国家自然科学基金(30000207)
- 作品数：18 被引量：66H指数：4
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- 缺氧诱导人视网膜色素上皮细胞19中血管内皮生长因子mRNA表达及金雀异黄素的抑制作用被引量：3
- 2005年
- 目的:观察缺氧对人视网膜色素上皮细胞19中血管内皮生长因子mR-NA表达的诱导作用,以及金雀异黄素对其血管内皮生长因子mRNA和蛋白表达的抑制作用。方法:实验于2004-02/12在南京医科大学生理学实验室完成。视网膜色素上皮细胞缺氧(体积分数为0.05的CO2/体积分数为0.95的N2)2,12,24,36h后,用反转录聚合酶链反应检测该区域血管内皮生长因子mRNA表达;细胞用50,100,200μmol/L金雀异黄素和50μmol/LPD98059预处理后缺氧2和24h,用反转录聚合酶链反应检测人视网膜色素上皮细胞19细胞中血管内皮生长因子mRNA表达,用酶联免疫吸附分析检测细胞培养液上清中血管内皮生长因子蛋白表达。结果:①缺氧2,12,24,36h人视网膜色素上皮细胞19细胞血管内皮生长因子mRNA表达是正常组的2.6,3.1,8.4,2.9倍(P<0.05,n=8)。②缺氧2h:50,100,200μmol/L金雀异黄素和50μmol/LPD98059可以抑制缺氧组血管内皮生长因子mRNA表达的51.1%,71.6%,79.7%和55%(P=0.01,n=10),蛋白表达分别为(97.00±12.79),(58.85±20.21),(37.93±14.41),(57.83±9.66)ng/L。③缺氧24h:50,100,200μmol/L金雀异黄素和50μmol/LPD98059可以抑制缺氧组血管内皮生长因子mRNA表达的55.0%,78.7%,90.7%和67.2%(P=0.000,n=10),蛋白表达分别为(189.60±20.20),(117.70±21.97),(49.7±13.17),(86.33±12.47)ng/L。结论:缺氧对血管内皮生长因子mRNA表达的诱导呈时间依赖性;金雀异黄素可以在转录及转录后水平抑制缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞19细胞中血管内皮生长因子表达的上调。金雀异黄素对血管内皮生长因子mRNA和蛋白表达的抑制作用也呈浓度依赖性。
- 袁志兰周青王斌戈应滨袁孝如
- 关键词：视网膜上皮细胞内皮生长因子
- Genistein对高钾和化学缺氧所致人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用被引量：6
- 2005年
- 目的:研究Genistein(gen)对高钾和化学缺氧所致人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞损伤的保护作用。方法:采用体外培养人RPE细胞,MTT法测定细胞存活率以及在倒置相差显微镜下观察细胞形态改变。结果:200mmol/LKCl作用12h可降低细胞存活率至(43.97±3.43)%,gen50、100、200μmol/L可明显提高细胞存活率且呈浓度依赖性。相差显微镜观察细胞形态发现,200mmol/LKCl作用2h细胞膜开始皱缩,4h胞膜皱缩更加明显,胞核也开始浓缩,8h后仅见细胞核和断裂呈絮状的细胞膜,12h仅可见固缩的细胞核,而200μmol/Lgen可以减轻细胞损伤,4h后方见细胞膜开始皱缩;CoCl2损伤模型中,500μmol/LCoCl2作用12h可降低细胞存活率至(57.81±17.19)%,gen50、100、200μmol/L时也可浓度依赖性升高细胞存活率。结论:Gen对高钾和化学缺氧所致人RPE细胞损伤具有保护作用。
- 邹颖李华严虹潘金顺王斌
- 关键词：GENISTEIN人视网膜色素上皮细胞
- 缺氧诱导因子1表达抑制使缺氧-复氧的PC12细胞氧自由基生成增加被引量：15
- 2004年
- 目的 :研究PC12细胞化学性缺氧 复氧以及缺氧诱导因子 1α(HIF1α)反义寡核苷酸对HIF1α蛋白表达和氧自由基生成的影响。 方法 :制造化学缺氧 复氧模型 ,用含或不含氯化钴的DMEM培养液孵育PC12细胞。封闭HIF1α基因表达 ,用含HIF1α反义寡核苷酸和氯化钴的DMEM培养液孵育PC12细胞。HIF1α寡核苷酸进行同样处理和只用含氯化钴的DMEM培养液孵育PC12细胞作为对照。采用免疫细胞化学染色法检测HIF1α蛋白表达 ,并用激光共聚焦显微镜进行半定量。检测细胞超氧化物歧化酶 (SOD)的活性和丙二醛 (MDA)的含量 ,间接反映氧自由基的生成量。 结果 :与缺氧组相比 ,缺氧 复氧组复氧后HIF1α蛋白表达受到抑制 ,同时氧自由基生成增加。HIF1α反义寡核苷酸亦可抑制HIF1α蛋白表达和升高氧自由基水平。 结论 :抑制HIF1α的表达可导致氧自由基大量生成 ,加重缺氧 复氧PC12细胞的损伤。
- 王娟严宏力倪永兵王斌肖继皋王梦
- 关键词：缺氧诱导因子-Α复氧氧自由基PC12细胞
- 建立眼内新生血管动物模型的探索被引量：3
- 2005年
- 目的建立适合我国现有条件的眼内新生血管动物模型。方法C57BL/6新生小鼠随机分为正常对照组和相对缺氧组;缺氧组小鼠于出生后第7d放入含氧量75%的密闭干燥箱内,5d后恢复常氧环境饲养,于21日龄处死,取眼球固定、切片、染色后,计数视网膜切片中突破内界膜的血管内皮细胞数,定量分析视网膜新生血管数。结果正常对照组视网膜切片中突破内界膜的血管内皮细胞核数为0.74±0.81,相对缺氧组为22.79±3.29,有显著性差异,成功制造出眼内新生血管的动物模型。同时发现保持氧含量的稳定和保证母鼠的存活是实验成功的关键。结论用本方法制造眼内新生血管的动物模型,简单、实用、可靠,适合于我国现有的实验室条件。
- 张民英邹颖潘金顺李华
- 关键词：视网膜新生血管动物模型
- 金雀异黄素对缺氧诱导的人ARPE-19细胞内碱性成纤维细胞生长因子蛋白表达的影响(英文)被引量：3
- 2004年
- 目的:研究低氧对体外培养的人ARPE-19细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的诱导作用,以及金雀异黄素(genistein,Gen)对其表达的影响。方法:采用免疫荧光组织化学技术和激光共聚焦显微镜,以荧光比值来表示bFGF的表达,半定量分析低氧处理不同时间对体外培养的ARPE-19细胞bFGF蛋白表达的诱导作用,以及Gen对低氧诱导的bFGF表达的影响。结果:对照组有低水平bFGF蛋白的表达,随着低氧处理时间的延长,荧光比值在1h达到高峰。Gen(50,100,200μmol/L组)与二甲基亚砜(DMSO)对照组相比,均可明显抑制低氧诱导的bFGF的表达,且这种抑制作用呈浓度依赖性。结论:Gen可抑制低氧诱导的ARPE-19细胞bFGF表达,提示Gen对视网膜新生血管的形成具有潜在的预防及治疗价值。
- 单俊杰袁志兰李华王斌
- 关键词：金雀异黄素缺氧ARPE-19蛋白表达视网膜新生血管
- 缺氧诱导因子1相关肽对化学缺氧引起的PC12细胞损伤的保护作用
- 2005年
- 目的:研究氯化钴模拟化学缺氧条件下,缺氧诱导因子1相关肽(BW8)对PC12细胞损伤的影响。方法:氯化钴模拟缺氧后,给予不同浓度BW8,观察细胞生存率的变化,并测定细胞内谷胱苷肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:BW8可以抑制氯化钴诱导的PC12细胞存活率下降,且作用呈浓度依赖性;用尼莫地平预处理的PC12细胞存活率也显著提高,BW8的作用程度与尼莫地平接近;用终浓度为125μmol·L^(-1)的氯化钴处理细胞,可以显著降低细胞内GSH含量及SOD活力,而BW8可以浓度依赖性升高SOD活力,明显提高GSH含量。结论:多肽BW8对于化学缺氧引起的PC12细胞损伤具有一定的保护作用。
- 严虹黄艳李华潘金顺王斌
- 关键词：相关肽缺氧诱导因子1化学缺氧超氧化物歧化酶谷胱苷肽
- TMB-8抑制5-HT和KCl引起大鼠脑血流量减少被引量：3
- 2003年
- 目的 研究TMB 8对 5 HT和KCl引起的大鼠脑血流量 (CBF)减少的作用。方法 用激光多普勒血流仪测量大鼠CBF ,在人工脑脊液灌流液中加入TMB 8和工具药进行干预。结果 1 2 5 ,2 5和 50 μmol·L-1 TMB 8对大鼠CBF无明显影响 ,TMB 8可抑制 5 HT引起的大鼠CBF减少。在 1 μmol·L-1 5 HT引起大鼠CBF持续下降的状态下 ,TMB 8可浓度依赖的增加大鼠CBF。TMB 8也可抑制KCl引起的大鼠CBF减少。在 2 0mmol·L-1 KCl引起大鼠CBF持续下降的状态下 ,TMB 8可浓度依赖的增加大鼠CBF。结论 TMB 8可抑制 5 HT和KCl引起的大鼠CBF减少 ,也可浓度依赖的增加被 5 HT和KCl所减少的大鼠CBF 。
- 王斌张爱霞邹颖王娟肖继皋
- 关键词：脑血流量
- 缺氧条件下维生素E对视网膜色素上皮细胞生长的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:自行设计细胞模型并观察缺氧条件下维生素E对培养视网膜色素上皮细胞生长的影响。方法:实验于2006-10/2007-03在南京医科大学生理实验室完成。①实验操作:取对数生长期的细胞,以正常条件为对照(常规培养和体积分数为0.95的空气,体积分数为0.05的CO2),建立人视网膜色素上皮细胞的缺氧模型(缺氧培养,体积分数为0.95的N2和体积分数为0.05的CO2混合气体,测氧仪测氧浓度<1%,24h),作用于细胞的维生素E浓度分别为0.1,0.2,0.3mol/L。②实验评估:四甲基偶氮唑盐法检测24h细胞活力(以吸光度A值表示);激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧水平;黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶活性。结果:①四甲基偶氮唑盐检测细胞生长活力:缺氧组细胞活力低于对照组(P<0.01),缺氧+维生素E组细胞活力有所提高,与缺氧组相比,差异显著(P<0.05)。随着维生素E浓度的提高,活力逐渐升高。②细胞内活性氧水平:与对照组比较,缺氧组细胞内活性氧的产生明显增多;与缺氧组比较,缺氧+维生素E组抑制视网膜色素上皮细胞内活性氧的产生。③超氧化物歧化酶活力检测:与对照组比较,缺氧组超氧化物歧化酶的活力降低;与缺氧组比较,缺氧+维生素E组超氧化物歧化酶活力升高,差异均具有显著性意义(P<0.05)。结论:缺氧引起视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤,维生素E抑制了缺氧情况下视网膜色素上皮细胞的损伤作用,维生素E主要通过提高超氧化物歧化酶活性来发挥抗氧化损伤作用,其抗氧化损伤作用有剂量依赖性。
- 马健袁志兰帅捷曹鎏洪瑾
- 关键词：老年性黄斑变性维生素E缺氧活性氧
- TMB-8对脑缺血大鼠脑血流量的作用
- 2001年
- 目的 研究 8- ( N,N-二乙胺 ) - n-辛基 - 3 ,4 ,5 -三甲氧基苯甲酸酯 ( TMB- 8)对局灶性脑缺血大鼠脑血流量 ( CBF)的作用。方法 用激光多谱勒血流仪测量大脑中动脉阻断 ( MCAO)大鼠脑血流量。分别于阻断前 3 0分钟和阻断后 2 0分钟给予 TMB- 8进行干预。结果 MCAO后 ,CBF迅速下降 ,维持恒定。阻断前 3 0分钟给予 TMB- 80 .5、1和 2 mg/ kg,可剂量依赖性抑制 CBF下降 ,阻断后 2 0分钟给予 TMB- 81mg/ kg,也能明显增加 CBF。结论 TMB- 8能预防和治疗 MCAO局灶性脑缺血大鼠 CBF减少 。
- 王斌倪永兵张民英俞惠兰肖继皋
- 关键词：TMB-8大脑中动脉脑缺血脑血流量
- 低氧诱导因子1αmRNA表达与神经细胞缺氧复氧损伤的关系被引量：11
- 2002年
- 目的:探讨低氧诱导因子1α(HIF-1α)与神经细胞缺氧复氧损伤的关系。方法:氯化钴处理PC12细胞模拟缺氧,去除氯化钴模拟复氧,用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒和RT-PCR技术检测缺氧0、1、2、4、8、12、16h以及复氧4、8、12hLDH漏出与HIF-1αmRNA水平。结果:①氯化钴处理细胞后,LDH漏出逐渐增加,8h达高峰,随后逐渐下降;HIF-1αmRNA水平逐渐增加,4h达高峰,随后逐渐下降。②氯化钴处理4h,去除氯化钴后,LDH漏出于8h明显增加,HIF-1αmRNA表达于4h明显减少,8、12h略有升高。结论:HIF-1α对神经细胞缺氧复氧损伤具有保护作用。
- 倪永兵王梦王斌肖继皋
- 关键词：低氧诱导因子1Α缺氧复氧乳酸脱氢酶PC12细胞
