江苏省卫生厅自然科学基金(H200158)
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- 抗人树突状细胞单克隆抗体可变区基因克隆和序列分析
- 2007年
- 目的:为了将抗树突状细胞(dendritic cells,DC)抗体应用于临床疾病治疗,计划克隆获得抗人DC单克隆抗体(McAb)的可变区序列,在此基础上进一步获得人源化的抗人DC抗体。方法:运用RT-PCR技术,从分泌抗人DC McAb的杂交瘤细胞株(H1E11)中,克隆出VH和VL基因片段,并对VH和VL进行了测序分析。所测得的重链和轻链在基因库中与相关的Ig的VH和VL基因序列进行经Blast同源性比较。结果:通过碱基和蛋白序列的比较确认为小鼠IgG的VH和VL基因。运用Dnasis软件对VH和VL基因进行阅读框分析和模拟翻译,并参照Kabat等人(1991)编写的Ig蛋白质编码序列图谱,根据其FRs和CDRs的序列特征进行Ig的家族分析,发现VH共有414 bp,编码138个氨基酸序列,属于小鼠IgG重链Ⅲ(A)家族;VL由396 bp编码,产生132氨基酸,属于轻链κV家族。结论:成功克隆抗人DC McAb重链和轻链的可变区。
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- 关键词：树突状细胞可变区基因克隆
- 抗人DC和抗大鼠DC单抗杂交瘤的细胞特异性鉴定
- 2007年
- 目的:进一步鉴定在以往研究中所获得的抗人树突状细胞(dendritic cells,DCs)单抗和抗大鼠单抗。方法:通过对GM-CSF和IL-4诱导人外周血获得人的DC和各种来源的造血系统肿瘤细胞系的直接和间接荧光染色,采用流式细胞仪分析这些单抗所识别的表位在人DC上的表达情况以及与其他细胞表达表位的交叉情况。结果:D5B10所识别的表位仅与K562细胞有较大的交叉性,而与其他来源的白血病细胞均无明显的交叉。72%左右的人外周血成熟DC存在D5B10和H1E11识别的表位;WZD3识别的表位与人DC交叉较少,仅24.44%。三种单抗所识别的表位在MTDC上均有,大约有一半的MTDC表达三种单抗所识别的表位。结论:本实验室所制备的抗人DC单抗和抗大鼠DC单抗所识别的表位在人和小鼠间存在着交叉,这意味着这些单抗在小鼠DC的研究中也可使用。此外抗大鼠DC单抗所识别的表位与人DCs间存在着交叉。由于以往在制备抗人DCs单抗时是采用外周血分离的DCs,因此本次研究的结果也表明外周血分离的DC和由GM-CSF,IL-4诱导的DC可能在成熟程度和表达的各类分子水平存在区别。
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- 关键词：树突状细胞单抗流式细胞术
