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基于生殖支原体黏附蛋白模拟表位的多抗原肽免疫效果的观察被引量：1: 2013年; 目的制备基于生殖支原体黏附蛋白（MgPa）模拟表位的多抗原肽（MAP），检测其诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答的水平，为研制安全、有效的基于模拟表位的Mg表位肽疫苗奠定实验基础。方法以多聚赖氨酸为核心基质，人工合成3种含MgPa模拟表位的八分枝MAP，用反相高效液相色谱（RP—HPLC）和质谱分析对其进行纯化与鉴定。将其单独或混合免疫BALB／c小鼠。间接ELISA测定小鼠血清中的特异性IgG抗体及其亚类的水平；MTT比色法检测MAP刺激免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖反应，并用ELISA检测其脾细胞培养上清中的IL-4和WN-γ水平。结果成功合成了较高纯度的含MgPa模拟表位的3种MAP，这3种MAP均能刺激小鼠产生IgG抗体，且以Thl型免疫应答产生的IgG2a型抗体为主；与单个MAP组相比，混合MAP免疫组小鼠产生了更多的IgG、IgGl和IgG2a抗体（P均〈0．01）；3种MAP均能特异性诱导免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖，且能刺激其产生较多的IL-4和IFN-1，混合MAP免疫组小鼠产生的IL4和IFN-γ，与单个MAP组相比差异具有统计学意义（P均〈0．01）。结论基于MgPa模拟表位的3种MAP均能刺激小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答，且混合免疫组诱导的免疫应答效果比单个MAP组更好。; 曾焱华游晓星唐双阳朱翠明余敏君吴移谋何军; 关键词：生殖支原体黏附蛋白模拟表位多抗原肽免疫原性

应用噬菌体展示肽库筛选生殖支原体黏附蛋白的模拟表位被引量：3: 2012年; 目的利用纯化的兔抗重组生殖支原体黏附素蛋白（rMgPa）的多克隆抗体（pAb）从噬菌体展示随机12肽库筛选MgPa的模拟表位。方法用纯化的兔抗rMgPa的pAb对噬菌体随机12肽库进行生物淘洗，随机挑取噬菌体克隆进行DNA测序与分析，并用MIMOX对噬菌体克隆所展示的肽序列进行生物信息学分析。用ELISA、竞争性结合试验和Westernblot检测噬菌体与pAb结合的特异性。结果4轮生物淘洗后特异性噬菌体克隆得到了明显的富集。依据氨基酸组成的不同，74个噬菌体克隆所展示的肽序列可大致分为3组。经对肽序列进行比较分析以及用MIMOX进行生物信息学分析，结果表明这3组的核心序列分别为：P—S-A-A／V—X—R—F／w—E／S．L—S—P、A—K—L／L-T／Q-X—T—L—X—L和K-S-L-S—R—X—D—X-I。ELISA、竞争性结合试验和Westernblot方法检测的结果表明噬菌体能与pAb发生特异性结合，说明其可能足MgPa的模拟表位。结论成功筛选到MgPa的3个可能的模拟表位，为研制基于Mg抗原表位的诊断试剂与多肽疫苗奠定了一定的实验基础。; 曾焱华游晓星何军刘良专唐正宇余敏君吴移谋; 关键词：生殖支原体黏附蛋白噬菌体展示肽库模拟表位

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湖南省研究生科研创新项目(CX20108381)

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