河北省自然科学基金(300162)
- 作品数：17 被引量：132H指数：7
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- 相关机构：河北师范大学石家庄学院河北科技大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 培养基成分对南方红豆杉细胞生长的影响被引量：5
- 2001年
- 张秀清庄晓蕾王刚
- 关键词：南方红豆杉培养基成分细胞生长
- 继代时间对南方红豆杉细胞生长和产生紫杉醇的影响被引量：4
- 2002年
- 通过激素组合正交实验及继代时间的选择对南方红豆杉细胞增殖培养条件进行了优化研究 .结果表明在细胞生长对数期继代比静止期继代细胞增长率提高 1 .6倍 ,而紫杉醇产量差异不大 .同时在对 75个激素处理的筛选实验中证实 NAA与 6 -BA的组合优于 2 ,4 -D与 6 -BA的组合 ,其中 NAA1 mg/L+ 6 -BA1 mg/L的处理可获得最大增长率 .
- 仇燕贾宁王丽王刚
- 关键词：南方红豆杉细胞生长紫杉醇细胞培养生物量积累激素诱导
- 紫杉醇合成代谢途径中苯丙基转移酶cDNA的克隆被引量：5
- 2004年
- 从南方红豆杉 (Taxuschinensisvar.mairei)愈伤组织中直接提取出总RNA .采用RT -PCR技术获得苯丙基转移酶基因cDNA片段 ,将该片段克隆在载体pGEM -TEasyVector上并转化到大肠杆菌DH5α中 ,经SpeⅠ /XhoⅠ双酶切检测及cDNA全长序列分析 ,证实该片段确为苯丙基转移酶基因 ,与已报道的从东北红豆杉 (Taxuscuspidata)中得到的苯丙基转移酶基因序列具很高的同源性 .图 5参
- 仇燕王刚
- 关键词：CDNA克隆合成代谢
- 紫杉醇合成途径中紫杉烯合成酶cDNA的克隆被引量：8
- 2006年
- 【目的】研究紫杉烯合成酶超表达对紫杉醇代谢的影响,以提高红豆杉属植物细胞中紫杉醇的含量。【方法】从南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)愈伤组织提取总RNA,根据已发表的中国红豆杉紫杉烯合成酶cDNA序列设计两对引物,通过RT-PCR技术扩增出该酶5′端长度为1 201 bp和3′端长度为1 388 bp的两个cDNA片段,将其克隆到pGEM-T Vector上并转化到E.coli DH5α中,5′端片段经XbaⅠ和BglⅡ双酶切鉴定,3′端片段经BglⅡ和SacⅠ双酶切鉴定后,对阳性克隆进行序列测定。两片段与双元载体pCAMBIA1300-35S::GUS以T4 DNA连接酶连接并转化到E.coli DH5α中,经XbaⅠ和SacⅠ双酶切鉴定。【结果】测序结果证实确为紫杉烯合成酶基因,酶切结果证实紫杉烯合成酶cDNA全长连接成功并插入到pCAMBIA130035S::GUS中。【结论】两cDNA片段拼接得到全长2 589 bp的紫杉烯合成酶基因,编码862个氨基酸,与中国红豆杉紫杉烯合成酶基因具有98%的同源性;成功构建了pCAMBIA130035S-TS载体,为下一步的转基因工作做好了准备。
- 肖颖赵冬王刚
- 关键词：南方红豆杉紫杉醇CDNA克隆
- 南方红豆杉愈伤组织诱导的研究被引量：14
- 2005年
- 以南方红豆杉的嫩茎和针叶为外植体诱导愈伤组织,比较了不同种类基本培养基及不同激素水平诱导愈伤组织的能力。结果表明,嫩茎作为外植体较针叶有利于南方红豆杉愈伤组织诱导;B5培养基较MS培养基有利于愈伤组织诱导。嫩茎诱导愈伤组织的最适培养基为B5+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L。
- 赵冬肖颖刘占荣王刚
- 关键词：南方红豆杉愈伤组织诱导外植体
- 诱导子在红豆杉细胞培养生产紫杉醇中的应用研究进展被引量：31
- 2003年
- 诱导子作为一种调控植物次生代谢产物生物合成的重要手段 ,用于红豆杉 (Taxus)细胞培养生产紫杉醇的研究效果显著。
- 仇燕贾宁王丽王刚
- 关键词：诱导子红豆杉紫杉醇植物次生代谢产物抗癌药物
- 对数期继代对南方红豆杉细胞培养动力学的影响被引量：6
- 2003年
- 目的 解决南方红豆杉细胞生长缓慢及代谢水平低下的问题。方法 对对数期 (2 0 d)和静止期 (3 0 d)的红豆杉细胞分别进行继代 ,在整个生长周期中测定了培养基中的碳源、氮源、磷酸盐的变化并分析了红豆杉细胞生长及紫杉醇的合成情况。结果 对数期继代细胞吸收碳源和硝态氮早于静止期继代的细胞 ,且前者的比生长速度是后者的 1.5倍 ,紫杉醇含量提高了近 4倍。
- 仇燕王丽刘子会王刚
- 关键词：对数期紫杉醇动力学
- TLC-紫外分光光度法定量检测紫杉醇被引量：18
- 2001年
- 采用ＴＬＣ法进行了红豆杉培养细胞中紫杉醇的分离、纯化。展层剂为甲醇－氯仿（１：１２）时，分离出与紫杉醇标准品Ｒｆ值相同的色斑。同时，结合紫外分光光度法进行紫杉醇的定量检测，其平均回收率为ＨＰＬＣ法的 ９１.８Ｚ％。
- 庄晓蕾于树宏王人为王刚
- 关键词：紫杉醇TLC紫外吸收
- 紫杉醇生物合成相关酶类的研究进展被引量：10
- 2002年
- 紫杉醇是红豆杉属植物次生代谢产物之一 ,是近 2 0年来抗癌药物研究领域的重要发现。弄清楚紫杉醇合成途径和相关酶的反应可以从根本上大大提高紫杉醇的产量。综述近几年来紫杉醇生物合成途径中相关酶的研究工作 ,包括已经得到相应cDNA克隆的紫杉二烯合成酶 ,细胞色素P4 50 氧化酶和 3个紫杉烷的乙酰转移酶 ,由于GGPP是紫杉醇合成的必需前体 ,HMGR和GGPP合成酶的相关情况也有简述。
- 贾宁仇燕王刚
- 关键词：紫杉醇生物合成
- 南方红豆杉的苯丙基转移酶异源表达和抗体制备被引量：1
- 2005年
- 构建了紫杉醇生物合成途径中连接紫杉醇主链bacⅢ与侧链C-13O的苯丙基转移酶原核表达载体,并在大肠杆菌中表达了这种蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰兔,获得了高效价(1∶102400)抗体。免疫印迹检测表明,制备的抗体具有较高的特异性。
- 仇燕曹红王刚
- 关键词：南方红豆杉抗体制备异源表达新西兰兔抗原免疫BAC
