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小分子壳聚糖对DNA疫苗滴鼻和口服免疫的影响: 壳聚糖(chitosan)是一种具有高密度正电荷并能够与质粒DNA形成颗粒,并在体外携带DNA转染真核细胞的多糖类物质。又由于其具有粘膜粘附性,保护DNA免受Dnase降解的性质,使其成为DNA疫苗粘膜免疫发送介导的选择...; 张馨玉马一介金华利杨若耶肖冲张富春王宾; 关键词：壳聚糖解聚粘膜免疫 IGA; 文献传递

猪白细胞介素4的基因克隆及其在囊尾蚴DNA疫苗中的应用被引量：14: 2002年; 目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合免疫仔猪。结果:获得的猪IL-4 cDNA序列与文献报道的完全一致,在体外瞬时表达中获得了有生物学活性的猪IL-4。其与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合应用可有效提高个体体液免疫应答水平。结论:构建了一高效表达猪IL-4的真核表达质粒,初步实验证实了其在抗囊尾蚴DNA疫苗中的佐剂效应。; 吴丹郭瀛军王庆敏孙树汉; 关键词：基因克隆囊尾蚴 DNA疫苗

口蹄疫病毒融合表位基因在原核及真核表达系统中的正确表达被引量：3: 2002年; 目的:在体外检测口蹄疫病毒融合表位基因的表达。方法:计算机辅助设计(CAD)口蹄疫病毒融合表位基因SG,采用Western印迹分析和双抗体夹心ELISA法对该基因在原核系统和真核系统的表达进行检测。结果:得到不同表位组合的融合表达克隆,37℃培养2h后用IPTG诱导5h,融合蛋白在2×YT培养液中得到高效表达;全菌中相应蛋白条带与阳性抗体呈阳性反应,阳性反应强弱基本与表位特性及数量有关;得到4个P815细胞阳性克隆,培养上清、细胞膜和细胞质的抗原均为阳性,其中培养上清中浓度较低,细胞膜和细胞质中浓度较高。结论:CAD的融合表位基因在原核和真核系统均得到正确表达;CAD对于表位研究的设计很有帮助。; 张洪英郭瀛军陈祖欢林懿孙树汉; 关键词：口蹄疫病毒表位原核系统计算机辅助设计

DNA疫苗设计和研究策略: DNA疫苗是疫苗学领域相对较新的发展,现在这种方法正在逐步走向合理的DNA疫苗设计.策略包括优化载体骨架、转基因序列、共表达刺激序列、载体的导入系统以及为获得适宜的免疫刺激而靶向载体等.另一需要考虑的是利用设计的方法优化...; 王宾谢启发; 关键词：DNA疫苗; 文献传递

膜联蛋白32与低分子质量单链尿激酶融合基因的构建及高效表达被引量：7: 2002年; 目的：构建膜联蛋白32（annexin32，Anx32）和低相对分子质量单链尿激酶（ScuPA32k）的融合基因，并在大肠杆菌系统内作表达。方法：利用重叠区扩增法进行基因拼接，然后在谷胱甘肽S转移酶原核表达系统内表达，Western印迹验证表达产物。结果：重叠区扩增得到 1．8 kb融合基因，该基因在原核表达系统内得到高效表达，表达量占菌体总蛋白的 26％，Western印迹证明表达产物正确。结论：用重叠区扩增法进行基因拼接快速、简便。; 颜宏利孙树汉陈蕊雯杨湘越; 关键词：基因拼接基因表达大肠杆菌

壳聚糖对口蹄疫DNA疫苗黏膜免疫的影响被引量：10: 2005年; 以寻求有效DNA疫苗黏膜免疫途径为目的,利用带有负电荷的具有黏膜粘附性多糖-壳聚糖来包裹口蹄疫DNA疫苗pcD-VP1形成纳米级颗粒,用此颗粒经滴鼻、口服、直肠和生殖道4种黏膜免疫小鼠,检测小鼠的针对口蹄疫的体液和细胞免疫水平。结果显示:壳聚糖/pcD-VP1滴鼻免疫小鼠,抗体的高峰来临比只免疫pcD-VP1提前2周,直肠免疫处理中也呈现如此效果;经口服和生殖道途径的免疫,均没有呈现比pcD-VP1免疫组更好的抗体水平。但壳聚糖/pcD-VP1在生殖道和直肠免疫途径里均比pcD-VP1免疫组P.P.结的T细胞增殖水平高。所以,除口服途径以外,在滴鼻、直肠和生殖道免疫中,壳聚糖对质粒的包裹均一定程度上提高了DNA疫苗黏膜免疫的效果。; 张馨玉金华利杨若耶肖冲朱开春张富春王宾; 关键词：黏膜免疫壳聚糖 DNA疫苗

影响核酸疫苗应用研究的若干问题被引量：9: 2002年; 核酸疫苗又称基因疫苗或DNA疫苗,这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原,刺激机体产生特异而有效的免疫应答,尤其是能诱导产生具细胞毒杀伤性功能的T淋巴细胞,可有效预防病毒、细胞内寄生细菌和寄生虫所引起的传染病.核酸疫苗由于具有可诱发全面的免疫应答、提供同种异株交叉保护作用、能制备抗多种病原体的多价疫苗、兼有预防和治疗的作用等优点,且制备简单、成本较低、容易储存运输,自上世纪90年代初问世以来,已在多种疾病[1～3]的防治研究中显示出巨大的应用潜力.在美国,目前乙肝病毒、HIV 核酸疫苗、流感DNA疫苗、单纯疱疹病毒DNA疫苗已进入Ⅱ期临床研究,疟疾DNA 疫苗已进入Ⅲ期临床研究.在我国,某些兽用疫苗也已进入应用研究阶段.然而核酸疫苗是一个新生事物,围绕着增强核酸疫苗的免疫效果和安全性、改善纯化工艺等国际热点问题,在理论上还没有真正得到解决.这些问题大大限制了核酸疫苗的推广应用.; 孙树汉; 关键词：核酸疫苗免疫应答安全性免疫效果

乙肝DNA疫苗pVAX-PS对树鼩的免疫保护作用: 2003年; 目的:以树(鼠句)为实验对象研究乙肝DNA疫苗接种后所产生的免疫应答及对乙肝病毒攻击的保护作用。方法:以PCR法从adr亚型乙肝患者血清的病毒基因组中扩增含乙肝病毒的PreS2+S基因,插入pVAX1载体构建乙肝DNA疫苗pVAX-PS,并以此为候选疫苗,从股四头肌接种免疫树(鼠句)。免疫接种方式为肌注2次,间隔2周。用ELISA法分析DNA免疫诱导的抗体水平及阳转率。DNA免疫后部分树(鼠句)用乙肝患者(HBsA+,HBeAg+,HBcAb+)血清进行病毒攻击实验,通过检测乙肝感染的备种血清学指标及肝组织病理的变化来评价DNA疫苗的免疫保护作用。结果:DNA疫苗免疫2周后开始检出HBsAB,6周后达到峰值,8周后所有免疫接种树(鼠句)抗体阳转;与阴性对照组相比,DNA疫苗免疫使乙肝病毒攻击所致的各项血清学指标阳转率明显降低,肝脏病理性损伤明显减轻。结论:乙肝DNA疫苗pVAX-PS免疫树(鼠句)后诱发明显的体液免疫应答,并对乙肝病毒感染提供有效的保护作用。; 周凤娟胡振林戴建新施柯陈蕊雯林懿孙树汉; 关键词：DNA疫苗树鼩免疫保护作用免疫应答

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国家高技术研究发展计划(2001AA213111)