国家自然科学基金(81060198)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
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- NK4基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达被引量：6
- 2011年
- 本研究构建携带人NK4基因的慢病毒载体,并将其转染人骨髓间充质干细胞(hBMSCs),明确转染后NK4表达情况。通过聚合酶链反应从HGFcDNA文库中克隆NK4基因,限制性内切酶酶切和基因重组构建慢病毒载体质粒pGC-FU-NK4,实时定量PCR检测病毒滴度。所获慢病毒(Lenti-NK4)转染hBMSCs后,荧光显微镜下观察荧光表达。ELISA检测培养上清中NK4表达。结果显示,所获NK4基因测序后与GeneBank报到序列完全一致,收集、浓缩病毒后测定其滴度为2×108TU/ml。Lenti-NK4转染hBMSCs后胞膜及胞浆有荧光分布,培养上清中NK4含量随感染时间延长而增加。提示携带NK4的慢病毒能安全、有效地转染hBMSCs,持续稳定表达。
- 祝荫程明吕农华罗时文谢勇刘东升
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 人骨髓间充质干细胞分离培养及体外诱导分化为成骨细胞被引量：4
- 2012年
- [目的]建立人骨髓来源的间充质干细胞(hBMSCs)分离、培养及传代的方法,观察成hBMSCs体外成骨潜能。[方法]采用全骨髓贴壁筛选法分离培养hBMSCs,流式细胞仪检测细胞表型;所得细胞第3代用含100 nmol/L地塞米松、5mmol/Lβ-甘油磷酸钠,50μg/ml抗坏血酸的条件培养基进行骨诱导,茜素红染色鉴定。[结果]分离培养的细胞流式细胞术检测显示CD44、CD105阳性,而CD34、CD45阴性,符合MSCs特征;hBMSCs经骨诱导后可形成钙结节,茜素红染色显示阳性。[结论]全骨髓贴壁筛选法可分离获得高纯度的hBMSCs,其在体外具有成骨潜能。
- 程明戴闽祝荫程细高范红先刘虎诚
- 关键词：间充质干细胞骨诱导成骨细胞
- 骨髓间充质干细胞体内外对胃癌细胞的趋向性被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stem cell,hBMSC)对胃癌细胞的趋化性,为将MSC研发成为胃癌基因治疗载体提供实验依据。方法:骨髓培养法分离培养bBMSC并进行流式细胞术鉴定。Transwell实验检测hBMSC对胃癌MKN45细胞和人成纤维细胞(humanfibroblast,hFB)的趋化能力。建立MKN45细胞裸鼠移植瘤模型,感染Lenti-EGFP(MOI为50)的hBMSC或hFB细胞经尾静脉注射入荷瘤小鼠,荧光显微镜下观察移植瘤组织及各脏器GFP的表达。结果:培养第3代的hBMSC细胞CD44、CD105阳性率为(96.7±1.84)%、(98.1±0.95)%,而CD34、CD45表达阴性。hBMSC细胞向MKN45细胞的趋化能力明显强于胃上皮细胞GES-1组及空白对照细胞[(239.5±54.3)vs(43.57±4.6)、(37.3±4.7)个,P<0.01],且hBMSC向MKN45细胞的趋化能力明显强于hFB细胞向MKN45细胞的趋化能力[(239.5±54.3)vs(27.7±16.7),P<0.01]。与hFB相比,hBMSC对胃癌移植瘤组织具有明显趋向性;hBMSC组移植瘤组织内可见GFP表达,移植瘤小鼠部分肝脏(20%)及肺脏(20%)有GFP表达,但较移植瘤组织内GFP表达率和强度均低(P<0.05)。结论:hBMSC在体内外对胃癌细胞均有特异性趋化作用,有望研发为胃癌基因治疗的良好载体。
- 祝荫程明谢勇陈江罗时文张焜和吕农华
- 关键词：胃癌间充质干细胞细胞载体趋化作用
