谢工程

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