天津市自然科学基金(12JCYBJC17100)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：张毅郑荣秀朱恒刘元林徐芬芬更多>>
- 相关机构：天津医科大学总医院军事医学科学院河北北方学院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ICAM-1基因转染对小鼠间充质干细胞成脂分化功能的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨细胞间黏附分子1（ICAM-1）基因转染对小鼠间充质干细胞（MSC）向脂肪细胞分化的影响。方法构建含小鼠ICAM-1基因全长DNA片段的MIGRl-ICAM-1重组逆转录病毒质粒，连同空质粒MIGRl及包装质粒ECOS分别转染T293细胞，收集相关病毒上清并感染小鼠MSC细胞系C3H10T1／2细胞，荧光倒置显微镜下观察及real．timePCR法和流式细胞术检测转染效率，将获得稳定过表达ICAM-1的C3H10T1／2细胞（C3H10T1／2-ICAM-1细胞）和转入空质粒的C3H10T1／2细胞（C3H10T1／2-MIGRl细胞）向脂肪细胞诱导分化，以原位油红O染色和real—timePCR检测成脂分化能力及其关键转录因子C／EBPoL和PPARy mRNA的表达水平。结果成功构建MIGRl-ICAM一1逆转录病毒载体；感染C3H10T1／2细胞获得稳定过表达ICAM-1的C3H10T1／2-ICAM-1细胞和空载体对照C3H10T1／2一MIGRl细胞。成脂细胞诱导分化结果显示，无论是在自分化还是诱导分化组中，C3H10T1／2-ICAM-1细胞与转染空载体的细胞相比脂滴变小，其脂肪细胞数量分别为[（3．2±0．5）／孔、（12．2±3．8）／孔]，显著少于转染空载体的细胞[（11．2±0．4）／孔、（51．3±2．8）／孔]（P〈0．05）；C3H10T1／2一ICAM一1细胞自分化组和诱导分化组C／EBPoLmRNA表达水平分别为1．2±0．7和2．9±0．9）；PPAR-,／mRNA表达水平分别为1557．6±70．2和7547．0±442．2，均较转染空载体细胞的5．8±0．5和23．0±2．3：2453．04-215．6和9856．3±542．2下调（P〈0．05）。结论细胞表面ICAM一1过表达可抑制小鼠MSC的成脂分化。
- 徐芬芬朱恒陈继德刘元林刘雨潇郑荣秀张毅
- 关键词：基因ICAM-1间充质干细胞基因转染细胞分化
- 过表达VCAM-1对小鼠间充质干细胞成脂分化的影响与作用机制
- 2015年
- 目的:探讨基因修饰过表达VCAM-1对小鼠间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响与作用机制。方法:将稳定过表达VCAM-1的MSC细胞(MIGR1-VCAM-1)和转入空载体的MSC细胞(MIGR1)分别向脂肪细胞诱导分化,以原位油红O染色和real-time PCR检测成脂分化能力与相关关键转录因子C/EBPα和PPARγ的表达;Western blot检测相关信号通路P38、ERK和JNK通路的活化。利用信号通路抑制剂处理MSC,观察其成脂分化能力的变化。结果:无论是自分化组还是诱导分化组,过表达VCAM-1的MIGR1-VCAM-1/MSC与对照组MIGR1/MSC相比,脂滴变大,脂肪细胞数量显著增加(P<0.01);同时在mRNA水平调控成脂分化的关键转录因子C/EBPα和PPARγ表达显著上调;Western blot检测相关信号通路,结果表明JNK通路在VCAM-1调控成脂分化中明显下调,P38及ERK通路则显著上调;加入通路抑制剂后,JNK通路抑制可显著上调MIGR1-VCAM-1/MSC成脂分化能力,脂肪数量明显增加(P<0.01),且相关转录因子C/EBPα和PPARγ的mRNA表达也显著上升;而抑制P38及ERK通路则使MIGR1-VCAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ的mRNA表达水平下调,脂滴及脂肪细胞数则更小、更少。结论:过表达VCAM-1可促进小鼠MSC成脂分化,VCAM-1可能通过抑制JNK信号通路,活化P38及ERK通路促进小鼠MSC成脂分化能力。
- 汪李慧刘元林朱恒程岩倪永青马士凤陈秀慧郑荣秀张毅
- 关键词：血管细胞粘附分子1基因转染细胞分化
- VCAM-1基因敲减对小鼠间充质干细胞免疫调节能力的影响
- 2015年
- 目的:利用siRNA技术建立稳定低表达血管间粘附分子1(VCAM-1)基因的小鼠间充质干细胞系(C3H10T1/2)并探讨其对小鼠间充质干细胞免疫调节能力的影响。方法:利用基因重组技术构建逆转录病毒质粒GV118-VCAM-1-RNAi,应用酶切及测序方法进行相关鉴定,转染包装细胞系T293,收集病毒上清并感染C3H10T1/2细胞(C3),应用荧光倒置显微镜及流式细胞术检测转染效率,淋巴母细胞转化实验(LTT)和混合淋巴细胞反应(MLR)检测其免疫调节能力。结果:酶切和测序鉴定表明,成功构建了低表达VCAM-1的重组逆转录病毒载体GV118-VCAM-1-RNAi,感染C3H10T1/2细胞后,应用荧光显微镜和流式细胞术分选获得稳定低表达VCAM-1的间充质干细胞GV118-VCAM-1/C3;LTT和M LR实验结果显示,低表达VCAM-1基因的M SC抑制T淋巴细胞增殖的能力显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:敲减VCAM-1可显著下调MSC抑制T淋巴细胞增殖的能力。这为进一步研究VCAM-1基因与MSC免疫抑制功能的相关性提供了可靠的实验基础。
- 倪永青刘元林朱恒汪李慧马士凤陈秀慧郑荣秀张毅
- 关键词：血管细胞粘附分子1小RNA干扰基因转染间充质干细胞免疫调节
- 异基因骨髓间充质干细胞治疗实验性自身免疫性甲状腺炎疗效评价及作用机制被引量：3
- 2014年
- 目的探讨异基因骨髓间充质干细胞(BM-MSC)对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)的治疗作用及其机制。方法利用猪甲状腺球蛋白和弗氏佐剂免疫C57BL/6小鼠,制备EAT小鼠模型。BM-MSC干预组小鼠在建模同时尾静脉输注同源BM-MSC,每只3×105,每周1次,共4次。所有小鼠均在免疫后28 d处死,分离甲状腺组织,石蜡切片、HE染色后进行病理学分析;分离血清,放射免疫分析法检测甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、甲状腺微粒体抗体(TmAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、总3,5,3',5'-四碘甲腺原氨酸(TT4)、总3,5,3'-三碘甲腺原氨酸(TT3)、干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)水平。结果 1与正常对照组比较,模型组小鼠TgAb,TmAb和TPOAb均明显增高,TT4水平明显降低(P<0.05),TT3水平无明显差异,甲状腺组织破坏明显,提示成功建立EAT小鼠模型。2正常对照组甲状腺组织未见淋巴细胞浸润;模型组甲状腺组织淋巴细胞浸润明显;BM-MSC干预组可见甲状腺组织淋巴细胞浸润,浸润程度较模型组减轻。3与正常对照组相比,模型组血清中TgAb,TmAb,TPOAb和IFN-γ水平增高,IL-10水平降低(P<0.05);BM-MSC干预组与模型组相比,血清中TgAb,TmAb和TPOAb水平明显降低,TT4水平明显升高(P<0.05),TT3水平无明显差异,IFN-γ表达水平降低,IL-10表达水平增高(P<0.05)。结论 BM-MSC对EAT具有一定的治疗作用,其机制有可能与其调节辅助性T细胞(Th)1/Th2免疫平衡有关。
- 禇亚男徐芬芬江晓宇倪永青汪李慧张毅郑荣秀
- 关键词：间充质干细胞骨髓自身抗体
