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呼吸道合胞病毒感染大鼠肺干扰素调节因子1表达与Th1/Th2失衡的相关性研究被引量：2: 2009年; 目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染时干扰素调节因子1(IRF-1)对辅助性T淋巴细胞(Th1/Th2)类细胞因子分泌的调控作用。方法随机将16只SD大鼠分为对照组、RSV感染组(RSV滴鼻法建立RSV感染模型),每组8只。在第8周测定气道反应性;取肺组织苏木素伊红(HE)染色观察病理改变;通过免疫组织化学染色和蛋白质印迹(Western-blot)法检测IRF-1在肺组织中的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织匀浆白细胞介素4(IL-4)和干扰素Ⅱ型(IFN-γ)水平。结果RSV感染组大鼠肺部病理学切片呈现典型的过敏性炎症表现,而且RSV感染组气道阻力增高程度明显高于对照组大鼠。免疫组织化学染色RSV感染组灰度值较对照组灰度值20 838±9 931 vs 14 514±6 553,较对照组显著减低(P<0.01)。蛋白质印迹法检测肺组织中IRF-1的表达RSV感染组积分光密度值也较对照组积分光密度值0.428±0.02 vs 0.756±0.04显著减低(P<0.01)。RSV感染组IL-4蛋白水平较对照组明显增强(P<0.01),而IFN-γ蛋白水平明显减低(P<0.01)。肺IRF-1水平与IFN-γ水平呈正相关(P<0.01),与IL-4水平呈负相关(P<0.01),与IFN-/IL-4比值呈正相关(P<0.01)。结论RSV感染可以下调IRF-1在肺组织中表达,并可能与Th1/Th2的免疫失衡有关。; 吕剑潘频华胡成平易璐; 关键词：呼吸道合胞病毒白细胞介素4

呼吸道合胞病毒感染大鼠脊髓背根节信号转录因子的研究被引量：6: 2009年; 目的:研究反复呼吸道合胞病毒(RSV)感染大鼠脊髓背根节感觉神经细胞转录因子的活化状态变化。方法:1～2周龄SD大鼠幼鼠共80只,区组随机分为对照组和RSV感染组,每组40只。RSV感染组采用每周1次RSV(浓度5×105U/mL)滴鼻法制作RSV慢性感染模型,对照组采用无病毒培养上清液滴鼻。8周后每组取5只大鼠进行气道反应性测定。原位杂交检测肺组织RSVRNA以证明呼吸道合胞病毒感染模型的可靠性。用TranSignal蛋白质/DNA活性芯片筛选C7～T5脊髓背根节组织中活性改变的转录因子。Western印迹对筛选结果中改变最明显的因子进行验证。结果:RSV感染组气道阻力增幅显著大于对照组(P<0.05)。原位杂交显示RSV感染组肺组织有大量呼吸道合胞病毒存在,HE染色示肺部存在明显炎症细胞浸润,说明呼吸道合胞病毒感染模型建立成功。TranSignal蛋白/DNA组合芯片检测筛选:RSV反复感染大鼠背根节55个转录因子活性上调(RSV感染组/对照组>2),43个活性下调(RSV感染组/对照组<0.5)。Western印迹验证结果与芯片结果一致,并进一步明确蛋白/DNA组合芯片筛选的IRF转录因子是IRF-1,而不是IRF-2。结论:反复RSV感染可引起气道反应性增高和脊髓背根节感觉神经细胞内多种转录因子活性发生改变,可能与气道反应性增高的神经调控异常有关。; 谭洪毅潘频华赵然然覃庆武王慧胡成平; 关键词：呼吸道合胞病毒神经可塑性

神经生长因子通过诱导IRF-1核内转运增强PC-12细胞钠电流的表达: 2011年; 目的：初步探讨神经生长因子（nerve growth factor,NGF）和干扰素调节因子-1（interferon regula-tory factor-1,IRF-1）对类感觉神经元细胞株大鼠嗜铬细胞（rat pheochromocytoma cell,PC-12）中的Na＋电流变化的影响。方法：用不同浓度的NGF（0~200ng/mL）刺激PC-12细胞,采用Real-time PCR检测IRF-1mRNA表达变化,Western印迹检测IRF-1的活化。然后用全细胞膜片钳技术观察IRF-1干扰PC-12细胞对钠电流的影响。结果：低剂量NGF短时间刺激,就可以增加钠电流密度,同时这种钠电流的增加具有NGF浓度依赖性。此外,高剂量NGF刺激PC-12细胞后,细胞内的IRF-1mRNA的表达明显增加,而较低剂量NGF刺激细胞后可以导致IRF-1蛋白向细胞核内转运,同时并不影响其基因水平表达。此外,当IRF-1被干扰后,NGF刺激则不会再出现钠电流升高。结论：NGF可以呈剂量依赖性地增加PC-12细胞的钠电流强度,同时这种增强受到了IRF-1的调控。; 朱叶牡潘频华谭洪毅胡成平; 关键词：干扰素调节因子-1 神经生长因子 PC-12细胞

MEF2C调控大鼠脊髓背根节感觉神经元P物质和低分子量神经丝微管蛋白的表达被引量：1: 2010年; 目的:研究肌细胞增强因子2C(MEF2C)在大鼠脊髓背根神经节神经元细胞内的表达及其与P物质和低分子量神经丝微管蛋白合成的关系。方法:分离培养背根神经节神经元细胞,然后暴露于不同浓度的神经生长因子下24h,最后用实时聚合酶链反应技术检测P物质与低分子量神经丝微管蛋白基因在背根神经节神经元细胞内的表达。通过化学转染方法将合成的3条siRNA-MEF2C分别转染PC12细胞株,并用实时聚合酶链反应技术筛选干扰效率最高的siRNA。采用化学转染方法干扰背根神经节神经元细胞内MEF2C的表达,在高浓度神经生长因子刺激背根神经节神经元细胞后采用实时聚合酶链反应技术检测干扰后背根神经节神经元细胞内P物质与低分子量神经丝微管蛋白基因的表达。结果:P物质及低分子量神经丝微管蛋白基因表达随刺激用神经生长因子浓度的升高而升高。使用化学转染方法成功地干扰背根神经节神经元细胞内MEF2C的表达,MEF2C较对照组下降52%,同时没有检测到对cAMP反应元件结合蛋白表达的影响。实验组背根神经节神经元细胞内P物质在RNA水平较对照组下降了39%,而低分子量神经丝微管蛋白在RNA水平较对照组下降了62%。结论:神经生长因子促进大鼠脊髓背根节感觉神经元内P物质与低分子量神经丝微管蛋白的合成。大鼠背根神经节神经元细胞内P物质及低分子量神经丝微管蛋白基因表达受MEF2C调控。; 谭洪毅潘频华朱叶牡胡成平; 关键词：背根神经节 P物质转录因子

神经生长因子诱导PC12细胞一氧化氮合酶和P物质表达及干扰素调节因子1的作用被引量：2: 2011年; 目的:通过研究神经生长因子(NGF)诱导后的PC12细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和P物质(SP)的表达及干扰素(IFN)调节因子1(IRF-1)的调控作用,阐明呼吸道神经源性炎症的机制。方法:采用慢病毒绿色荧光蛋白GFP-IRF-1-vshRNA转染PC12细胞,然后给予NGF刺激,采用实时荧光定量PCR法检测经不同处理后各组(空白对照组、NGF刺激组、NGF+IFN-γ刺激组、阴性对照rshRNA干扰+NGF刺激组、IRF-1-rshRNA干扰+NGF刺激组)细胞内SP mRNA表达的水平;蛋白质印迹(Western blot)方法观察iNOS在不同处理组细胞中的表达情况。结果:与对照组相比,经NGF刺激后的各组细胞内SP及iNOS表达水平明显升高(P<0.05);与单纯NGF刺激组相比,NGF+IFN-γ刺激组细胞内SP及iNOS表达水平无明显变化;经慢病毒IRF-1 vshRNA阻断IRF-1表达后,细胞内SP及iNOS的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:NGF通过IRF-1调控神经元细胞内SP及iNOS的合成参与呼吸道神经源性炎症,IRF-1可能成为呼吸道神经源性炎症的治疗靶点。; 黄四云胡成平潘频华; 关键词：PC12细胞神经生长因子诱导型一氧化氮合酶 P物质

神经生长因子诱导背根节感觉神经元细胞iNOS和P物质的表达及干扰素调节因子-1的作用(英文): 2011年; 目的:研究神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对脊髓C7-T5背根节感觉神经元细胞内诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和P物质表达的影响及干扰素调节因子-1(interferonregulatory factor-1,IRF-1)的调控作用,阐明气道神经源性炎症的机制。方法:体外原代培养C7-T5脊髓背根神经节感觉神经元(DRGn)细胞,然后给予NGF或NGF+IFN-γ刺激。采用实时荧光定量PCR法检测经不同处理后细胞内P物质和iNOS的mRNA表达水平;再采用慢病毒GFP-IRF-1-shRNA转染DRGn细胞,观察阻断IRF-1表达后iNOS和P物质表达的变化。结果:与对照组相比,经NGF刺激后的各组细胞内P物质及iN-OSmRNA水平明显升高(P<0.01);与单纯NGF刺激组相比,NGF+IFN-γ刺激组细胞内P物质mRNA水平无明显变化,而iNOSmRNA水平明显升高(P<0.01);经慢病毒GFP-IRF-1-vshRNA阻断IRF-1表达后,细胞内P物质及iNOS的表达水平明显降低(P<0.01)。结论:NGF通过IRF-1调控气道感觉神经元细胞内P物质及iNOS的合成参与气道神源性炎症,IRF-1可能成为气道神经源性炎症的治疗靶点。; 潘频华黄四云胡成平; 关键词：神经源性炎症神经生长因子干扰素调节因子-1

体外获得高纯度大鼠背根神经节神经元的原代培养被引量：8: 2009年; 目的:建立一种切实可行的胚胎大鼠背根神经节神经元培养及纯化方法。方法:用显微解剖获取足够数量的胚胎大鼠背根神经节,通过胰蛋白酶+EDTA消化、交替使用NB培养基与加入了5-氟-2-脱氧尿嘧啶核苷酸/尿苷的抗有丝分裂NB培养基等方法,在体外获得纯化的背根神经节神经元,采用神经丝蛋白免疫细胞化学染色法与DAPI染核的方法鉴定并测定神经元的纯度。结果:获得的背根神经节神经元在体外生长良好,纯度可达到96%以上。结论:本实验方法可以获得大量高度纯化的大鼠背根神经节神经元。; 谭洪毅潘频华胡成平; 关键词：背根神经节神经元原代培养

RSV感染大鼠肺部MAPK信号转导通路的初步研究被引量：1: 2009年; 目的观察RSV反复感染幼龄SD大鼠肺组织炎症及气道反应性的改变,初步探讨RSV感染大鼠肺组织MAPK信号转导通路的表达变化。方法2周龄SD大鼠分实验组10只,反复RSV滴鼻;对照组10只。于第8周进行气道反应性测定,光镜下观察肺组织炎症程度,原位杂交检测肺组织中RSVRNA的表达,免疫组化及蛋白印迹检测肺组织pERK、pJNK、pP38的表达差异。结果①气道反应性:实验组与对照组大鼠气道阻力的基础值没有明显差异(P=0.085);随着吸入组氨浓度的增高,实验组大鼠气道阻力较对照组明显增高。②肺部炎症:RSV反复感染幼龄SD大鼠的肺组织出现较严重的炎症反应。③原位杂交:实验组大鼠肺组织中可见明显的RSVRNA阳性信号。④免疫组化及蛋白印迹结果显示:与对照组比较,实验组大鼠肺组织pERK表达增高,pJNK表达下降,pP38表达无明显差异。结论RSV反复感染使幼龄SD大鼠肺部出现明显炎症反应和气道高反应性;使MAPK级联反应通路中ERK通路活化水平增高、SAPK/JNK通路活化水平受抑制,而对P38通路没有明显影响。; 覃庆武潘频华赵然然王慧胡成平; 关键词：呼吸道合胞病毒气道高反应性丝裂素活化蛋白激酶

气道神经的可塑性与气道高反应性被引量：2: 2007年; 多种因素可导致气道神经发生可塑性改变，即支配气道的周围神经、中枢神经在神经递质及其受体、兴奋性和分布密度等方面的改变。气道神经的这些可塑性改变与气道高反应性有密切而复杂的联系，是引起气道高反应性的机制之一。; 覃庆武潘频华; 关键词：神经可塑性气道高反应性

呼吸道合胞病毒感染大鼠气道神经营养因子水平与气道神经可塑性研究被引量：6: 2009年; 目的探讨呼吸道合胞病毒（RSV）感染SD大鼠肺内神经营养因子水平的变化，及其与气道神经可塑性改变和气道高反应性间的关系。方法1～2周龄SD幼鼠共20只，随机分为正常对照组和RSV感染组，每组10只。RSV感染组采用每周1次RSV滴鼻法制作RSV感染模型。第8周进行气道阻力测定，留取左肺行HE染色观察肺部病理学变化，免疫组织化学染色检测气道突触囊泡素（SYN）和神经丝（NF）的表达，原位杂交法检测肺组织RSVRNA。ELISA法检测肺组织中神经营养因子[神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）、神经营养因子3（NT3）及神经营养因子4（NT4）]水平。结果RSV感染组大鼠肺组织内可见大量炎症细胞浸润，原位杂交显示肺间质细胞中有明显的RSVRNA阳性信号，表明模型建立成功。RSV感染组气道反应性显著增高，气道感觉神经元SYN及NF的表达显著增高，肺部NGF及BDNF水平较对照组明显增高（P〈0．05），而NT3及NT4水平与对照组无显著差异（P〉0．05）。NGF及BDNF浓度与气道SYN表达呈正相关（r1=0．892，r2=0．995，P〈0．05），与NF表达呈正相关（r1=0．949，r2=0．936，P〈0．05），与气道反应性也呈正相关（r1=0．929，r2=0．910，P〈0．05）。结论RSV感染后肺部NGF、BDNF水平增高，并与气道神经可塑性变化和气道高反应性密切相关。; 赵然然潘频华覃庆武王慧胡成平; 关键词：气道高反应性神经营养因子呼吸道合胞病毒

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