国家自然科学基金(30560147)
- 作品数：11 被引量：52H指数：6
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- 小鼠侵袭性肺曲霉病模型的建立被引量：17
- 2008年
- 目的建立侵袭性肺曲霉病(IPA)动物模型。方法以环磷酰胺为免疫抑制剂,造成小鼠免疫抑制,对腹腔巨噬细胞和脾细胞进行计数;双侧鼻孔吸入烟曲霉菌孢子,不同时间点处死小鼠,进行组织培养及病理分析。结果注射环磷酰胺后,小鼠免疫细胞数量急剧下降,腹腔巨噬细胞数及脾细胞数减少,外周血淋巴细胞百分比降低;对IPA模型组的组织培养可见烟曲霉,病理切片可见肺组织大量烟曲霉菌聚积,组织坏死,形成肺脓肿。结论成功建立了小鼠IPA动物模型。
- 罗闳丹施旻谢小梅徐国良
- 关键词：烟曲霉侵袭性肺曲霉病BALB/C小鼠
- 侵袭性肺曲霉病发生发展过程中TLRs／NF—κB信号通路的激活和不同功能细胞因子的产生被引量：4
- 2011年
- 目的 研究小鼠侵袭性肺曲霉病（IPA）发生过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活和不同功能细胞因子的产生情况,探讨IPA的发病机制.方法 小鼠随机分为正常组、正常＋接种烟曲霉菌组（正常接菌组）和免疫抑制＋接种烟曲霉菌组（IPA模型组）,经鼻吸入烟曲霉孢子后在不同时相点处死小鼠,无菌取肺组织分别进行病理切片,烟曲霉菌落计数,RT-PCR法、Western blot法动态检测小鼠感染烟曲霉菌过程中肺组织TLR2、TLR4 mRNA表达、NF-κB p65蛋白、促炎细胞因子TNF-α、IL-1β及抗炎细胞凶子IL-10含量的变化规律.结果 （1）鼻吸入烟曲霉菌后72 h,IPA模型组肺组织出现严重炎症反应,并有大昔的菌丝生成,同时各时相点的烟曲霉菌负倚均高于正常接菌组;（2）与正常接菌组比较,IPA组TLR2 mRNA感染早期（24 h）低表达,感染后期（120 h、144 h）高表达;而TLR4mRNA则在感染过程中一直处于低表达状态;NF-κB p65感染早期（24 h）骤然升高后持续下降.（3）正常小鼠感染烟曲霉菌后,肺组织巾促炎细胞因子TNF-α、IL-1β在感染早期皆呈高表达,且最高表达量均出现在48 h或72 h,随后下降并恢复至正常水平.同时感染后期抗炎细胞因子IL-10表达水平升高;而IPA小鼠在感染甲.期抗炎症细胞因子IL-10大量释放,后期显著降低,促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β缓慢且低水平释放.结论 TLRs/NF-κB信号通路的异常激活,引起促炎细胞因子和抗炎细胞因子之间失去动态平衡,可能是导致侵袭性肺曲霉病发生发展的原因之一.
- 谢小梅李祥罗闳丹石青张海红饶振华
- 关键词：侵袭性肺曲霉病细胞因子
- NF-κB启动的炎症反应在小鼠侵袭性肺曲霉病肺损伤中的作用被引量：9
- 2008年
- 为了探讨NF-κB启动的炎症反应在小鼠侵袭性肺曲霉病肺损伤中的作用,将小鼠分3组:正常组、正常+烟曲霉菌接种组、IPA模型组,小鼠鼻吸入烟曲霉菌第4天处死,取肺组织,肺组织切片经HE染色观察病理损伤;比色法测定肺组织MPO活性;免疫组化法评价肺组织NF-κB p65蛋白的活化;RT-PCR法检测肺组织TNF-α、IFN-γ和β-tublin mRNA的表达。结果显示,正常健康组小鼠肺组织结构正常,未见炎症发生;正常+烟曲霉菌接种组小鼠肺组织有炎症细胞浸润,未见孢子萌芽;IPA模型组小鼠的肺组织病理损伤严重,可见炎症细胞浸润,孢子萌芽生成菌丝。正常+烟曲霉菌接种组和IPA模型组小鼠肺组织的TNF-α和IFN-γmRNA的相对表达水平、NF-κB p65免疫组化评分和MPO活性均高于正常组小鼠(P<0.05);并且IPA模型组小鼠肺组织NF-κB p65免疫组化评分值和MPO活性均高于正常+烟曲霉菌接种组(P<0.05)。结果提示,烟曲霉菌感染可激活小鼠肺组织NF-κB介导的炎症信号通路,诱导下游TNF-α和IFN-γ的表达,募集大量的中性粒细胞于感染组织,是导致IPA小鼠肺组织严重病理损伤的因素之一。
- 刘金辉杨芬罗闳丹陈志平谢小梅
- 关键词：烟曲霉菌侵袭性肺曲霉病NF-ΚBTNF-Α
- MPO及TNF-α在小鼠侵袭性肺曲霉病中的作用
- 2009年
- 烟曲霉菌是自然界广泛存在的腐生致病菌，易导致免疫力低下患者发生严重且致死性的侵袭性肺曲霉病（IPA）。通过建立小鼠侵袭IPA模型，探讨髓过氧化物酶（MPO）及TNF—α在侵袭IPA中的作用，为阐明IPA的发病机制提供资料。
- 罗闳丹谢卫华李祥石青刘金辉谢小梅
- 关键词：侵袭性肺曲霉病TNF-Α小鼠MPOIPA烟曲霉菌
- TLR4基因的沉默下调了NOD1信号通路在RAW264．7细胞中抗烟曲霉孢子刺激作用被引量：3
- 2012年
- 为研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时NOD1和TLR4信号通路在细胞处于正常状态和免疫抑制状态时发挥的作用,以及沉默TLR4基因后对NOD1信号通路的影响,通过建立细胞免疫抑制模型,利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,运用RT-PCR和Western blot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后NOD1,TLR4,RIP2,MyD88 mRNA及TNF-α蛋白表达变化.研究发现:(1)给予RAW264.7细胞含免疫抑制剂甲泼尼龙琥珀酸钠浓度为0.04mg/mL的RPMI1640培养液培养12h后,细胞抑制效果最佳,存活率约为90%.(2)正常RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,NOD1和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用,当细胞处于免疫抑制状态时,NOD1和TLR4信号通路不能激发其有效的免疫应答.(3)TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞,沉默效率达83%.(4)TLR4基因的沉默,使NOD1信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,表明沉默TLR4基因下调了NOD1信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用.
- 饶振华谢卫华苏明声龙凯罗闳丹谢小梅
- TLR4基因沉默下调TLR2信号通路在RAW264．7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用被引量：2
- 2012年
- 目的研究单核巨噬细胞RAW264．7受烟曲霉孢子刺激时，TLR2和TLR4信号通路发挥的作用，以及沉默TLR4基因后，对TLR2信号通路的影响。方法利用RNAi技术将11LR4-siRNA转染RAW264．7细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h，将细胞随机分为正常组（N组）、正常＋烟曲霉孢子刺激组（N＋Af组）、正常＋TLR4-siRNA组[TLR4（RNAi）组]、正常＋TLR4-siRNA＋烟曲霉孢子刺激组[TLR4（RNAi）＋Af组]，RT-PCR和Westernblot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后TLR2、TLR4、MyD88mRNA及TNF-α蛋白的表达变化。结果（1）TLR4基因沉默前：与N组比较，N＋Af组TLR2、TLR4、MyD88mRNA及TNF．Ot蛋白表达量均显著升高（P〈0．05）。（2）TLR4-siRNA（100nmol／L）转染RAW264．7细胞，沉默效率达83％。（3）TLR4基因沉默后：与N组比较，TLR4（RNAi）组TLR2、MyD88mRNA的表达量均显著降低（P〈0．05）；与N＋缈组比较，rrLR4（RNAi）＋4厂组的TLR2、MyD88mRNA和TNF-α蛋白的表达量均显著降低（P〈0．05）；与TLR4（RNAi）组比较，TLR4（RNAi）＋A厂组MyD88mRNA表达量显著升高（P〈0．05），而TLR2mRNA及TNF．仪蛋白表达量却无显著变化（P〉0．05）。结论RAW264．7细胞受烟曲霉孢子刺激时，TLR2和TLR4信号通路被激活，通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用；当沉默TLR4基因后，TLR2信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用，沉默TLR4基因下调了TLR2信号通路在RAW264．7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用，可能TLR4较TLR2在抵抗烟曲霉孢子刺激时发挥更重要的作用。
- 饶振华朱根华谢卫华苏明声龙凯罗闳丹谢小梅
- 侵袭性肺曲霉病发生发展过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活和不同功能细胞因子的产生
- 研究小鼠侵袭性肺曲霉病（IPA）发生过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活和不同功能细胞因子的产生情况,探讨IPA的发病机理。将小鼠随机分为正常组、正常+接种烟曲霉菌组（正常接菌组）和免疫抑制+接种烟曲霉菌组（IPA模...
- 谢小梅朱根华李祥罗闳丹石青张海红饶振华
- 关键词：侵袭性肺曲霉病细胞因子发病机理
- 文献传递
- 烟曲霉菌感染小鼠肺组织中NOD1信号通路的激活被引量：11
- 2010年
- 目的研究天然免疫NOD1信号通路在烟曲霉菌感染小鼠肺组织中是否得以激活。方法小鼠分为正常对照组和感染组,感染组小鼠经鼻滴入烟曲霉菌孢子24 h、48 h、72 h后分别处死,碾碎肺组织平板培养以检测其肺组织烟曲霉菌负荷,观察肺组织病理学改变,RT-PCR检测NOD1及RIP2 mRNA表达量、Western Blot检测胞核NF-κBp65和胞浆TNF-α在小鼠肺组织中的含量。结果①感染组小鼠肺组织48 h时Af负荷达最高且可见严重的充血和出血,有大量的炎症细胞浸润,72 h时Af负荷迅速下降且未见菌丝形成,仅见轻微的充血、出血和炎症反应;正常组烟曲霉菌培养阴性且肺组织结构正常;②RT-PCR及Western Blot结果显示:感染组小鼠肺组织各时相点NOD1 mRNA、RIP2 mRNA、NF-κBp65和TNF-α的表达量均明显高于正常对照组(P<0.05),前三者均在48 h表达最高,TNF-α在72 h表达最高(P<0.05)。结论NOD1信号通路在烟曲霉菌感染的小鼠肺组织中得以活化,其介导的天然免疫对抗烟曲霉菌感染和保护小鼠肺组织起了一定的作用。
- 石青李祥罗闳丹刘金辉谢小梅
- 关键词：天然免疫烟曲霉菌
- 小鼠侵袭性肺曲霉病发病过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活被引量：8
- 2010年
- 目的:研究小鼠侵袭性肺曲霉病(IPA)发生过程中TLRs/NF-κB信号通路的激活,探讨IPA的发病机理。方法:小鼠随机分为正常组(N)、正常接菌组(N+Af)和IPA模型组(IPA),经鼻吸入烟曲霉(Af)孢子后在不同时相点处死小鼠,无菌取肺组织行病理切片、Af菌落计数,RT-PCR法检测TLR2和TLR4 mRNA、蛋白印迹法检测NF-κBp65、IL-1β的表达。结果:(1)鼻吸入Af后72小时时,IPA组肺组织出现严重炎症反应,并有大量的菌丝生成,同时各时相点的菌负荷均高于N+Af组;(2)与N+Af组比较,IPA组TLR2 mRNA后期异常高表达,TLR4 mRNA持续低表达,NF-κBp65早期骤然升高后又持续下降,IL-1β一直呈低表达状态。结论:TLRs的异常激活导致宿主下游信号的低反应性,宿主不能清除Af促使了IPA的发生发展。
- 李祥罗闳丹石青谢小梅刘金辉
- 关键词：侵袭性肺曲霉病AF天然免疫模式识别受体
- 柠檬醛对小鼠侵袭性肺曲霉病的作用被引量：6
- 2009年
- 目的研究中药活性成分柠檬醛对实验小鼠侵袭性肺曲霉病(IPA)的作用。方法小鼠随机分成正常组,正常+接种烟曲霉菌组,IPA模型组,IPA+不同剂量(高、中、低3个剂量)柠檬醛给药组及阳性对照组。建立IPA模型后,ip给药不同剂量柠檬醛,阳性对照组ig酮康唑,连续7 d,第8天处死各组小鼠,分别取肺、脾、肝、肾组织行烟曲霉菌培养和观察病理损伤;同时另取各用药组和IPA模型组15只小鼠做生存实验。结果中、高剂量柠檬醛治疗的IPA小鼠各脏器烟曲霉菌落数均低于IPA模型小鼠,且烟灰色色素明显减少;病理结果显示IPA模型小鼠肺组织可见大量菌丝,炎症细胞浸润,病理损伤明显;中、高剂量柠檬醛组肺组织未见菌丝。生存试验表明柠檬醛中、高剂量组小鼠的生存率和生存质量明显优于未用药组。结论柠檬醛可缓解IPA小鼠的肺组织病理损伤,明显减缓IPA的发展。
- 罗闳丹杨芬施旻刘金辉谢小梅
- 关键词：柠檬醛侵袭性肺曲霉病烟曲霉菌
