山东省自然科学基金(Y2008C111)
- 作品数：5 被引量：11H指数：3
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- 蠕形螨全蛋白提取及相对分子量鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的探讨蠕形螨全蛋白提取方法,初步分析蠕形螨蛋白组分。方法采用自制裂解液和RIPA裂解液分别提取蠕形螨全蛋白,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离比较蛋白提取效果,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定部分蛋白质条带,Mascot检索软件查询NCBInr数据库,对蠕形螨蛋白组分进行初步分析。结果自制裂解液提取蠕形螨蛋白的效果优于RIPA裂解液。经数据库检索比对出21种可信蛋白,其中170 kD条带比对出的蛋白为肌动蛋白和胞质肌动蛋白,130 kD条带比对出的蛋白为谷氨酰胺连接酶和腺苷酰转移酶;15 kD以下条带比对出的蛋白大部分为组蛋白。结论自制裂解液液氮研磨法可提取到较高质量的蠕形螨全蛋白,实验提取并分析了蠕形螨的蛋白质组成,为蠕形螨蛋白组学研究奠定基础。
- 朱晓丽郭淑玲苏磊冯玉新袁方曙
- 关键词：蠕形螨蛋白质组学分子量
- 两种人体蠕形螨足和外生殖器超微结构的观察被引量：2
- 2010年
- 目的用环境扫描电镜(ESEM)观察毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨足及外生殖器的超微结构,并讨论其分类意义。方法用刮片式及镊式取螨器从成人额部皮肤取出活螨,用显微操作技术清洗分离后1 h内用ESEM进行扫描、拍照。结果清楚地观察到两种人体蠕形螨足和外生殖器的超微结构。发现两种蠕形螨足爪的形态和数目、外生殖器的位置和外形均不同:毛囊蠕形螨的足较粗壮,有股距,每足跗节具双叉爪、三叉爪各1个,叉爪较钝,双叉爪后有一指向后方的爪距;雌螨阴门位于腹面第4对足水平正中,纵向裂缝状阴门与其前方的一弧形皱褶呈锚状;雄螨外生殖器位于背部4个背足体毛中央,阳茎呈毛笔头状可从生殖口伸出。皮脂蠕形螨足较细,无股距,足跗节的叉爪尖锐且数量和外形变异较大,无爪距;雌螨阴门位于腹面第4对足水平正中之后,纵向裂缝状阴门与其前后两条弧形皱褶呈"工"字形;观察50条皮脂蠕形螨未见雄性外生殖器。结论用环境扫描电镜观察人体蠕形螨,标本不需特殊处理,得到的图像清晰、饱满。足和外生殖器超微结构的不同对于两种蠕形螨有分类学意义。
- 刘付红郭淑玲刘莹赵岩冯玉新袁方曙
- 关键词：生殖器超微结构
- 蠕形螨ISSR-PCR的反应体系优化及引物筛选被引量：3
- 2012年
- 目的以蠕形螨的DNA为模板,对蠕形螨简单重复序列锚定PCR(ISSR-PCR)反应体系优化并对ISSR引物进行筛选,为ISSR分析奠定基础。方法用自然沉降法收集山羊蠕形螨,用基因组DNA提取试剂盒提取山羊蠕形螨DNA,并以此为模板,以(CA)8RG(R为1分子的嘧啶)为引物,利用正交实验法,从Mg2+浓度、引物用量、dNTPs、DNA模板用量和TaqDNA聚合酶以及退火温度对蠕形螨ISSR-PCR反应体系进行优化,并以优化的反应体系筛选ISSR-PCR的引物。结果 ISSR-PCR 25μL最佳反应体系包括:0.4 mmol/L Mg2+、30 pmol引物、30～60 ng模板DNA、2u Taq酶,最佳退火温度为49℃、循环35次。筛选出10条条带清晰、多态性好、重复性高的引物。结论筛选出蠕形螨ISSR-PCR最佳反应体系和理想的引物,为蠕形螨的分子生物学研究奠定了基础。
- 刘艳荣刘付红肖克源郭淑玲冯玉新袁方曙
- 关键词：微卫星重复反应体系优化DNA引物
- 蠕形螨cDNA文库的构建及鉴定被引量：4
- 2012年
- 目的构建蠕形螨cDNA文库,以便进一步研究蠕形螨相关的基因。方法采用自然沉降法收集山羊蠕形螨,用TransZol Up试剂盒提取其总RNA,然后反转录合成第1链cDNA,通过LD-PCR获得第2链cDNA,将双链cDNA纯化去除小片段,收集大于500 bp的cDNA片段,与pGM-T载体连接,将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞TOP10建成蠕形螨cDNA文库,检验文库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入cDNA片段大小进行分析。结果 cDNA文库的库容量为2.56×106cfu,重组效率达98%,平均插入片段长度大于1 000 bp。结论构建的蠕形螨cDNA文库质量良好,为进一步对蠕形螨基因探索奠定基础。
- 肖克源郭淑玲刘艳荣苏磊冯玉新袁方曙
- 关键词：基因文库聚合酶链反应
- 流式细胞术测定蠕形螨基因组大小被引量：3
- 2013年
- 目的采用流式细胞术(FCM)测定蠕形螨基因组大小,为构建蠕形螨基因文库和筛选功能基因奠定基础。方法自然沉降法清洗收集蠕形螨,组织匀浆器和超声波破碎螨体,在柠檬酸介质中分离蠕形螨的细胞核。以家鸡血细胞核DNA含量为内标,用FCM测定经碘化丙啶(PI)染色的家鸡血细胞核和蠕形螨细胞核混合样品发出的PI荧光强度,通过比较蠕形螨与家鸡血细胞DNA含量峰值的倍数关系,计算出蠕形螨的基因组大小。结果采用FCM测得蠕形螨DNA含量约为1.05 pg/2C,以1 pg DNA相当于978 Mb计算得出蠕形螨基因组大小约为512 Mb。结论流式细胞术可快速、精确测定蠕形螨基因组大小,为蠕形螨基因组研究奠定了基础工作。
- 苏磊郭淑玲冯玉新肖克源朱晓丽袁方曙
- 关键词：蠕形螨基因组大小基因组学流式细胞术
