国家自然科学基金(30672478)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 人源VEGF单克隆抗体Fabμ和Fc5μ片段的制备被引量：3
- 2008年
- 用胰蛋白酶将Mr为900 k的人源VEGFIgM单抗切成Fabμ和五聚的Fc片段(Fc5μ)。用Sephacryl S-200对分离纯化两片段,用间接ELISA法测定IgM抗体及Fabμ片段的抗原结合活性。结果表明:按酶∶IgM为1∶30加入胰蛋白酶,63℃酶切30 min,可使IgM水解完全。用Sephacryl S-200纯化后,片段纯度≥90%。经ELISA间接法测定Fabμ的抗原结合活性后发现,虽与完整的五聚体IgM相比亲和力有所下降,但仍有较好的抗原结合活性,相对亲和力为4.29×108。
- 刘煜恽冬杰唐立旻陈建泉刘思国成国祥
- 关键词：单克隆抗体IGM抗体
- 一种具有人VEGF结合活性的人源单一重链可变区的克隆与表达
- 2010年
- 为避免一种来自五特征转基因小鼠的全人VEGF单克隆IgM抗体分子量大的不足,本研究探讨了该抗体单一重链可变区的功能特性。首先,PCR获得该抗体的重链可变区,将该序列克隆至pET28a表达载体内,在大肠杆菌中进行了诱导表达。通过变性纯化和复性等方法获得了具有生物学活性的16kDa重组抗体片段——rhVVH。体外结合实验表明,rhVVH保留有完整免疫球蛋白的人VEGF结合活性。人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖抑制实验表明:rhVVH可以剂量依赖性的抑制HUVEC的增殖。上述结果揭示了该抗体单一重链可变区保留有完整抗体的部分功能,为进一步开展全人源VEGF单克隆IgM抗体小型化研究奠定了基础。
- 刘珩刘思国武艺马梓力刘煜张爱民陈建泉成国祥
- 关键词：VEGF单域抗体
