国家自然科学基金(30670968)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
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- 肿瘤转移基因PRL-3结构、功能及相关信号通路
- 2009年
- 肝再生磷酸酶（PRL）-3是一种蛋白质酪氨酸磷酸酶（m）。近年来发现它能促进肿瘤细胞的增殖、黏附、侵袭及转移，诱导肿瘤的形成，尤其与结直肠癌的肝转移密切相关，是与肿瘤转移相关的“魅力”基因。了解PRL-3结构、功能以及其相关信号通路有助于阐明PRL-3在肿瘤转移中的调控机制。
- 陈晗谢菲丁彦青李建明
- 关键词：蛋白质酪氨酸磷酸酶信号传导肿瘤转移
- PRL-3在结直肠癌中的表达及意义被引量：3
- 2007年
- 目的检测PRL-3在大肠癌、癌旁组织及转移癌组织中的表达,初步探讨其与大肠癌发生发展、侵袭转移的关系。方法用免疫组化及荧光定量PCR方法检测大肠癌、淋巴结转移癌及相应癌旁组织中PRL-3在蛋白及转录水平的表达情况。结果PRL-3蛋白在淋巴结转移癌中的表达高于原发灶及相应正常癌旁组织中的表达(P<0.05),在大肠癌组织中PRL-3的表达与癌组织的浸润程度、淋巴结转移密切相关(P<0.05),癌组织与相应的癌旁组织相比差异则无显著性(P>0.05),其表达与癌组织分化程度差异也无显著性(P>0.05),在mRNA水平的检测也得到了与上述结果一致的结论。结论PRL-3的表达与大肠癌侵袭转移关系较密切,其表达水平在一定程度上提示大肠癌的转移潜能,PRL-3蛋白可作为大肠癌诊断、治疗及预后判断过程中的一种较有价值的病理学指标。
- 周军李建明丁彦青
- 关键词：PRL-3结直肠肿瘤免疫组织化学荧光定量PCR
- 人PRL-3基因启动子的克隆及转录因子Snail结合位点的初步鉴定被引量：3
- 2008年
- 促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)是重要的肿瘤转移相关基因,其转录调控机制一直未被阐明.应用TRED在线分析系统共获得3种可能的人PRL-3基因启动子区域.通过与人基因组序列进行比对,发现其中3号启动子序列距离人PRL-3基因距离最近,位于该基因上游约1kb的DNA区域,与5′端非翻译区域邻接.在线Consite分析系统发现,-500bp至-451bp之间存在Snail结合的核心寡核苷酸序列CACCTG.运用分子克隆的方法获得PRL-3基因启动子2段区域-699bp至299bp及-642bp至-383bp区域,后者具有Snail结合位点核心寡核苷酸序列CACCTG.构建具有荧光素酶报告基因的pGL3载体并检测其启动子活性.-699～299bp区域与-642～-383bp区域的DNA片段在SW480、SW620、CNE2、293A细胞中均具有启动子活性,其中含有Snail结合位点核心寡核苷酸序列CACCTG的短片段活性强于较完整的序列.染色质免疫沉淀结合PCR扩增技术及凝胶迁移阻滞实验确定PRL-3基因启动子区域具有Snail结合位点.研究确定,PRL-3基因的启动子位于转录起始位点上游700bp与下游300bp的DNA区域,PRL-3基因启动子存在转录因子Snail结合元件.
- 周军李建明杨发达柳玉红丁彦青
- 关键词：PRL-3启动子SNAIL转录调控
- PRL-3基因RNA干扰慢病毒载体的构建及在SW480细胞中的表达被引量：6
- 2008年
- 目的构建PRL-3基因慢病毒干扰载体及建立PRL-3基因稳定干扰的结直肠癌细胞亚系,为PRL-3基因功能研究奠定基础。方法设计PRL-3基因特异性RNAi靶序列,与pENTRTM/U6线性载体定向连接,构建pENTRTM/U6真核入门表达载体。通过与pENTRTM/U6 entry clone与pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST载体进行重组,获得pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体。利用包装细胞293FT获得重组的慢病毒,感染大肠癌细胞株SW480细胞,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰PRL-3基因的细胞亚系。结果成功构建PRL-3pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度为6×105U/L。RT-PCR、Western blotting结果表明,克隆1PRL-3 mRNA及蛋白显著降低。结论成功构建人PRL-3基因特异性的慢病毒干扰载体,获得PRL-3基因稳定干扰的大肠癌细胞亚系。
- 柳玉红李建明周军丁彦青
- 关键词：RNA干扰慢病毒PRL-3结直肠癌
- 人CDH22基因RNAi慢病毒载体的构建及稳定干扰CDH22基因的表达被引量：7
- 2008年
- 目的构建人CDH22基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默大肠癌细胞的CDH22基因表达,为研究CDH22在大肠癌转移中参与的信号转导机制提供研究基础。方法利用在线软件设计人CDH22基因shRNA序列,合成、退火形成双链寡核酸后克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,测序。得到的阳性重组子再与慢病毒载体进行重组,获得真核表达慢病毒干扰载体。在脂质体的介导下将慢病毒包装辅助质粒和CDH22基因重组慢病毒载体导入293FT细胞包装病毒,测定病毒滴度,感染大肠癌细胞SW480,杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰CDH22基因的细胞亚系。结果成功构建CDH22真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒滴度为8×105U/ml。荧光定量PCR结果表明,所获得的细胞克隆11中CDH22 mRNA水平的表达显著降低。结论成功构建出CDH22基因慢病毒RNAi表达载体,并获得CDH22基因稳定干扰的大肠癌细胞亚系,为研究CDH22在大肠癌转移中的作用机制提供了研究基础。
- 周军李建明杨发达柳玉红丁彦青
- 关键词：RNA干扰慢病毒结直肠癌
