广西壮族自治区自然科学基金(0728134)
- 作品数：13 被引量：15H指数：2
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- 乳鼠耳蜗单离外毛细胞胞膜Prestin分布的实验研究
- 2012年
- 目的探讨乳鼠耳蜗外毛细胞(OHC)细胞膜上动力蛋白Prestin的分布。方法获取7日龄的Wistar乳鼠单离的耳蜗OHC,利用Prestin特异性抗体染色,在荧光显微镜下观察Prestin在OHC细胞膜上的表达与分布。结果单离OHC侧膜存在较为均一的Prestin抗体阳性染色;OHC基底部细胞膜亦见阳性染色,但较弱;侧膜与底端细胞膜结合部位未见阳性染色。结论 Prestin主要分布在Wistar乳鼠耳蜗OHC的侧膜,基底部膜也有少量表达。
- 张博尹时华
- 关键词：乳鼠耳蜗外毛细胞PRESTIN
- MK-801拮抗水杨酸钠致螺旋神经节细胞损伤的实验研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨非特异性阻断NMDA受体拮抗水杨酸钠对离体培养螺旋神经节细胞兴奋性损伤的作用。方法将培养的耳蜗螺旋神经节细胞随机分为3组,分别为正常对照组:培养液中仅加入1mM谷氨酸;水杨酸钠组:1mM谷氨酸+5mM水杨酸钠;MK-801组:50μM MK-801+1mM谷氨酸+5mM水杨酸钠。培养24h后加药物干预3h,收集细胞采用实时荧光定量PCR及免疫荧光技术检测BDNF exonⅣ,BDNF exonⅥ转录及Caspase-3mRNA转录和蛋白表达的改变,研究应用MK-801非特异性阻断NMDA受体拮抗水杨酸钠对离体培养螺旋神经节细胞兴奋性损伤的作用。结果水杨酸钠组较谷氨酸组及MK-801组螺旋神经节细胞中BDNF exonⅣ,BDNF exonⅥ和Caspase-3 mRNA的转录及Cas-pase-3蛋白的表达水平显著增高(P值均<0.05);BDNF exonⅣ的转录在MK-801组较谷氨酸组明显降低(P<0.05);BDNF exonⅥ的转录在MK-801组较谷氨酸组未发生具有统计学意义的改变;Caspase-3的转录及蛋白的表达在MK-801组较谷氨酸组显著提高(P<0.05)。结论非特异性阻断NMDA受体能拮抗水杨酸钠引起的离体培养螺旋神经节细胞中BDNFexonⅣ,BDNFexonⅥ及Caspase-3上调。
- 刘渊尹时华周琦黄训健舒竞铖韦顺莲
- 关键词：NMDA受体MK-801水杨酸钠耳蜗螺旋神经节
- 美金刚拮抗阿米卡星对豚鼠螺旋神经节细胞毒性的实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的通过圆窗龛局部给药,探讨美金刚对阿米卡星致豚鼠螺旋神经节细胞毒性的拮抗作用。方法将听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测结果小于40dBSPL的花色豚鼠共60只,随机分为4组,每组15只。Ⅰ组:空白对照组;Ⅱ组:单纯阿米卡星给药组(肌肉注射阿米卡星);Ⅲ组:人工外淋巴液(artificial perilymph,APL)+阿米卡星给药组(左耳圆窗龛注人APL60μl后,肌肉注射阿米卡星);IV组:美金刚+阿米卡星给药组(左耳圆窗龛注入溶于APL的美金刚5mg/ml,60μl后,肌肉注射阿米卡星)。阿米卡星注射量为400mg/kg/d,连续注射5天,停药14天后,每组动物行ABR阈值检测,将动物处死,取出每组动物左耳蜗。每组随机取6只通过免疫组织化学染色观察耳蜗螺旋神经节caspase3表达情况。剩下6只行原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)法检测螺旋神经节细胞凋亡率。结果给药前,各组动物ABR阈值检测结果均小于40dBSPL。给药后,各组动物左耳ABR阈值结果为:Ⅰ组:37.08±3.34dB SPL,Ⅱ组:90.42±5.42dBSPL,Ⅲ组:91.17±5.37dB SPL,IV组:78.75±6.78dB SPL。免疫组织化学染色显示,Ⅱ组、Ⅲ组动物耳蜗螺旋神经节caspase3表达较Ⅰ组升高(P<0.01)。IV组动物耳蜗螺旋节caspase3表达较Ⅱ组、Ⅲ组降低(P<0.05),较Ⅰ组升高(P<0.01)。TUNEL法检测螺旋神经节细胞凋亡率:Ⅱ组、Ⅲ组动物耳蜗螺旋神经节细胞凋亡率较Ⅰ组明显升高(P<0.001)。IV组动物耳蜗螺旋神经节凋亡率较Ⅱ组、Ⅲ组降低(P<0.01),较Ⅰ组升高(P<0.001)。结论 (1)美金刚经圆窗龛局部给药后肌肉注射阿米卡星,豚鼠ABR阈值低于单纯肌肉注射阿米卡星ABR阈值。(2)美金刚经圆窗龛局部给药后肌肉注射阿米卡星,螺旋神经节caspase3表达较单纯肌肉注射阿米卡星减少。(3)美金刚经圆窗龛局部给药后肌肉注射阿米卡星,螺旋神经节凋亡较单纯�
- 周琦刘渊唐安洲谭颂华黄训健尹时华
- 关键词：美金刚阿米卡星耳蜗圆窗膜螺旋神经节
- 内耳毛细胞再生的基因调控与基因治疗研究进展
- 2009年
- 任毅尹时华
- 关键词：内耳毛细胞感音性耳聋基因治疗
- NGB基因转染拮抗庆大霉素耳毒性作用的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的验证阳离子脂质体介导脑红蛋白(neuroglobin,NGB)基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性的保护作用。方法将ABR反应阈均不超过40dB SPL的120只健康花色豚鼠随机分为5组,每组24只:Ⅰ组:空白对照组;Ⅱ组:人工外淋巴液对照组(经左耳注入人工外淋巴液);Ⅲ组:人工外淋巴液实验组(经左耳注入人工外淋巴液后肌肉注射庆大霉素);Ⅳ组:空质粒转染组(经左耳注入空质粒pEGFP-C1后肌肉注射庆大霉素);Ⅴ组:NGB基因转染组(经左耳注入pEGFP-NGB后肌肉注射庆大霉素),庆大霉素均经后腿肌肉注射120mg.kg-1.d-1,共给药14天。停止给药后喂养14天,各组均行ABR检测,耳蜗基底膜铺片、免疫组化观察各组豚鼠耳蜗基底膜毛细胞形态学及NGB蛋白表达的变化。结果给药后Ⅰ组ABR反应阈平均为37.22dB SPL(左耳)和36.94dB SPL(右耳),Ⅱ组阈值平均为37.22dB SPL(左耳)和37.50dB SPL(右耳),Ⅲ组阈值平均为119.44dB SPL(左耳)和122.22dB SPL(右耳);Ⅳ组阈值平均为119.72dB SPL(左耳)和120.83dB SPL(右耳);Ⅴ组阈值平均为83.89dB SPL(左耳)和100.56dB SPL(右耳)。Ⅴ组ABR反应阈较Ⅰ组和Ⅱ组显著升高(P<0.05),较Ⅲ组和Ⅳ组显著降低(P<0.05)。Ⅴ组中手术耳ABR反应阈较非手术耳降低(P<0.05)。耳蜗基底膜铺片示Ⅰ组和Ⅱ组内外毛细胞排列整齐,无缺失,Ⅲ组和Ⅳ组内外毛细胞极少量残存,其中ABR阈值大于135dB SPL的豚鼠耳蜗毛细胞几乎消失殆尽,Ⅴ组毛细胞部分缺失,且主要是外毛细胞;免疫组织化学染色示Ⅴ组耳蜗毛细胞NGB蛋白表达量较其余各组均显著增高(P<0.05),其余各组几乎均未见明显阳性表达。结论本研究成功验证了阳离子脂质体介导NGB基因转染对庆大霉素致豚鼠耳毒性具有有效的保护作用。
- 任毅周琦唐安洲谭颂华方勤谢利红尹时华
- 关键词：脑红蛋白基因转染阳离子脂质体庆大霉素
- 水杨酸钠慢性给药对小鼠下丘核神经元超微结构及听反应特性的影响被引量：3
- 2007年
- 目的探讨水杨酸钠给药对小鼠下丘核神经元超微结构及听反应特性的影响。方法将36只成年健康昆明小鼠分对照组、水杨酸钠给药组(450mg.kg-1.d-1)和水杨酸钠(450mg.kg-1.d-1)+利多卡因(10mg.kg-1.d-1)组三组进行实验。经腹腔注射给药,15d后进行检测。采用透射电镜观测下丘核超微病理学改变;采用细胞外电生理记录技术研究下丘核区神经元在水杨酸钠给药后强度-发放率函数、强度-潜伏期函数和频率调谐曲线的变化。结果(1)水杨酸钠给药使下丘核神经元超微结构,如胞核、核周间隙、核糖体粗面内质网、和胞浆内部分线粒体等发生了明显的病理变性;水杨酸钠+利多卡因给药后下丘核神经元细胞核、核仁、线粒体等病变较水杨酸钠给药组明显减轻。(2)与对照组比较水杨酸钠给药使发放率函数不规则类型、潜伏期函数非单调型和宽阔型神经元调谐曲线类型明显增加(P<0.01,P<0.01,P<0.01);水杨酸钠+利多卡因给药可明显逆转水杨酸钠引起的上述听反应特性的改变。结论水杨酸钠引起下丘核神经元电生理特性发生改变的物质基础可能就是源于水杨酸钠对下丘核神经元超微结构的影响,利多卡因对这种损伤有一定的保护作用。
- 尹时华唐安洲仁毅谭颂华陈平蔡红武谢利红
- 关键词：水杨酸钠听反应超微结构
- 倍他司汀对豚鼠单侧迷路破坏后前庭内侧核组胺H3受体表达的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 观察倍他司汀（betahistine）对单侧迷路毁损后的豚鼠前庭内侧核（medial vestibular nucleus）组胺H3受体表达的影响.方法 选择听性脑干反应（ABR）阈值小于40 dBSPL的健康黑色赤目纯种豚鼠56只,采用随机数字表法分为3组：假手术组（8只）,单侧迷路破坏组（24只）,单侧迷路破坏＋倍他司汀组（24只）.单侧迷路破坏组和单侧迷路破坏＋倍他司汀组均损毁左侧迷路,假手术组手术打开听泡但保持迷路完好.单侧迷路破坏＋倍他司汀组损毁迷路后给予倍他司汀2.17 mg/kg腹腔注射,每天1次,连续给药至处死当天;另外两组腹腔注射等量生理盐水.破坏单侧迷路的两组在不同观察时间点（术后1、3、7d）各取8只豚鼠通过免疫组织化学染色观察双侧前庭内侧核组胺H3受体的表达变化.采用SPSS 16.0软件对实验数据进行统计分析.结果 单侧迷路破坏组术后1d及3d,受损侧前庭内侧核组胺H3受体表达增加,与假手术组相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）,术后7d则恢复至正常水平,与假手术组相比差异无统计学意义（P＞0.05）;未损侧前庭内侧核组胺H3受体表达强度各观察时间点与假手术组相比,差异无统计学意义（P值均＞0.05）.单侧迷路破坏＋倍他司汀组受损侧前庭内侧核组胺H3受体术后1d及3d较同期单侧迷路破坏组表达减弱（4.25 ±0.71、3.50 ±0.92 vs 5.75 ±0.71、5.50 ±0.93,P值均＜0.05）;术后3d、7d与假手术组相比差异无统计学意义（P值均＞0.05）.结论 豚鼠单侧迷路破坏后同侧前庭内侧核中组胺H3受体表达上调,倍他司汀可促进H3受体表达恢复至正常水平.
- 舒竞铖尹时华刘渊饶秀丽韦顺莲
- 关键词：前庭神经核倍他司汀
- 水杨酸钠对幼年和成年豚鼠听性脑干反应阈值及螺旋神经节谷氨酸脱羧酶表达的影响被引量：3
- 2008年
- 目的观察水杨酸钠对幼年和成年豚鼠听性脑干反应（ABR）阈值以及螺旋神经节谷氨酸脱羧酶（glutamic acid deceptive，GAD）表达的影响。方法选择出生4d的豚鼠加只和出生后1个月的成年豚鼠加只，分成4组（每组20只）：幼年对照组，成年对照组，幼年水杨酸钠给药组[300ms／（kg·d）]，成年水杨酸钠给药组[300mg／（kg·d）]。给药15d后每组随机选取10只豚鼠检测ABR阈值，采用免疫组织化学染色方法检测螺旋神经节GAD的表达。各组剩下的动物停止给药，继续喂养30d后检测ABR阈值和螺旋神经节GAD的表达。结果给药15d后幼年水杨酸钠给药组和成年水杨酸钠给药组豚鼠ABR阈值较给药前以及同期对照组均有提高（P值均〈0．001），停药30d后幼年水杨酸钠给药组ABR阈值恢复到给药前水平，而成年水杨酸钠给药组仍停留在高阈值水平；水杨酸钠给药15d后能明显下调幼年以及成年豚鼠螺旋神经节GAD蛋白表达，幼年豚鼠GAD表达水平低于成年豚鼠（t=4．7，P〈0．001），停药30d后幼年给药组螺旋神经节GAD表达恢复到同期对照组水平，而成年给药组则继续停留在低表达水平。结论水杨酸钠在对幼年和成年豚鼠ABR阈值以及螺旋神经节GAD表达的影响上存在差异，其对幼年豚鼠的影响更为明显，但停药后幼年豚鼠较成年豚鼠更容易恢复到正常水平。
- 尹时华唐安洲谭颂华陈平谢利红任毅
- 关键词：水杨酸钠谷氨酸脱羧酶螺旋神经节
- 水杨酸钠对豚鼠螺旋神经节NGB mRNA和蛋白表达的影响
- 2007年
- 目的:观察水杨酸钠对豚鼠螺旋神经节NGB mRNA和蛋白表达的影响。方法:48只成年健康豚鼠分4组进行,每组12只。A组:对照组;B组:水杨酸钠组Ⅰ(200mg·kg-1·d-1);C组:水杨酸钠组Ⅱ(300mg·kg-1·d-1);D组:水杨酸钠组Ⅲ(450mg.kg-1.d-1)。各组均经腹腔注射给药,给药15d后处死检测;采用RT-PCR检测实验豚鼠螺旋神经节区NGB mRNA的表达;采用免疫组织化学染色分析NGB蛋白表达。结果:①对照组豚鼠螺旋神经节区NGB mRNA表达明显高于3个水杨酸钠组(P<0.01);3个水杨酸钠组NGB mRNA表达比较以D组表达最低,B组表达最高,C组与D组比较差异显著(P<0.05)。②免疫组织化学染色检测结果显示实验各组均表达NGB蛋白。A组NGB蛋白表达明显高于其它各组;3个水杨酸钠组以B组表达最高、D组表达最低。结论:水杨酸钠可显著降低螺旋神经节神经元NGB mRNA和蛋白表达;水杨酸钠对螺旋神经节神经元NGB mRNA和蛋白表达是剂量依赖性的。
- 尹时华唐安洲幸小玲谭颂华谢利红
- 关键词：水杨酸钠螺旋神经节脑红蛋白
- 豚鼠单侧迷路破坏后前庭内侧核中组胺受体H1亚型的变化研究
- 2015年
- 目的观察左侧迷路毁损后早期不同时程豚鼠前庭内侧核(MVN)组胺受体H1亚型表达特征。方法选择健康黑色豚鼠32只,按随机数字表法分为迷路破坏组(24只)和假手术组(8只),前者全部破坏左侧迷路,假手术组操作均同迷路破坏组但保持迷路完好。单侧迷路破坏术后,迷路破坏组在不同存活时间(术后12 h,48 h,5 d)随机取8只,用免疫组织化学染色,观察前庭内侧核组胺受体H1亚型的表达,并与假手术组比较。结果豚鼠经单侧迷路破坏术后,术侧MVN区组胺受体H1亚型在术后12 h、48 h较健侧及假手术组明显增加(P<0.05),但5 d时与健侧及假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 (1)豚鼠MVN中存在组胺受体H1,且前庭代偿的早期极可能与MVN内组胺H1受体表达的变化有关。(2)在一侧迷路破坏后,前庭功能具有很大的代偿潜力。
- 舒竞铖尹时华刘渊饶秀丽
- 关键词：前庭内侧核前庭代偿
