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转基因玉米的多重PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法研究被引量：17: 2007年; 采用三重PCR反应,同时扩增CaMV 35S启动子、hsp70 intron1和CryIA(b)基因之间序列以及Invertase基因,扩增产物用无胶筛分毛细管电泳-激光诱导荧光检测,从而建立了多重PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测转基因玉米的新方法.对影响多重PCR扩增和毛细管电泳的因素进行了优化.在优化的条件下,本方法可以同时检测转基因玉米样品中3种外源基因.经序列测试证实,三重PCR扩增产物的序列与原基因完全一致,表明扩增结果可靠.该方法能检出0.05%MON810转基因玉米成分,远低于欧盟对转基因食品规定标识的质量分数阈值(1%).该方法对玉米及其制品的检测结果与实时荧光PCR方法的检测结果一致,与传统的琼脂糖凝胶电泳法相比,具有特异性高、快速及灵敏等优点,适用于玉米中转基因成分以及转基因玉米MON810品系的快速筛选、鉴定和检测,能满足我国实施转基因食品标签法规的要求.; 周颖黎源倩裴晓方; 关键词：多重PCR 激光诱导荧光检测转基因玉米

微机械往复式无阀泵的振动特性分析被引量：5: 2005年; 提出了用于研究微机械往复无阀泵动态特性的二自由度振动力学模型,并进行了分析与实验验证。在模型中增加考虑泵腔内气泡因素,并将泵腔内、外液体质量的影响分开考虑;得出振幅随频率、泵腔内外液体质量比变化的曲线;发现其幅频曲线一般呈双峰特性,泵腔内外液体质量比值对曲线特征、谐振频率、振幅均有显著影响。通过实验验证了分析结果。由此得出以提高泵压为目的的微泵优化设计策略:适当增大膜片质量、选择合理的泵腔内外液体质量比值。采用硅深刻蚀、硅-玻璃膜片键合等工艺制作出微机械往复无阀泵,其尺寸为20 mm×20 mm×0.65 mm,实现最大泵压为1.52 kPa,对应最大流量为35×10-6L/min。; 王皓罗先刚姚汉民杜春雷; 关键词：微泵微流控芯片微机电系统

多响应曲面优化-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测食源性致病菌被引量：6: 2009年; 建立了食品中常见致病菌:沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157∶H7的rfbO157基因、志贺菌的ipaH基因及副溶血性弧菌Vpara(16S-23S rDNA IGS)基因的多重PCR产物-毛细管电泳快速检测方法.根据沙门菌、大肠杆菌O157∶H7、志贺菌及副溶血性弧菌的特异性基因保守序列设计出多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系.采用多响应曲面法优化毛细管电泳的分离条件,以含有DNA荧光染料SYBR GreenⅠ的1.0%甲基纤维素为筛分介质,通过毛细管电泳-激光诱导荧光同时检测4种常见致病菌的PCR扩增产物.在优化的多重PCR反应体系和毛细管筛分电泳条件下,此方法可以同时检测出沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157∶H7的rfbO157基因、志贺菌的ipaH基因及副溶血性弧菌Vpara(16S-23S rDNA IGS)基因的多重PCR扩增产物,25 min内即可完成检测.迁移时间的日内相对标准偏差为0.92%～1.58%.通过多响应曲面的优化,有效改善了毛细管电泳对DNA分子的分离能力.; 渠凌丽黎源倩郑波何成艳何玲李永新; 关键词：毛细管电泳激光诱导荧光检测食源性致病菌多重PCR

双重PCR-毛细管电泳法快速检测大豆中转基因成分被引量：9: 2005年; 目的　建立抗草甘膦转基因大豆的快速检测方法。方法　针对转基因大豆基因组中被导入的 35 S启动子、NOS终止子和 CP4 - EPSPS抗草甘膦基因等外源基因 ,自行设计了两对引物 ,采用双重 PCR同时扩增上述基因 ,用 8g/L羟丙基甲基纤维素为筛分介质 ,在 5 0 cm× 10 0μm i.d.涂壁毛细管中 ,于 - 10 k V电压下用激光诱导荧光 -毛细管电泳检测转基因大豆的 PCR扩增产物。结果　在优化的 PCR反应和毛细管电泳条件下 ,本法可以同时检测出转基因大豆样品中三种外源基因 ,双重 PCR扩增产物经测序证实与原基因序列完全一致 ,表明本研究设计的引物合理 ,扩增结果可靠。毛细管电泳进样量仅需 5 nl,分析时间为 2 4 min,迁移时间的相对标准偏差≤ 3.2 %。结论　本方法较常规琼脂糖凝胶电泳特异性高 ,分析时间短 ,重现性好 ,检测灵敏。; 周颖黎源倩苏宁裴晓芳雍莉; 关键词：双重PCR 转基因大豆羟丙基甲基纤维素

非水毛细管电泳-化学发光法测定食品包装材料中酚类环境激素被引量：13: 2009年; 建立食用包装材料中的双酚A、壬基酚等多种环境激素的非水毛细管电泳-化学发光分析方法。食品包装材料样品浸出物中的双酚A、烷基酚等环境激素经衍生剂DIB-Cl衍生后,经过非水毛细管电泳分离后,分别与过氧草酸酯化学发光反应体系作用,光信号经过光电倍增管接收放大后被检测。以雌二醇(17β-E2)为内标,以相对迁移时间定性,相对发光强度比定量,内标校准曲线法测定样品浸出物中待测物的含量。对影响非水毛细管电泳分离如溶剂组成和比例、电解质浓度、温度、乙酸浓度、电泳电压等条件进行了优化。同时对化学发光体系也进行了优化。4-叔丁基酚、双酚A、4-叔辛基酚、4-壬基酚和四溴双酚A分别在0.0095～3.0mg/L,0.0087～3.0mg/L,0.0085～3.0mg/L,0.011～3.0mg/L和0.009～3.0mg/L范围内线性良好,r>0.9947。相对迁移时间和相对峰高的RSD分别为0.88%～2.96%和6.54%～8.57%。加标回收率为86.7%～98.8%。对5种常见的食品包装材料样品进行了测定,所建立的方法简便、快速、灵敏,适合于食品包装材料中酚类环境激素的检测。; 肖全伟黎源倩邹晓莉; 关键词：环境激素食品包装材料非水毛细管电泳化学发光

微流控芯片-激光诱导荧光快速检测4种食源性致病菌被引量：18: 2008年; 建立了食品中4种常见食源性致病菌的微流控芯片快速检测方法。根据副溶血弧菌的Vpara（16S-23SrDNAIGS）基因、沙门菌的invA基因、大肠杆菌O157：H7的rfbO157基因和志贺菌的ipaH基因序列设计了4对特异性引物，对上述致病菌进行四重PCR扩增，采用微流控芯片-激光诱导荧光检测食品中4种常见致病菌的多重PCR扩增产物。优化了多重PCR扩增和微流控芯片电泳分离的实验条件。当芯片电泳的筛分介质HPMC-50浓度为2．2％、溴乙锭（EB）含量为3．75μmol／L、电场强度为120V／cm时，pUC Mix DNA Marker8和待测致病菌的多重PCR扩增产物可以实现基线分离，600S内即可完成上述4种致病菌的同时检测，迁移时间的日内相对标准偏差为0．74％～2．09％。本方法能够检出1×10^2cfu／mL的副溶血弧菌、沙门菌、大肠杆菌O157：H7和志贺菌。方法特异性高，所设计的引物在10种非目的菌株体系中均未见扩增的片段。将本法应用于食品中上述致病菌的测定，获得了满意的结果，为常见食源性致病菌的快速检测提供了一种新的可靠分析手段，对保障食品安全具有重要的现实意义。; 李永新黎源倩渠凌丽何成艳; 关键词：微流控芯片激光诱导荧光检测食源性致病菌多重聚合酶链反应

毛细管电泳-激光诱导荧光检测肌腱和肌腱细胞中的羟脯氨酸被引量：12: 2006年; 建立毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)分析羟脯氨酸的方法。肌腱和肌腱细胞中的胶原蛋白碱水解生成氨基酸,经异硫氰酸荧光素(FITC)衍生,采用LIF-CE分离测定胶原蛋白特异性氨基酸-羟脯氨酸。羟脯氨酸在0.5μg/L^8×103μg/L浓度范围内线性关系良好;检出限为0.5μg/L。相对迁移率和相对峰高的相对标准偏差(RSD)分别为5.0%和6.1%。测定了60份肌腱和9份细胞样品,加标回收率为95%~110%。将所建立的毛细管电泳方法与高效液相色谱法(HPLC)进行比较,两者测定结果相对误差为-1.9%~2.0%。本法仅需一次荧光标记,操作简单、快速灵敏,12min内完成一个分析周期,适于测定肌腱和细胞样品。; 邹晓莉周春艳黎源倩曾红燕; 关键词：羟脯氨酸激光诱导荧光检测毛细管电泳肌腱细胞

多重聚合酶链反应-毛细管电泳-激光诱导荧光法检测三种食源性致病菌被引量：6: 2007年; 建立了食品中常见致病菌大肠杆菌O157：H7的uidA基因、沙门菌的invA基因和志贺菌的ipaH基因的多重聚合酶链反应（PCR）产物的毛细管电泳快速检测方法。根据这3种致病菌的特异性基因序列设计多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系,采用7.0g/L甲基纤维素为筛分介质,毛细管电泳-激光诱导荧光检测法同时检测了3种常见致病菌的PCR扩增产物。在优化的多重PCR反应和毛细管筛分电泳条件下,该方法可以同时检测沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157：H7基因的多重PCR扩增产物,22min内即可完成3种常见致病菌的毛细管电泳检测。迁移时间的相对标准偏差为1.47%-2.07%。与凝胶电泳法比较,该法简便快速,灵敏度高,可用于多种致病菌脱氧核糖核酸的检测,为食品安全提供了一种可靠的快速检测方法。; 毛红霞黎源倩裴晓方何超渠凌丽; 关键词：多重聚合酶链反应毛细管电泳法激光诱导荧光检测食源性致病菌

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国家教育部博士点基金(20030610029)

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