国家自然科学基金(30800338)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：吉林大学第一医院吉林大学白求恩第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 分泌表达Aβ阻断肽的重组腺相关病毒的构建
- 2012年
- 目的构建可稳定分泌表达ABAD-DP的重组腺相关病毒系统,并在细胞水平研究它与Aβ42的结合能力。方法应用分子克隆技术构建含有融合基因NT4-TAT-6His-ABAD-DP(NTA)的腺相关病毒载体。应用磷酸钙共沉淀法进行病毒包装。应用免疫细胞化学方法检测重组病毒在Hela细胞中的表达。应用免疫荧光技术检测重组病毒与Aβ42在Hela细胞中的结合作用。结果 pGEM-T Easy/ABAD-DP经EcoR I酶切后,可以得到96bp的目的片段,ABAD-DP基因经DNA测序证实与GenBank序列一致;重组质粒pSSGH/NTA经EcoRⅠ与BamHⅠ联合酶切,可以得到384bp的目的片段;成功获得滴度为3.01×109PFU/ml的重组病毒;含有6×His标签的重组病毒在Hela细胞中实现表达;通过免疫荧光技术,可以分别观察到重组病毒组、Aβ42组和重组病毒+Aβ42组的绿色、红色和黄色荧光。结论成功获得能够稳定表达ABAD-DP并能够在细胞内与Aβ42结合的重组腺相关病毒,为阿尔茨海默病的治疗提供新的思路。
- 王明宇杨宇吴江王旭车丽赫孙欣杨弋
- 关键词：基因克隆
- Aβ阻断肽适配子TRX1-ABAD-DP-TRX2融合基因的克隆及表达被引量：2
- 2012年
- 目的 将Aβ阻断肽（ABAD-DP） cDNA插入人硫氧化还原蛋白（hTRX）的活化位点,克隆融合基因TRX1-ABAD-DP-TRX2 （T-A-T） cDNA,为基因治疗阿尔茨海默病奠定基础.方法 通过PCR获得目的片段TRX1、TRX2、ABAD-DP,进一步将上述3目的片段按既定顺序插入腺相关病毒穿梭质粒pSSHG-CMV的多克隆位点,从而获得融合基因TRX1 -ABAD-DP-TRX2.经PEI介导Hela细胞包装重组腺相关病毒rAAV/T-A-T.感染NIH-3T3细胞,通过荧光免疫组织化学染色检测融合基因的表达及其与Aβ42的定位.结果 酶切后得到TRX1 -ABAD-DP-TRX2融合基因片段的大小约为435 bp,与理论值一致.荧光免疫组织化学染色检测到融合基因的表达,且共定位组T-A-T和Aβ42均位于NIH-3T3细胞胞质内.结论 成功克隆及表达了Aβ阻断肽适配子TRX1-ABAD-DP-TRX2融合基因,为进一步将阻断肽用于基因治疗阿尔茨海默病提供了基础.
- 王旭吴江杨弋王明宇车丽赫杨宇
- 关键词：融合基因
