国家高技术研究发展计划(2001AA213031)
- 作品数：4 被引量：17H指数：3
- 相关作者：连正兴王海吴常信陆泉枝潘求真更多>>
- 相关机构：中国农业大学北京锦绣大地农业股份有限公司东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 山羊Myostatin基因打靶载体的构建被引量：3
- 2006年
- 根据绵羊、猪、小鼠和牛的Myostatin基因序列,设计引物,通过PCR方法扩增了山羊的Myostatin基因的3′臂、5′臂,其长度分别为1·4kb、4·5kb。将扩增的片段与T载体连接后进行部分序列测定,与已知发表的Myostatin序列进行同源性比较,同源性为100%。对目的片段与载体进行酶切后定向连接形成转基因结构,经序列测定后,证明其插入方向和位置完全正确,构建表达Neo、Tk基因的哺乳动物双标记转基因载体,并命名为ploxp-M。
- 潘求真孙书锋陆泉枝王海连正兴杨宁李宁谭景和
- 关键词：TK基因聚合酶链式反应
- 猪Myostatin同源重组载体的构建被引量：1
- 2006年
- 根据绵羊、猪、小鼠和牛的Myostatin基因序列设计引物,通过PCR方法扩增了猪Myostatin基因的3′臂、5′臂,其长度分别为1.4 kb、4.4 kb。将扩增的片段与T载体连接后进行部分序列测定,与已发表的Myostatin序列进行同源性比较,同源性为100%;对目的片段与载体进行酶切后定向连接形成转基因结构,经序列测定后,证明其插入方向和位置完全正确,构建了猪的Myostatin表达Neor、Tk基因的双标记转基因载体。
- 潘求真陆泉枝孙书锋王海连正兴杨宁谭景和吴常信
- 关键词：TK基因聚合酶链式反应
- 山羊体细胞转基因方法的探讨被引量：6
- 2004年
- 转基因体细胞核移植是制备高效表达转基因动物的主要手段与方法,但由于插入位点、拷贝数不同常使外源基因的表达受到一定影响。本试验以双正向选择标记的pLoxP M为转基因结构,以磷酸钙法、脂质体介导法、电击转染三种方法对山羊胎儿成纤维细胞进行转染。电击(1 70×10-4)和脂质体(1 36×10-4)法明显高于磷酸氢钙法(4 6×10-5),而且三方法的转染效率与细胞类型无关,但电击转染方法简单并适合于不同大小的转基因结构,对长片段更为实用。随机整合的转基因细胞系绿色荧光蛋白的表达水平有很大差异,主要与外源基因的拷贝数和插入位点有关。双正向选择标记不但可以筛选重组体而且可以体外监控外源基因的表达情况,为高表达转基因动物的制备提供了良好的手段与方法。
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- 关键词：山羊体细胞转基因方法胎儿成纤维细胞细胞核移植
