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国家自然科学基金(30560112)

作品数:15 被引量:46H指数:5
相关作者:张守发于龙政薛书江曹世诺贾立军更多>>
相关机构:延边大学吉林省动物疫病预防控制中心吉林大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金更多>>
相关领域:农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 15篇期刊文章
  • 1篇会议论文

领域

  • 16篇农业科学
  • 1篇生物学

主题

  • 14篇瑟氏泰勒虫
  • 14篇泰勒虫
  • 13篇牛瑟氏泰勒虫
  • 7篇克隆
  • 4篇核表达
  • 3篇原核表达
  • 3篇基因
  • 2篇原核
  • 2篇真核
  • 2篇真核表达
  • 2篇系统发育
  • 2篇系统发育树
  • 2篇扩增
  • 2篇环介导等温扩...
  • 2篇P33
  • 2篇PCR
  • 2篇HSP70
  • 2篇HSP70基...
  • 2篇表面蛋白
  • 1篇研究方法

机构

  • 15篇延边大学
  • 1篇吉林大学
  • 1篇吉林省动物疫...

作者

  • 13篇张守发
  • 10篇于龙政
  • 9篇薛书江
  • 7篇贾立军
  • 7篇曹世诺
  • 5篇金春梅
  • 4篇许应天
  • 2篇周末
  • 2篇田万年
  • 2篇李艳茹
  • 2篇王暖成
  • 2篇常巧呈
  • 2篇谷长维
  • 2篇李太元
  • 2篇王中光
  • 1篇陈媛媛
  • 1篇鲁承
  • 1篇王笑玉
  • 1篇陈雪
  • 1篇牟伟峰

传媒

  • 5篇畜牧与兽医
  • 3篇中国预防兽医...
  • 2篇黑龙江畜牧兽...
  • 1篇中国兽医学报
  • 1篇安徽农业科学
  • 1篇中国兽医寄生...
  • 1篇Agricu...
  • 1篇Journa...

年份

  • 1篇2013
  • 2篇2010
  • 4篇2009
  • 7篇2008
  • 2篇2007
15 条 记 录,以下是 1-10
排序方式:
牛瑟氏泰勒虫P23和P33表面蛋白双基因融合表达载体的构建及原核表达被引量:5
2008年
为探索牛瑟氏泰勒虫的表面蛋白基因融合产物作为双价疫苗的可行性,以牛瑟氏泰勒虫基因组DNA为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)把P23和P33表面蛋白基因连接一起,2个基因之间插入一个linker(Gly4Ser)3,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得1151bp的双基因融合片段,克隆于表达质粒pGEX-4T-1中,构建了双基因重组表达载体pGEX-4T-P23-P33,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达出预期大小70.0ku的融合蛋白。Western blot检测结果显示,该蛋白与牛瑟氏泰勒虫抗血清呈阳性反应,表明融合蛋白具有反应原性,为进一步研究此融合蛋白作为疫苗候选成分提供了理论依据。
曹世诺于龙政薛书江贾立军周末张守发
关键词:牛瑟氏泰勒虫融合基因表达
牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的克隆与原核表达
2009年
构建牛瑟氏泰勒虫P23基因片段原核重组表达质粒,表达重组蛋白。采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因,将扩增产物与pMD18-T-Simple载体连接,测序,验证扩增产物。将P23基因片段克隆到载体pGEX-4T-3上,经酶切分析、PCR鉴定后,IPTG诱导表达,最后用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定表达产物。结果表明克隆的P23基因片段为684 bp,重组质粒pGEX-4T-3/P23构建成功;SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量约为58 ku;Western blotting分析结果显示,与牛瑟氏泰勒虫阳性血清发生反应,而与牛瑟氏泰勒虫阴性血清无反应,表明牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白具有良好的抗原性和特异性,提示可以利用融合蛋白来建立检测抗体的间接ELISA诊断方法。
金春梅薛书江张守发于龙政
关键词:牛瑟氏泰勒虫克隆原核表达
牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆与序列分析被引量:8
2007年
为分析吉林省流行的牛瑟氏泰勒虫基因序列,根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列设计合成一对引物,用PCR方法扩增出牛瑟氏泰勒虫的基因片段,并成功地将该基因纯化后克隆到pGEM-TEasy载体上,将经EcoRⅠ酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序。结果表明克隆的基因片段长度为868bp,编码283个氨基酸,有2个潜在的糖基化位点。核苷酸同源性分析表明,该基因片段与韩国株(AF521557)、日本株(AB016280)、俄罗斯株(AB016279)的核苷酸序列同源性分别为99.4%、88.0%、88.1%。
金春梅许应天张守发鲁承于龙政
关键词:牛瑟氏泰勒虫克隆
牛瑟氏泰勒虫表面蛋白P33基因的克隆与真核表达载体的构建
2008年
根据已发表的牛瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)表面蛋白P33基因的核苷酸序列设计引物,应用PCR技术从牛瑟氏泰勒虫基因组DNA中扩增P33基因片段,克隆到pMD18-T simple载体上,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序分析。进一步将该基因插入到真核表达载体pVAXⅠ,为今后深入研究该基因的表达及其功能奠定了基础。
常巧呈李太元张宗植陈雪李艳茹谷长维许应天
关键词:牛瑟氏泰勒虫P33克隆真核表达载体
Cloning and Bioinformatics Analysis of P23 Gene from Theileria sergenti被引量:5
2008年
[Objective] The aim of this study is to provide basis for developing genetic engineering vaccine and diagnostic kit for Theileria sergenti infection. [Objective] P23 gene of Theileria sergenti was amplified from its genomic DNA by PCR amplification, and cloned into the pGEM-Easy vector; then the sequencing result was analyzed with bioinformatics methods. [Result] Whole length of the P23 gene from Theileria sergenti is 684 bp containing a 672 bp open reading frame. The deduced amino acid sequence (223 amino acid residues) contains a signal peptide of 19 amino acid residues and two fragments of transmembrane domains, with relative molecular weight of the 25.886 kD and with the pI of 9.22. The homology between the yielded sequence and Chitose of Theileria sergenti P23 gene(TS-Chitose type, D84446), Ikeda of Theileria sergenti P23 gene(TS-Ikeda type, D84447) reached 99% and 90%, respectively. The sequence has been accessed in GenBank(EU573168). [Conclusion] The protein encoded by the P23 gene has better stability and immunogenicity, thus can be used as the antigen candidate for preparing genetic engineering vaccine for Theileria sergenti.
金春梅张守发于龙政
关键词:THEILERIAGENECLONINGBIOINFORMATICS
牛瑟氏泰勒虫表面蛋白p33基因的真核表达被引量:1
2008年
目的构建牛瑟氏泰勒虫表面蛋白p33基因的真核表达载体。方法根据已发表的牛瑟氏泰勒虫(Thei-leria sergenti)表面蛋白p33基因的核苷酸序列设计引物,应用PCR技术从牛瑟氏泰勒虫基因组DNA中扩增p33基因片段并克隆入pMD18-Tsimple载体。进一步将该基因插入到真核表达载体pVAXⅠ,转染Hela细胞后进行RT-PCR检测和IFA检测。结果牛瑟氏泰勒虫表面蛋白p3基因成连接到pVAXⅠ载体中,并在真核细胞中有效表达。结论本研究试验为今后该基因的进一步动物试验奠定了基础。
常巧呈李太元许应天李艳茹谷长维陈媛媛
关键词:牛瑟氏泰勒虫P33真核表达
牛瑟氏泰勒虫吉林株18S rRNA基因的扩增及系统发育研究
2008年
本研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,对寄生于牛体内的瑟氏泰勒虫基因组DNA进行扩增,得到1 356 bp的18S rRNA基因片段,测序后blast分析表明该虫种属牛瑟氏泰勒虫。将该基因片段序列与GenBank中8种已知泰勒虫的相应序列进行比较分析,建立系统发育树。结果表明,牛瑟氏泰勒虫吉林分离株与水牛泰勒虫亲缘关系最近,与小泰勒虫亲缘关系较远。这一结果说明宿主因素对泰勒虫的基因型影响较大。
曹世诺牟伟峰于龙政薛书江贾立军张守发
关键词:牛瑟氏泰勒虫PCRRRNA系统发育树
牛瑟氏泰勒虫病PCR诊断方法的建立被引量:21
2007年
为建立特异、敏感、快速的诊断方法,根据本实验室已测得的瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因序列,设计一对特异性引物,扩增出大小为499 bp的基因片断,经克隆、测序分析,与已知基因序列同源性为100%。用该对引物建立的牛瑟氏泰勒虫病PCR诊断方法,通过对75份牛血液样本检测,检出率为72%(54/75)。该方法具有特异性好、敏感性强等优点,可用于牛瑟氏泰勒虫病的诊断和流行病学调查。
金春梅许应天张守发王笑玉于龙政
关键词:瑟氏泰勒虫PCR
牛瑟氏泰勒虫环介导等温扩增检测的相关研究方法的建立
牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫(T.sergenti)寄生于牛红细胞和淋巴细胞引起的以高热、贫血、出血、消瘦和体表淋巴结肿大为主要临床症状的一种血液原虫病,该病已给畜牧业带来了巨大的经济损失。为建立一种快捷...
王中光张守发曹世诺贾立军薛书江田万年王暖成
关键词:牛瑟氏泰勒虫环介导等温扩增
文献传递
牛瑟氏泰勒虫P33表面蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
2009年
应用PCR方法扩增了牛瑟氏泰勒虫吉林株P33表面蛋白基因片段,并将扩增产物与pMD18-T载体连接,重组质粒经PCR、双酶切鉴定后测序;构建P33重组pGEX-4T-3表达载体,转化大肠杆菌BL-21,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、免疫印记分析。结果显示,获得P33基因完整开放阅读框长868 bp,编码292个氨基酸,与中国株同源性为99.1%;表达的融合蛋白相对分子质量为59 000,能被牛瑟氏泰勒虫阳性血清识别,表明该融合蛋白具有较好的免疫原性。
曹世诺于龙政薛书江周末刘廷张守发
关键词:牛瑟氏泰勒虫克隆
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