黑龙江省博士后基金(LBH-Z05025)
- 作品数：2 被引量：9H指数：1
- 相关作者：任晓峰李广兴解真真王勇郑晓星更多>>
- 相关机构：东北农业大学军事医学科学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省博士后基金国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 肠出血性大肠杆菌VT1B亚单位的重组表达及其单克隆抗体的制备被引量：1
- 2010年
- 为制备抗肠出血性大肠杆菌(EHEC)VT1B亚单位的单克隆抗体(McAb),以大肠杆菌EDL933的基因组DNA为模板扩增VT1B基因,纯化后经BamHⅠ和XhoⅠ酶切,连入表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-VT1B,转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,实现了融合蛋白的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的27%。重组蛋白纯化后,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,获得3株融合细胞1G11、2H8、1B10,Western-blotting表明,此3株单抗能与VT1B蛋白特异性结合而与载体蛋白不反应。Ig亚类分别为IgG1、IgG2a和IgG2b,染色体数均大于100,腹水单抗ELISA抗体效价大于1∶256000,亲和常数分别为0.54×108M-1、0.95×108M-1、0.33×107M-1,间接ELISA叠加试验初步鉴定结果表明,这3株单抗针对的是同一抗原表位。此3株特异性单抗的获得为VT1毒素的检测奠定了基础。
- 洪杰华李广兴任晓峰霍贵成冯书章
- 关键词：肠出血性大肠杆菌原核表达单克隆抗体
- 产气荚膜梭菌plc基因的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：8
- 2012年
- 采用PCR方法扩增编码产气荚膜梭菌α毒素去除信号肽的plc基因片段,利用原核表达载体pGEX-6P-1构建重组质粒pGEX-plc,经双酶切和测序鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,表达产物经切胶纯化后作为免疫原制备多克隆抗体,应用间接ELISA和Western-blot方法对所得抗体进行检测。结果显示,经1.0mmol/L IPTG诱导4～5h后重组蛋白表达量最高,并且主要以包涵体的形式存在,分子质量为66ku。用间接ELISA方法检测的多抗血清效价达到1∶65 536。Western-blot结果证实,重组蛋白与制备的多克隆抗体发生特异性结合,具有良好的反应原性,而且多抗血清能够检测产气荚膜梭菌分泌的天然α毒素蛋白。上述结果表明,此多克隆抗体能够应用于临床诊断。
- 郑晓星解真真任晓峰王衡王勇杨静红任玉东马德星李广兴
- 关键词：产气荚膜梭菌多克隆抗体蛋白质印迹
