国家自然科学基金(U1170301)
- 作品数：11 被引量：52H指数：6
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- 相关机构：新疆农业大学伊犁出入境检验检疫局内蒙古农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛环形泰勒虫病实时荧光PCR诊断方法的建立及初步应用被引量：6
- 2013年
- 参考GenBank中牛环形泰勒虫18SrRNA基因序列,设计合成1对特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应参数,建立了检测牛环形泰勒虫的实时荧光PCR方法。研究结果表明,该检测方法最低可检测到10拷贝的核酸,比常规PCR敏感10倍;其组内变异系数<0.85%,组间变异系数<0.56%;对牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、伊氏锥虫等无荧光检测信号,与其他蜱传血液原虫无交叉反应;在47份被检样品中,实时荧光PCR和常规PCR的检出率分别为36.17%和25.53%。本研究建立的实时荧光PCR检测方法可用于牛环形泰勒虫病的诊断和分子流行病学调查。
- 郭庆勇王振宝何晓杰曹雯丽巴音查汗
- 关键词：实时荧光PCRTAQMAN探针
- 牛环形泰勒虫裂殖子/梨浆虫表面抗原基因非疏水区的克隆及GST-P27重组蛋白的高效表达被引量：1
- 2014年
- 试验据GenBank登载的牛环形泰勒虫裂殖子/梨浆虫表面抗原(the merozoite/piroplasm surface antigen,Tams1)基因序列(登录号:AF214842),设计1对特异性引物,经PCR扩增出696bp的Tams1基因片段,将其插入pGEX-4T-2表达载体,提取质粒进行双酶切鉴定并测序,同源性达98%;将插入阳性质粒的BL21(DE3)菌种诱导表达重组蛋白,经优化后在37℃、0.5mmol/L IPTG诱导4h的表达条件下获得了表达量达1.39mg/mL的可溶性融合蛋白,大小为53ku;表达产物在Glutathione Sepharose 4B柱上纯化后,免疫印迹检测结果表明重组蛋白GST-P27具有良好的反应原性。
- 曹雯丽王真沙它尔.卡哈尔王冰洁巴音查汗
- 关键词：牛环形泰勒虫克隆
- 牛环形泰勒虫病PCR诊断方法的建立及其应用研究被引量：3
- 2014年
- [目的]建立快速检测牛环形泰勒病的PCR诊断方法.[方法]根据牛环形泰勒虫裂殖子的表面抗原（Tams1）基因,设计一对特异性引物,以地方阳性病例提取的DNA为模板,用PCR扩增出目的条带,经克隆、测序分析后,通过优化反应体系,建立牛环形泰勒虫病的PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性进行验证试验.[结果]测序结果表明,扩增的目的片段与已知基因序列相似性为99％;该方法检测与牛的其他血液原虫无交叉反应,其最低检出限量为1.6×102 copies/μL.应用所建立的PCR检测方法对新疆吐鲁番市周边疑似地区419份牛全血进行了检测,结果阳性率为52.3％ （219/419）,而血液涂片检出率为43.7％（183/419）.[结论]建立的牛环形泰勒虫PCR快速诊断方法具有有一定的特异性和敏感性,可用于牛环形泰勒虫病的分子诊断和流行病学调查.
- 王冰洁郭庆勇曹雯丽张杨李永畅巴音查汗
- 关键词：环形泰勒虫PCR
- 新疆昌吉部分地区马梨形虫病检测初报被引量：15
- 2016年
- 为了解昌吉养殖马区域马匹感染梨形虫病情况,本文采用聚合酶链反应试验(polymerase chain reaction,PCR)与血液涂片镜检法相结合,对昌吉马匹随机抽样(n=78),进行马梨形虫病感染情况调查。血液涂片结果显示,马泰勒虫阳性率6.4%,驽巴贝斯虫阳性率为2.5%;PCR结果显示,马泰勒感染率为28.2%(22/78),驽巴贝斯虫感染率为10.2%(8/78),混合感染率为10.2%(8/78)。通过对采自马的蜱进行了形态学鉴定,共鉴定出4种蜱。该次对昌吉部分地区马梨形虫感染情况的调查结果,为该地区马的健康发展提供了科学依据。
- 瓦热斯.吐尔松李永畅朱玉涛图尔荪.萨迪尔杨红霞巴音查汗
- 关键词：马梨形虫病PCR
- 吐鲁番部分疫区牛环形泰勒虫病流行病学调查被引量：9
- 2013年
- 【目的】调查了解吐鲁番部分疫区牛环形泰勒虫病的流行情况。【方法】应用PCR方法和病原学血液涂片法对吐鲁番地区部分疑似牛环形泰勒虫病病例(n=126)进行了分子诊断,并用病原学方法对阳性头份的结果进行了分析、验证。【结果】该疫区126头份疑似病例的PCR方法检测的阳性结果为51.6%(65/126),病原学检查-血涂片染色镜检的阳性率为47.6%(60/126),而不同牧场、不同年龄间的感染率差异显著(P<0.05)。【结论】吐鲁番地区是牛环形泰勒虫病的流行区域,用分子生物学方法进行早期诊断,患牛才有治愈的可能,并且消灭媒介蜱,制定切实可行的综合防控措施。
- 沙塔尔.卡哈尔曹雯丽张扬王冰洁巴音查汗
- 关键词：分子诊断
- 新疆小亚璃眼蜱的鉴定及其携带牛环形泰勒虫病原DNA检测被引量：5
- 2015年
- 通过对璃眼蜱形态学及璃眼蜱属特异性基因(ITS-2)和其携带病原基因(Tams1)PCR扩增及其PCR产物的克隆、测序、同源性比较等,鉴定和检测采自新疆吐鲁番地区疑似牛体表璃眼蜱(n=50)及其携带病原状况。结果显示,采集的蜱虫经形态学鉴定均为小亚璃眼蜱,PCR扩增的璃眼蜱种属特异性ITS-2基因和环形泰勒虫Tams1基因序列大小分别为491 bp和534 bp。本试验获得的ITS-2序列与Gen Bank中已记载的小亚璃眼蜱ITS-2序列一致,与形态学鉴定结果相符,故这些璃眼蜱属于小亚璃眼蜱种(Hyalomma anatolicum)。在检测的50只璃眼蜱中,携带牛环形泰勒虫的有3只,阳性率为6%(3/50),并发现所扩增的携带病原目的基因序列与已登录记载的牛环形泰勒虫基因序列相似性为99%。结果表明,在传统形态学分类的基础上,借助分子生物学方法对璃眼蜱种属鉴定及无典型硬蜱种的鉴定具有简易、准确度高等特点,而且在璃眼蜱种属确定的基础上分离其携带的病原更有实际意义。
- 王冰洁朱玉涛刘梦丽宋瑞其巴音查汗
- 关键词：形态学PCR检测环形泰勒虫
- 血红扇头蜱和草原革蜱源性驽巴贝斯虫病原DNA检测被引量：6
- 2014年
- 为了进一步鉴定、识别血红扇头蜱及草原革蜱的形态结构,探究来源于内地(广州某地区)的血红扇头蜱及新疆境内广泛分布的草原革蜱携带同一种病原驽巴贝斯虫的情况,试验对血红扇头蜱及草原革蜱进行扫描电镜观察、鉴定,并参考驽巴贝斯虫Bc48基因序列合成引物,提取该种蜱携带的驽巴贝斯虫病原DNA,进行PCR检测。结果表明:血红扇头蜱和草原革蜱分别在其孔区、齿式、气门板及基节外距等部位具有超微结构差异,可分别作为其同种蜱的鉴别要点。经PCR成功扩增出了血红扇头蜱和草原革蜱所携带的驽巴贝斯虫病原DNA阳性条带大小为452 bp,来源于广州某地区的血红扇头蜱携带驽巴贝斯虫的阳性率为8.16%(12/147),来源于本地的草原革蜱驽巴贝斯虫的阳性率为3.84%(6/156)。
- 伊春阳郭庆勇薛红彭聪巴音查汗
- 关键词：驽巴贝斯虫PCR阳性率
- 内蒙古和新疆两地草原革蜱源性马驽巴贝斯虫病病原DNA检测被引量：7
- 2015年
- 为探究来源于内蒙古西部某地的草原革蜱及新疆境内广泛分布的草原革蜱携带同一种病原-驽巴贝斯虫的情况。本试验借助光学、电子显微镜进行鉴定了采自于不同植被(包括内蒙古、新疆两地)的草原革蜱;并参考驽巴贝斯虫Bc48基因序列,合成引物,提取该种蜱携带的马驽巴贝斯虫病原DNA,进行PCR扩增、检测。结果显示,来自内蒙古(N=147)、新疆(N=200)两地的草原革蜱在假头基部、多孔区、齿式、气门板等超微结构形态方面基本相似。经PCR成功扩增出了草原革蜱所携带的驽巴贝斯虫病原DNA阳性条带452 bp;来源于内蒙古西部某地的草原革蜱携带驽巴贝斯虫的阳性率为8.16%(12/147),来源于新疆和静县平原的草原革蜱驽巴贝斯虫的阳性率为13.50%(27/200)。这些参数可为草原牧区优势分布蜱虫-草原革蜱所传播家畜血液原虫病的防治提供科学依据。
- 敖敦格日勒格日勒图朱玉涛巴音查汗
- 关键词：草原革蜱驽巴贝斯虫阳性率
- 牛源环形泰勒虫吐鲁番流行株Ta-t的体内扩繁试验被引量：2
- 2015年
- 以被去除脾的昆明小白鼠为实验动物(40只),接种牛源环形泰勒虫吐鲁番流行株Ta-t,进行小鼠体内扩繁试验,并于接种后第8、12、24、48小时以及第3~10天每天经血液涂片检查接种后昆明小白鼠的红细胞染虫率,观察分析其扩繁情况;经昆明小白鼠心脏、眼球采血的方法收集其最高染虫率(15%以上)的血液内裂殖子,并进行冻存,摸索其保存、复苏条件等。结果显示,除脾术后昆明小白鼠均存活,检测其呼吸、脉搏、食欲、精神状态皆良好,说明摘脾手术成功;接种后第48小时可在昆明小白鼠血液里观察到裂殖子,第5~9天每组昆明小白鼠的平均染虫率可达15%~20%(最高峰),第10天后染虫率开始下降,血液涂片中裂殖子数量渐渐减少;经试验发现,在雌雄性昆明小白鼠体内的染虫率差异极显著(P=0.007<0.01),去脾昆明小白鼠与未去脾昆明小白鼠的染虫率差异也极显著(P=0.000 2<0.01),牛源环形泰勒虫在除脾的昆明小白鼠血液内能被置换、增殖。染虫率为15%以上时昆明小白鼠血液里的裂殖子可用冷冻(-80℃)保存,亦可制作玻片裂殖子抗原备用,保存半年以内的裂殖子复苏活性最佳。该试验数据可为建立环形泰勒虫动物模型、教学、科研提供丰富的血液原虫株资源。
- 郭庆勇林涛伊春阳王冰洁朱玉涛巴音查汗
- 关键词：环形泰勒虫
- 牛巴贝斯虫实时荧光PCR检测方法的建立被引量：8
- 2013年
- 为建立牛巴贝斯虫(B.bovis)的TaqMan实时荧光PCR检测方法,本研究根据GenBank中B.bovis的18S rRNA基因保守序列,设计引物和TaqMan探针,通过优化反应体系,建立检测B.bovis的实时荧光PCR方法。试验结果表明:实时荧光PCR对靶基因的最低检测值为1.31×101copies/μL,比常规PCR的敏感性高1 000倍;而且与牛的其他血液原虫无交叉反应;组内及组间重复性试验的变异系数均小于3%,具有良好的重复性;在23份被检样品中,实时荧光PCR和常规PCR的检出率分别为52.17%和30.43%。该检测方法的建立为B.bovis的检测提供了一种快速、敏感、特异的技术手段。
- 刘启生王振宝王真哈森张玉婷巴音查汗
- 关键词：牛巴贝斯虫实时荧光PCRTAQMAN探针
