广东省自然科学基金(31005)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：北京大学深圳医院中南大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 尼克酰胺、β-细胞调节素、bFGF、HGF联合诱导人脐血CD34^+细胞向胰岛素分泌细胞的分化被引量：1
- 2007年
- 目的探讨在体外培养条件下用尼克酰胺、β-细胞调节素(betacellulin)、bFGF、HGF诱导人脐血CD34+细胞向胰岛细胞的分化。方法用磁性细胞分选试剂盒(MACS)分离出CD34+细胞后在含5%FBS,1×ITS,4.7mg/L亚油酸,10-4mol/L 2磷-酸抗坏血酸的低糖型DMEM中培养,扩增后于培养第5d加入尼克酰胺、betacellulin、bFGF、HGF进行诱导,并于诱导14d、24d留取细胞。应用RT-PCR、免疫细胞化学染色方法检测分化细胞中胰岛细胞标志物,并用ELISA方法检测培养液中胰岛素水平。结果流式细胞仪检测结果显示,CD34+细胞的平均分离纯度>90%,达到分离要求。RT-PCR检测到诱导后的CD34+细胞表达nestin、ngn3、IPF-1 mRNA。免疫细胞化学染色可见诱导的CD34+细胞中出现nestin和insulin阳性表达细胞。胰岛素分泌细胞的分化率平均为(9.8±2.7)%。ELISA检测发现诱导组和未诱导组培养液中的insulin含量有显著性差异(P<0.01)。结论体外联合应用上述因子能诱发脐血CD34+造血干细胞向胰岛素分泌细胞的分化。
- 张芳婷万汇娟区文超龙霞叶静于洁鲁树坤房家智
- 关键词：免疫细胞化学脐血CD34^+细胞
- 晚期激活抗原-4在CD34^+造血干/祖细胞宫内移植早期归巢中的作用
- 2006年
- 目的探讨黏附分子晚期激活抗原-4(VLA-4)在脐血CD34+造血干/祖细胞小鼠宫内移植早期归巢中的作用。方法用密度剃度离心的方法分离脐血CD34+细胞,经SCF和IL-6扩增24h,在BALB/c母鼠怀孕第15天经胎鼠腹腔注射CD34+细胞,每只胎鼠约注射1×105个细胞。用PKH26标记细胞的方法追踪早期归巢情况。在VLA-4阻断实验中,CD34+细胞注射前用20μg/ml抗VLA-4单抗孵育30min。分别于注射后48h用流式细胞仪检测小鼠胎肝细胞中的人CD45+细胞。结果SCF+IL-6扩增后脐血CD34+细胞VLA-4表达由原来的(26·34±5·37)%增高至(65·67±8·72)%(P<0·01)。扩增的细胞经胎鼠腹腔移植48h后,在胎肝中可以见到PKH26标记的CD34+细胞,流式细胞仪检测胎肝中人CD45+细胞百分率为(26·54±9·56)%。CD34+细胞移植前经抗VLA-4单抗预处理后胎肝中人CD45+细胞检出率显著降低(3·57±1·25)%,P<0·01。结论VLA-4对CD34+造血干/祖细胞宫内移植早期归巢有重要作用。
- 区文超鲁树坤张芳婷王丹军聂李平柳金周小莹谭孟群
- 关键词：造血干细胞黏附分子归巢宫内移植
- 细胞因子短期扩增对造血干／祖细胞黏附和迁移能力的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨干细胞因子(SCF)+白细胞介素-6(IL-6)短期扩增对CD34+造血干/祖细胞黏附和迁移能力的影响。方法:用密度剃度离心的方法分离脐血CD34+细胞,经SCF和IL-6孵育48 h,用CCK-8方法检测CD34+细胞增殖能力;用流式细胞仪检测处理前后的CD49d(VLA-4)、CD11 a(LFA-1)、CD62L(L-selectin)及CD184(CXCR4)的表达。用纤连蛋白(FN)包被96孔板,检测经或未经因子扩增的CD34+细胞的黏附能力。扩增的CD34+细胞悬浮于transwell培养板的上层,下层添加基质细胞衍生因子(SDF-1),流式细胞仪检测迁移细胞数,计算迁移率。结果:经SCF+IL-6处理48h后CD34+细胞扩增近3倍;表达CD49d、CD11 a、CD62L及CD184的CD34+细胞的百分数分别由原来的26.34%±5.37%、17.63%±4.57%、46.38%±6.61%和9.58%±1.56%增加到65.67%±8.72%、56.67%±6.34%、84.76%±9.57%和19.32%±3.64%(P<0.01)。扩增后的CD34+细胞对FN的黏附能力及在SDF-1诱导下的迁移作用都显著增强(P<0.01)。结论:SCF+IL-6短期扩增CD34+造血干/祖细胞显著增加细胞的黏附能力,增加SDF-1诱导的迁移作用,可能是SCF+IL-6促进归巢的主要机制之一。
- 区文超鲁树坤张芳婷张立兵聂李平周小莹谭孟群
- 关键词：归巢细胞黏附分子细胞运动
