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鲤春病毒血症病毒核蛋白的原核表达及初步鉴定: 2012年; 为原核表达鲤春病毒血症病毒(SVCV)核(N)蛋白,本研究采用RT-PCR方法扩增SVCV N蛋白基因(SVCV-N),克隆于原核表达载体pET-28a(+)中,并转化到大肠杆菌Rosetta中进行表达。SDS-PAGE分析表明,SVCV-N基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物约47 ku,与预期相符。Western blot检测表明,该重组蛋白可以被SVCV阳性血清所识别。; 李月红付云红王永志苗富春扈荣良陈萍; 关键词：鲤春病毒血症病毒原核表达

鲤鱼春季病毒出血症病毒G基因在昆虫细胞中的表达与鉴定: 2012年; 采用RT-PCR方法扩增鲤鱼春季病毒出血症病毒(SVCV)的糖蛋白(G)基因,将PCR产物插入到杆状病毒转移载体pFastBac 1中,获得重组转移载体pFastBac 1-G,将其转化入含有Bacmid的DH10Bac感受态细胞中,经3种抗性和蓝白斑筛选,获得含有G基因的重组穿梭质粒rBacmid-G。在脂质体转染试剂的介导下,将rBacmid-G转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。提取重组杆状病毒基因组,用M13引物PCR鉴定。对重组杆状病毒感染的sf9细胞,通过电镜观察、SDS-PAGE、Western blotting进行检测,结果表明,重组蛋白在sf9细胞中获得正确表达,相对分子质量约58 000,与鼠抗SVCV阳性血清具有良好的反应原性。本试验为研究鲤鱼春季病毒出血症病毒G蛋白的生物学活性和亚单位疫苗的研制奠定了基础。; 李月红付云红陈奇王永志扈荣良; 关键词：G基因杆状病毒表达

应用脉冲场凝胶电泳技术制备鲫鱼全基因组DNA: 2014年; 为了研究用脉冲场凝胶电泳技术制备高分子质量基因组DNA时的最佳条件，试验采用鲫鱼为材料，将肌肉组织研磨过滤获得细胞悬液，包被于低熔点琼脂糖包中，用蛋白酶K消化胶块后进行脉冲电泳。结果表明：采用1％琼脂糖凝胶，电泳温度为14℃，电压为4V／cm，起始和终止脉冲时间为1-40s，脉冲角度为120°，冷凝泵流量为70L／h，电泳时间为18h，能获得1000．0kb的基因组DNA，满足基因组文库构建的需要。; 吉尚雷张雅斌卢玉婷陈崇洲李月红; 关键词：脉冲场凝胶电泳鲫鱼基因组DNA

鲤鱼春季病毒血症病毒磷蛋白基因的克隆与原核表达被引量：2: 2012年; 【目的】克隆鲤鱼春季病毒血症病毒(SVCV)的磷蛋白(P蛋白)基因,并对其进行原核表达,为进一步制备SVCV P蛋白单克隆抗体及建立新的SVCV诊断方法奠定基础。【方法】采用RT-PCR方法扩增SVCV P蛋白基因,将其克隆入pET-28a(+)载体中,获得原核重组表达质粒pET28-P,进行原核表达。将该重组原核表达质粒转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中,用0.4mmol/L IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析试剂盒对表达产物进行纯化,分别用SDS-PAGE和Western Blotting方法对表达产物进行鉴定。【结果】成功克隆了SVCV P蛋白基因,该基因长度为933bp。成功构建了原核重组表达质粒pET28-P,其诱导表达产物分子质量约为37ku;表达的重组P蛋白可被SVCV阳性血清所识别。【结论】成功克隆了SVCV P蛋白基因,获得了分子质量约为37ku的重组P蛋白。; 李月红付云红Julia Pridgeon宋琳张东鸣; 关键词：鲤春病毒血症病毒原核表达

1株传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的分离与鉴定被引量：6: 2014年; 将虹鳟鱼苗研磨过滤除菌后接种到胖头鱼肌肉细胞系(FHM)后出现了特征性病变(CPE),电镜下观察到IHNV病毒粒子。用传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)和传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)等水生动物病毒特异性引物对该毒株进行RTPCR试验,结果显示,用IHNV的引物能扩增出阳性片段。将分离株暂时命名为CJ-13。应用DNAStar和MEGA5.2软件,将CJ13的N基因与多株GenBank中已发表的IHNV毒株相应基因进行同源性比对和构建系统树。核苷酸同源性显示CJ-13株与HV7601株的N基因同源性高达97.1%,推导出的氨基酸序列同源性为95.2%。系统进化树表明,CJ-13分离株与HV7601株遗传进化关系较近,属于同一分支。; 吉尚雷李月红卢玉婷张培军; 关键词：虹鳟鱼

5种外来病病毒多重RT-PCR检测方法的建立: 2014年; 通过GenBank中对小反刍兽疫病毒N蛋白基因、亨德拉病毒及尼帕病毒H蛋白基因、西尼罗河热病毒PrM蛋白基因和非洲猪瘟病毒P72基因这5种外来病病毒的主要基因的分析比较,选择相应基因的保守序列进行人工合成,并对每段基因设计2对引物,扩增片段大小均在350-550bp之间。通过对条件的反复优化,建立了1种能够同时检测到这5种病原的并联PCR/RT-PCR方法。结果显示,该方法最低可检测到10-5 mg/L的病毒的DNA/cDNA,而且特异性强、重复性好。在45份猪样品及56份蝙蝠样品的检测中,只有阳性对照出现了目的条带,而其他均未出现目的条带。这说明本研究建立的5种主要外来病病毒并联PCR/RT-PCR的检测方法具有灵敏度高、特异性好的特点,可用于ASFV、PPRV、HeV、NiV和WNV的预防、检测及扑灭。; 苗富春付云红张守锋刘晔扈荣良李月红; 关键词：ASFV PPRV NIV WNV

细胞黏附分子1(ICAM-1)ScFv基因原核载体的构建及表达被引量：2: 2012年; 应用PCR技术扩增ICAM-1ScFv基因,经纯化测序,得到约750bp的核苷酸片段,并构建了原核重组表达质粒pET20b-ICAM-1ScFv。将重组质粒转化至表达菌BL21(DE3)中,诱导后的SDS-PAGE分析显示,pET20b-ICAM-1ScFv表达量占菌体蛋白总量的18.4%。本试验将重组蛋白的表达条件进行优化,结果表明,ICAM-1ScFv蛋白在pET20b表达载体中的最佳表达条件为37℃诱导5h。; 李月红张国力岳玉环吴广谋朱平; 关键词：ICAM-1 SCFV 原核载体

鲤鱼肝细胞的原代培养研究被引量：1: 2012年; [目的]探讨鲤鱼肝细胞原代培养的最佳条件。[方法]通过对鲤鱼的肝脏细胞进行原代培养,分析不同培养基、温度、pH、胰蛋白酶浓度、生长时间对鲤鱼肝细胞生长状况的影响,并测定肝细胞活力。[结果]鲤鱼肝细胞培养的最佳条件为:温度在25℃左右,pH7.4,胰蛋白酶浓度0.250%,消化时间40 min,培养基为M199。分离肝细胞的平均存活率>85%,每克肝平均可获得3.8×106个分离细胞,在细胞活力及数量上达到最佳平衡。[结论]该研究可为建立稳定的毒理学和药理学试验模型奠定基础。; 李月红吉尚雷吴东明谭崇桂; 关键词：鲤鱼肝细胞原代培养

抗ICAM-1单克隆抗体的生物学功能研究被引量：1: 2012年; 本研究通过体外细胞试验和体内动物试验,对已制备的抗细胞间粘附分子1(ICAM-1)单克隆抗体(MAb)4F1和2C5的生物学活性进行检测。间接免疫荧光试验表明:这两株ICAM-1 MAb可以与人血管内皮细胞ECV304细胞中的ICAM-1结合。以乳酸脱氢酶释放法检测ICAM-1 MAb抑制单核细胞与血管内皮细胞的黏附作用。4F1和2C5 MAb分别可以使细胞黏附降低34.4%和26.9%。二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验和毛细血管通透性试验表明:ICAM-1 MAb能够抑制小鼠耳廓肿胀度,使伊文思蓝渗出量降低。本研究证明所制备的MAb均具有阻断ICAM-1及抑制炎症反应的功能,其中4F1生物学活性高于2C5。; 李月红孟锐奇朱平陈萍赵福广张培军; 关键词：ICAM-1 单克隆抗体生物活性

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吉林省科技发展计划基金(20100232)