国家自然科学基金(30000179)
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
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- 相关机构：北京协和医院北京大学中国医学科学院中国协和医科大学更多>>
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- 绒毛膜癌耐药细胞系的建立及人白细胞介素2基因转染后对其多药耐药性的逆转作用被引量：15
- 2001年
- 目的 建立绒毛膜癌 (绒癌 )的耐药细胞系 ,应用基因工程技术将人白细胞介素 2 (hIL 2 )基因导入绒癌耐药细胞系 ,观察hIL 2基因转染后对绒癌耐药细胞耐药性的逆转作用。方法 采用间歇诱导的方法 ,用鬼臼乙叉甙 (VP 16)诱导绒癌细胞系JEG 3 ,建立耐药细胞系 ,四甲基偶氮唑蓝比色法检测该耐药细胞系对多种化学治疗药物的耐药指数 ,及多种耐药基因包括肺耐药蛋白、多药耐药相关蛋白、谷胱甘肽转移酶、二氢叶酸还原酶和多药耐药基因 (MDR1)的mRNA表达情况。用逆转录聚合酶链反应技术 ,克隆hIL 2基因 ,将hIL 2基因插入真核表达载体pcDNA3 1( + )中 ,提取质粒 ,通过阳离子脂质体将hIL 2基因转染绒癌耐药细胞系 ,用新霉素筛选含hIL 2DNA片段的单个细胞克隆 ,检测转染hIL 2基因后该细胞耐药指数的变化 ,测定转染后细胞hIL 2和多种耐药基因mRNA的表达。结果 用VP 16采用间歇诱导法 ,成功建立绒癌的VP 16耐药细胞系JEG 3 /VP 16,并检测出MDR1mRNA表达。转染hIL 2基因后 ,绒癌细胞中检测出hIL 2mRNA表达 ,转染hIL 2基因的细胞的耐药指数降低 ,JEG 3 /VP 16细胞转染pcDNA3 1( + ) hIL 2后 ,对VP 16的耐药指数由 3 8 7降至 6 0～6 1,对甲氨蝶呤的耐药指数由 14 5降至 2 6～ 2 5 ,对更生霉素的耐药指数由
- 崔竹梅向阳杨秀玉刘芝华
- 关键词：绒毛膜癌多药抗药性
- 转导人肿瘤坏死因子α基因对耐药性绒毛膜癌裸鼠移植瘤耐药性的逆转作用被引量：5
- 2003年
- 目的 探讨转导人肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor α,TNF α)基因 ,对耐药性绒毛膜癌 (绒癌 )裸鼠移植瘤耐药性的逆转作用。方法 将绒癌细胞系JEG 3(A细胞系 )、耐药性绒癌细胞系JEG 3/VP2 (B细胞系 )和转导TNF α基因的耐药性绒癌细胞系JEG 3/VP2 /TNF α(C细胞系 )接种于裸鼠颈背部皮下 ,建立绒癌裸鼠移植瘤模型。每种细胞系移植瘤模型均分为对照组 (腹腔注入生理盐水 )和化学药物治疗 (化疗 )组 [腹腔注入鬼臼乙叉甙 (VP 1 6) ] ,观察移植瘤的生长特点、组织学结构以及对化疗药物的敏感性 ;用逆转录聚合酶链反应方法和免疫组织化学方法 ,检测转导TNF α基因的耐药性绒癌裸鼠移植瘤中多药耐药 (multidrugresistance ,MDR1 )基因在mRNA和蛋白水平表达的改变。结果 移植成瘤率均为 1 0 0 % ,潜伏期 1 0～ 1 4d ;移植瘤组织学特征符合绒癌特点 ;C细胞系移植瘤的生长速度最慢 ,明显低于A、B两个细胞系的生长速度 (P均 <0 0 5) ;C细胞系对照组裸鼠的移植瘤[体积 (4 2± 0 5)cm3,重量 (0 95± 0 1 2 )g]比B细胞系对照组 [体积 (7 9± 0 3)cm3,重量 (1 60± 0 0 6)g]明显减少 (P <0 0 5) ,应用同样剂量的化学药物作用后 ,C细胞系化疗组肿瘤的抑制率 (41 0 %～42 5 % )接近A细胞系化疗组
- 冯凤芝向阳崔竹梅刘芝华杨秀玉
- 关键词：绒毛膜癌肿瘤坏死因子Α基因肿瘤移植耐药性
- 人肿瘤坏死因子-α基因真核表达载体的构建被引量：2
- 2003年
- 目的 :构建可在真核细胞内表达人肿瘤坏死因子alpha(hTNF α)基因的真核表达载体。方法 :应用RT PCR的方法从足月妊高征患者的胎盘组织中 ,扩增出hTNF αcDNA ,连接至载体pMD 18 Tvec tor中 ,经酶切鉴定与序列测定证实后 ,以亚克隆法构建于真核表达载体pcDNA3.1 myc his(- )A ,B ,C的相应酶切位点 ,通过RT PCR方法检测其在体外转导绒癌耐药细胞后hTNF α基因的表达。结果 :自胎盘中克隆的hTNF αcDNA经序列测定证实 ,与Genbank的序列完全一致 ;用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定证实 ,克隆基因正确插入载体pcDNA3 1 myc his(- )A ,B ,C。经脂质体介导转导绒癌耐药细胞后 ,检测到其在转导的细胞中稳定表达。结论 :通过DNA重组技术成功地构建了可在体外稳定表达hTNF
- 冯凤芝张卫光向阳刘芝华杨秀玉
- 关键词：肿瘤坏死因子基因疗法聚合酶链反应妊娠高血压综合症
- 人肿瘤坏死因子-α基因转导绒癌耐药细胞系体外耐药逆转的研究被引量：5
- 2003年
- 目的 将人肿瘤坏死因子 alpha(hTNF α)基因导入已建立的绒癌耐药细胞系 ,观察hTNF α基因转导后对绒癌细胞耐药性逆转的体外作用。方法 通过阳离子脂质体将hTNF α基因转导绒癌耐药细胞系 ,用新霉素筛选含hTNF α片段的单细胞克隆 ,用RT PCR方法和细胞免疫组织化学方法 ,检测转导hTNF α基因的耐药细胞中MDR1mRNA和MDR1蛋白 (P gp)表达水平的改变。采用四甲基偶氮唑蓝比色法 ,检测转导hTNF α基因的耐药细胞对足叶乙甙 (VP 16 )的耐药指数。结果 转导hTNF α基因后 ,绒癌耐药细胞中检测出hTNF αmRNA表达 ,转导hTNF α基因在mRNA水平能一定程度的逆转绒癌耐药细胞的MDR1,而在P gp蛋白水平几乎能完全逆转绒癌耐药细胞的MDR1。转导hTNF α基因的细胞的耐药指数明显降低。结论 hTNF α基因转导后 ,可通过调节MDR1的表达 。
- 冯凤芝向阳张卫光崔竹梅张颖杨秀玉
- 关键词：绒癌人肿瘤坏死因子-Α耐药性基因转导
- 人肿瘤坏死因子α基因对绒毛膜癌耐药细胞凋亡影响的体内研究被引量：2
- 2004年
- 目的 研究转染人肿瘤坏死因子α(huTNF α)基因对裸鼠绒毛膜癌 (绒癌 )耐药细胞移植瘤组织细胞凋亡的影响。 方法 用人绒癌耐药细胞系JEG 3 VP2和转染了huTNF α的绒癌耐药细胞系JEG 3 VP2 huTNF接种裸鼠各 6只 ,行足叶乙甙 (VP16 )化疗后 ,采用RT RCR、HE染色和TUNEL检测方法 ,观察移植瘤细胞的凋亡情况。结果 在接种JEG 3 VP2 huTNF α的移植瘤组织中 ,存在huTNF α基因的表达 ;JEG 3 VP2 huTNF α组出现凋亡小体的细胞和TUNEL阳性细胞明显多于JEG 3 VP2组 ,P <0 0 5。 结论 转染huTNF α基因促进了绒癌耐药细胞的凋亡。
- 张卫光冯凤芝向阳肖军军夏家骝
- 关键词：肿瘤坏死因子绒毛膜癌细胞凋亡裸鼠
- 人肿瘤坏死因子α基因对绒癌耐药细胞Bcl-2表达影响的体内研究被引量：1
- 2007年
- 目的研究转导人肿瘤坏死因子α(human tumor necrosis factor alpha,hTNF-α)基因对裸鼠绒癌耐药细胞移植瘤组织中Bcl-2表达的影响。方法以JEG-3、JEG-3/VP2和JEG-3/VP2hTNF三种绒癌细胞系接种18只裸鼠,采用RT-PCR、苏木精-伊红染色、免疫组织化学的方法,观察移植瘤细胞的凋亡和Bcl-2表达的情况。结果在接种JEG-3/VP2/hTNF-α的移植瘤组织中,存在hTNF-α基因的表达;JEG-3/VP2/hTNF-α组的Bcl-2阳性表达的细胞较少,但凋亡细胞数较多,与JEG-3组相近;而JEG-3/VP2组则相反。结论转导hTNF-α基因可能使绒癌耐药瘤细胞产生Bcl-2的量减少,进而促使了绒癌耐药瘤细胞的凋亡。
- 孙国锐冯凤芝向阳
- 关键词：肿瘤坏死因子绒癌BCL-2裸鼠
