国家自然科学基金(81371774)
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
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- 结核分枝杆菌亚单位疫苗Ag85b-ESAT-6+Hsp65-IL-2的安全性评价研究被引量：3
- 2016年
- 目的评价结核分枝杆菌亚单位疫苗Ag85b-ESAT-6+Hsp65-IL-2在小鼠和豚鼠体内的安全性。方法小鼠慢性毒性实验:C57BL/6J小鼠间隔2周、皮下3次注射100μg亚单位疫苗(Ag85b-ESAT-6和Hsp65-IL-2各50μg),观察临床症状表现和器官病理学改变。小鼠急性毒性实验:C57BL/6J小鼠皮下注射100μg亚单位疫苗(Ag85b-ESAT-6和Hsp65-IL-2各50μg),观察小鼠临床症状、体重、摄食摄水量、器官的脏器系数和病理学表现。豚鼠全身过敏实验:Hartley豚鼠间隔2d、皮下3次注射1 000μg、100μg、10μg亚单位疫苗(Ag85b-ESAT-6和Hsp65-IL-2均按质量1∶1混合),16d后用二倍剂量足背静脉注射激发,观察体重变化和全身过敏症状。结果小鼠慢性毒性实验表明,亚单位疫苗多次注射后不引起临床症状和病理损伤;小鼠急性毒性实验表明,亚单位疫苗对小鼠不产生临床症状,对小鼠体重、摄食摄水量、脏器系数、器官病理学改变影响无统计学意义;豚鼠全身过敏实验表明,疫苗短期多次致敏对豚鼠的体重无明显影响,低剂量疫苗不引起豚鼠产生全身过敏反应。结论亚单位疫苗Ag85b-ESAT-6+Hsp65-IL-2在小鼠和豚鼠体内均表现出良好的安全性,可用于进一步TB预防和治疗性疫苗的研制。
- 路延之王丽梅康健杨锐张鑫姚庆港柏银兰徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌亚单位疫苗
- c-di-AMP在细菌感染与免疫中的作用被引量：4
- 2019年
- 环二腺苷酸(Cyclic diadenosine monophosphate,c-di-AMP)是细菌中广泛存在的第二信号分子。c-di-AMP在细菌中的代谢受二腺苷酸环化酶(Diadenylatecyclase, DAC)和磷酸二酯酶(Phosphodiesterase,PDE)的精密调控。c-di-AMP不仅调节细菌生长、细胞壁稳态、离子转运等多种生理过程,而且能够被真核宿主胞内多种感应子/受体蛋白识别,从而调控抗感染免疫。细菌c-di-AMP参与调控宿主I型干扰素应答、NF-κB信号通路活性、自噬以及炎症小体应答等固有免疫应答。此外,c-di-AMP作为黏膜佐剂可诱导宿主适应性免疫。c-di-AMP被认为是一种新发现的病原体相关的分子模式(Pathogen associated molecular pattern,PAMP),已成为细菌疫苗和药物研究中的新靶点。
- 宁唤唤徐志凯柏银兰
- 关键词：细菌免疫固有免疫
- CRISPR-Cas系统在细菌生理中的作用被引量：2
- 2015年
- 规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)及相关基因(cas)组成了CRISPR-Cas系统,该系统存在于约90%的古细菌和40%的细菌基因组内,使细菌对外源基因的入侵具有获得性免疫作用。我们简要介绍细菌CRISPR-Cas系统的结构和作用机制,并对其在细菌毒力、耐药性传递、生物膜形成等生理中的作用进行综述。
- 陶欢高俊柏银兰
- 关键词：细菌CRISPR
- 抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原(Ag85B-ESAT-6)亚单位疫苗黏膜免疫对结核分枝杆菌的免疫应答被引量：3
- 2022年
- 目的评价抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原融合蛋白(AE)亚单位疫苗经黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答及其对结核分枝杆菌(MTB)感染的保护力。方法分别用AE、AE联合环二腺苷酸(c-di-AMP)亚单位疫苗经鼻黏膜免疫小鼠,ELISA检测抗体水平以及1型辅助T(Th1)细胞的细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)和Th2细胞的IL-10分泌水平,实时荧光定量PCR检测IFN-γ、IL-2、IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。MTB静脉感染免疫小鼠,ELISA检测感染小鼠血清抗体及脾细胞细胞因子分泌水平,HE染色分析肺病理改变,平板法计数菌落形成单位(CFU)检测脾和肺荷菌数。结果AE和AE联合c-di-AMP经鼻黏膜免疫可诱导小鼠产生高水平的特异性抗体,促进脾细胞增殖、脾和肺脏Th1/Th2型细胞因子和TNF-α转录增加、脾Th1/Th2型细胞因子分泌增加。小鼠MTB感染后,与对照组相比,AE和AE联合c-di-AMP免疫小鼠特异性抗体水平仍升高,Th1/Th2型细胞免疫应答增强,肺组织呈炎症反应,肺、脾荷菌数显著降低,且AE联合c-di-AMP免疫小鼠肺、脾荷菌数进一步降低。结论AE亚单位疫苗经黏膜接种可诱导小鼠产生体液与细胞免疫应答,并提供对MTB感染的保护力;c-di-AMP为佐剂可在一定程度上提高AE的免疫原性。
- 宁唤唤张芳琳康健王立飞路延之任瑞白鹭梁璇谢燕玲柏银兰
- 关键词：亚单位疫苗黏膜免疫
- 结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶的表达和纯化以及小鼠多抗血清的制备被引量：1
- 2015年
- 目的表达和纯化结核分枝杆菌c-di-AMP合成酶,并制备多克隆抗体,为研究c-di-AMP在MTB生理过程中的作用奠定基础。方法从MTB基因组中PCR扩增c-di-AMP合成酶Rv3586基因,构建原核表达载体,序列鉴定后,IPTG诱导目的基因表达,采用Western-blot鉴定目的蛋白,并用离子亲和层析法纯化重组蛋白;用纯化蛋白经背部皮下免疫小鼠,收集小鼠血清,用免疫学方法测定抗体滴度及其特异性。结果 PCR成功扩增Rv3586基因,限制性酶切分析和序列测定结果表明成功构建原核表达载体;表达的重组c-di-AMP合成酶蛋白分子质量大小约43ku,该蛋白可被抗His标签抗体和感染小鼠血清识别。用纯化蛋白免疫小鼠,初次免疫后抗体滴度可达1︰12 800,且该多克隆抗体可识别结核分枝杆菌和卡介苗c-di-AMP合成酶。结论在E.coli中成功表达c-di-AMP合成酶,并制备了多克隆抗体,可用于结核分枝杆菌c-di-AMP生物学功能的进一步研究。
- 曹田宇吉思雨褚阳光王丽梅康健王立飞徐志凯柏银兰
- 关键词：结核病结核分枝杆菌原核表达
- 疫苗佐剂的研究进展被引量：5
- 2022年
- 接种疫苗是预防感染性疾病较为有效的措施之一。近年来,随着DNA重组技术的发展,重组亚单位疫苗、合成肽疫苗和核酸疫苗等新型疫苗的研究取得了快速的发展,与传统疫苗相比,这些疫苗抗原相对分子质量更小,纯度更高,但免疫原性较弱,需要佐剂增强其作用。佐剂(adjuvant)是一种非特异性免疫增强剂,可以提高疫苗的免疫原性。因此,佐剂在疫苗研究中占据着重要地位。除传统的铝佐剂外,目前已研发了多种新型佐剂,如脂类、油乳、皂苷、细胞因子和核苷酸佐剂等。现就新型佐剂在疫苗中的研究及其应用作一概述。
- 吴正锋(综述)彭钰君(审校)柏银兰(审校)
- 关键词：疫苗新型佐剂脂质体细胞因子核苷酸
- 结核分枝杆菌Rv3586结构域基因真核表达载体的构建及鉴定
- <正>结核病(tuberculos is,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobac terium tuberculosis,Mtb)引起的慢性传染病。卡介苗(Bacillus Calmette Guerin,BCG)作为用...
- 路延之； 吴骏杰； 宋世杰； 姚庆港； 徐志凯； 柏银兰；
- 文献传递
- 医学微生物学实验课程教学实践与体会被引量：1
- 2016年
- 医学微生物学实验课程是与医学微生物学理论课程相辅相成的教学模块,实验课程能很好地诠释理论课程中难以理解的概念以及微生物学课程必须掌握的无菌操作、生物安全防护知识、常见病原微生物的分离培养等基本技术。近年来SARS、禽流感、甲型H1N1、登革热、MERS等传染病的发生和传播,使得医学微生物学实验课程的地位越来越重要。所以本文就医学微生物学实验课程5个方面逐一进行教学分析,浅谈教学实践和教学体会,希望对提高教学质量、提高学生实验水平和解决实际问题的能力有所帮助。
- 康健柏银兰路延之徐志凯王丽梅
- 关键词：微生物学实验课教学体会
- 结核分枝杆菌持续感染小鼠模型的建立及其免疫特征
- 2014年
- 为建立小鼠结核分枝杆菌持续感染模型并研究其免疫应答特征,选取雌性C57BL/6小鼠,经尾静脉感染结核分枝杆菌H37Rv株,并以异烟肼和利福平联合治疗。分别于感染后4、8、12周处死小鼠,用平板法计数肺和脾荷菌数,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中特异性抗体水平及亚类,流式细胞术检测CD4+脾淋巴细胞经结核分枝杆菌抗原——纯化蛋白衍生物(PPD)刺激后分泌细胞因子的细胞比例。结果显示,感染4周后小鼠肺和脾荷菌数lg CFU分别达3.67±0.25和3.54±0.24,至少持续8周;药物治疗可有效降低脏器荷菌数。感染12周后,感染组血清中抗结核分枝杆菌特异性抗体水平显著升高(P<0.01),且以IgG1为主;治疗组总IgG抗体水平显著低于感染组(P<0.01),且IgG2a相对较高(P<0.05)。感染组CD4+脾淋巴细胞中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)分泌细胞比例显著增加(P<0.01和P<0.001),而IL-4分泌细胞比例显著降低(P<0.01);治疗组IL-2和IL-4分泌细胞比例显著低于正常组(P<0.05和P<0.01)。本研究建立的小鼠结核分枝杆菌持续感染模型有望用于结核病治疗性疫苗和药物的研发及筛选。
- 许承明康健王丽梅韩文东孙志平丁悦娜瞿涤柏银兰徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌小鼠模型
