国家自然科学基金(39970363)
- 作品数：33 被引量：124H指数：7
- 相关作者：窦忠英华进联李松安立龙效梅更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学广东海洋大学泰山医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- EGF对原始生殖细胞来源小鼠胚胎干细胞分离克隆的影响被引量：1
- 2007年
- 目的观察表皮生长因子对原始生殖细胞来源的小鼠胚胎干细胞分离克隆的影响。方法以小鼠胎儿成纤维细胞为饲养层,从原始生殖细胞中分离克隆小鼠胚胎干细胞的过程中,在基础细胞培养液中加入不同浓度的表皮生长因子,观察小鼠胚胎干细胞集落形成数和各组的最高传代数。结果表皮生长因子添加与否对原始生殖细胞来源的小鼠胚胎干细胞原代培养无显著的影响,而对后继培养有显著影响。结论在原始生殖细胞来源的小鼠胚胎干细胞分离的过程中,可以不添加表皮生长因子,而在胚胎干细胞的后续传代中,尤其对于较高代细胞的克隆过程中添加表皮生长因子有利于细胞的生长。
- 李松窦忠英于爱莲华进联
- 关键词：表皮生长因子小鼠胚胎干细胞分离克隆
- 自原始生殖细胞分离克隆小鼠ES细胞研究初报被引量：12
- 2001年
- 自交配后 9.5～ 13.5 d小鼠胎儿生殖嵴 /腺或其类似物及周围组织 ,采用与其同源胎儿成纤维细胞共培养的方式分离克隆到具小鼠 ES细胞诸多特征的胚胎生殖细胞 ( EG细胞 )系。即具有连续传代的能力 ( 1例来自交配后 11.5 d胎儿类 ES细胞传至 10代 ) ,部分细胞集落呈典型鸟巢状结构 ,AP染色呈阳性 ,体外分化或延迟传代、堆叠培养具有分化形成类胚体、上皮细胞、成纤维细胞或神经细胞等的能力。同样培养交配后 7.5～ 8.5 d和14.5～ 15 .5 d的小鼠胎儿 ,原代观察到类 ES细胞集落 ,继代培养未观察到类 ES细胞集落 ,16 .5～ 18.5 d小鼠胎儿原代培养未观察到
- 华进联窦忠英李松雷安民杨春荣
- 关键词：原始生殖细胞胚胎生殖细胞ES细胞哺乳动物
- 胚胎干细胞体外定向诱导分化研究进展被引量：8
- 2003年
- 胚胎干细胞是由早期内细胞团分离的一种多潜能细胞 ,在体外分化抑制培养时 ,可保持未分化状态而无限增殖。一旦撤除分化抑制因素 ,或添加适当的诱导剂 ,ES细胞可分化为内胚层、中胚层和外胚层的多种类型的特化细胞。文章综述了体外定向诱导 ES细胞分化为造血细胞、心肌细胞、神经细胞、脂肪细胞、胰岛细胞、内皮细胞、上皮细胞、成骨细胞、软骨细胞和黑素细胞等的途径和方法。
- 宋晓平窦忠英
- 关键词：胚胎干细胞体外分化诱导剂
- 诱导胰腺干细胞再生胰岛治疗糖尿病的研究被引量：3
- 2007年
- 近年来,随着免疫抑制剂的改进及细胞移植技术的不断成熟,胰岛细胞移植已成为治愈Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病的有效治疗方法,而胰岛供体短缺的矛盾亦更为突出．胰腺干细胞是一类存在于胎儿或成年胰腺组织中的成体干细胞．体外分离、克隆胰腺干细胞,并定向诱导其分化为功能性胰岛移植治疗糖尿病,是解决胰岛供体短缺的有效途径．目前,该研究已成为组织细胞工程研究的又一热点．文中综述了这一领域研究的最新进展．
- 效梅安立龙窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞诱导分化胰岛移植
- 人胚胎干细胞饲养层培养体系的建立被引量：2
- 2005年
- 目的建立人胚胎干细胞饲养层培养体系。方法以胎鼠和人胎儿为材料,以DMEM加15%FBS加0.1mM2ME为基础培养液,分别制备胎鼠和胎儿成纤维细胞饲养层。结果分别获得了传16代的胎鼠成纤维细胞和传7代的人胎儿成纤维细胞,建立了人胚胎干细胞饲养层的培养体系。结论胎鼠成纤维细胞和人胎儿成纤维细胞相比较,后者生长速度慢,且较易老化;胎鼠成纤维细胞饲养层更有利于人胚胎干细胞的生长;8～14d龄胎鼠最适宜制备人胚胎干细胞饲养层;在室温条件下,以0.2%胰酶加0.04%EDTA为消化液处理原代胎鼠组织块时间以15～20min为宜。
- 苗增民李松窦忠英
- 关键词：人胚胎干细胞饲养层成纤维细胞
- 人胰腺干细胞建系及移植诱导胰岛治疗大鼠糖尿病被引量：7
- 2008年
- 供体不足已成为移植胰岛治疗Ⅰ型和部分Ⅱ型糖尿病的主要障碍,分离克隆胰腺干细胞作为种子细胞并诱导其分化为功能性胰岛可提供丰富的移植资源.本研究从人流产胎儿胰腺组织分离获得1例单克隆胰腺干细胞系.无菌取流产胎儿胰腺组织,0.1%Ⅳ型胶原酶消化分离为单个细胞和细胞团.低糖DMEM+10%FBS培养,单个细胞和细胞团贴壁,原代上皮样胰腺干细胞克隆性生长.0.25%胰蛋白酶+0.04%已二胺四乙酸(EDTA)消化传代,成纤维样细胞和其他细胞逐渐被消除,上皮样胰腺干细胞逐渐被纯化.克隆环筛选,获得单克隆人胰腺干细胞.在培养液中添加10ng/mL表皮生长因子(EGF),单克隆人胰腺干细胞快速生长至单层,呈铺路石样.继续传代培养,1例来源于4月龄男性流产胎儿胰腺干细胞已传50代.液氮冷冻保存细胞1×109个以上.染色体核型分析,该干细胞系为正常的二倍体细胞.免疫组织化学反应,共表达pdx1,glucagon,nestin及CK19蛋白,不表达insulin,CD34,CD44及CD45.RT-PCR检测,转录pdx1,glucagon,nestin及CK19的mRNA,不转录insulin.β-巯基乙醇诱导,分化为神经细胞,免疫组织化学反应表达NF蛋白.烟酰胺诱导,分化为DTZ染色阳性,转录表达insulin,分泌insulin和C肽的功能性类胰岛.将单克隆人胰腺干细胞体外诱导胰岛移植在STZ制备的糖尿病大鼠肾囊内,能降低糖尿病大鼠血糖水平,延长寿命.
- 效梅安立龙杨学义葛昕乔海赵婷马霄飞樊敬庄朱梦漾窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞单克隆分化
- 体外快速构建角膜内皮的初步研究
- 2009年
- 用培养的角膜内皮细胞在羊膜和去除Descemet膜的角膜基质体外快速构建角膜内皮组织。分离家兔角膜内皮细胞并传代,将2~4代的角膜内皮细胞以1×105~5×105/mL的浓度接种到去上皮的人羊膜和去除Descemet膜的兔角膜基质上,体外快速构建角膜内皮层。角膜内皮细胞在羊膜和去除Descemet膜的角膜基质上培养48 h,细胞就可形成与在体角膜内皮类似的单层角膜内皮组织,并发现角膜基质透明度随着内皮细胞的增殖而逐渐增加的过程。以1×105~5×105/mL的浓度接种到去上皮的人羊膜和去除Descemet膜的兔角膜基质上,48 h可构建与在体角膜内皮类似的单层内皮组织。
- 屈雷敬晓棋杨学义闫海龙窦忠英
- 关键词：角膜内皮细胞体外构建
- 单克隆人胰腺干细胞的形态和蛋白表达特征被引量：3
- 2009年
- 目的研究1例单克隆人胰腺干细胞系的细胞形态和表达特性。方法10例4～5月龄流产胎儿胰腺组织,胶原酶消化。原代细胞DMEM培养,胰蛋白酶消化传代。在传代中逐渐纯化胰腺干细胞。克隆环筛选单克隆人胰腺干细胞,扩增培养。活力较好的细胞液氮冷冻保存。采用HE和Giemsa染色,观察单克隆人胰腺干细胞的形态特征;通过透射电镜分析其超微结构。用免疫组织化学反应和RT-PCR方法,检测其蛋白水平和mRNA水平的表达特征。结果1例来源于4月龄男性胎儿的单克隆人胰腺干细胞建系,传50代。液氮保存细胞1×109个以上。单克隆人胰腺干细胞完全贴璧时呈多角形上皮样,单核,圆形或椭圆形,单、双或多核仁。细胞核质比大,线粒体、内质网等细胞器均不发达,胞质内无分泌颗粒,属于发育早期的胰腺上皮样细胞。共表达胰肠同源域因子1（pdx1）、胰高血糖素、巢蛋白及角蛋白19（CK19）,不表达胰岛素、周期蛋白34（CD34）、CD44及CD45。转录表达pdx1、胰高血糖素及巢蛋白的mRNA,不转录表达胰岛素。结论首次证实1例共表达pdx1、胰高血糖素、巢蛋白及CK19蛋白的单克隆人胰腺干细胞系。
- 效梅安立龙窦忠英
- 关键词：胰腺干细胞单克隆免疫组织化学反转录-聚合酶链式反应
- 异种动物细胞核移植研究现状及相关问题的探讨被引量：5
- 2003年
- 随着体细胞核移植相继在多种动物中取得成功 ,异种细胞核移植技术在拯救濒危野生动物、人类干细胞克隆和细胞核质互作研究等方面具有特殊意义 ,受到广泛重视并取得了很大进展。文章对异种细胞核移植技术研究现状进行了综述 ,并对其应用前景和存在的问题进行了探讨。
- 冯秀亮雷安民杨春荣窦忠英
- 关键词：细胞核濒危野生动物细胞克隆
- 小鼠胚胎干细胞密度梯度离心去核法被引量：2
- 2003年
- 在细胞松弛素B的参与下,通过Ficoll密度梯度离心法可有效制备小鼠无核ES细胞,在适宜条件下,悬液培养中40%的小鼠ES细胞可发生去核作用,经Hoechst染色和形态观察确定:80%的去核ES细胞在30min内可恢复其原有形态,但其生活力不会超过48h,这为研究ES细胞的胞质功能及核质互作效应提供了一种可行的细胞去核方法。
- 李相运窦忠英李松华进联
- 关键词：小鼠胚胎干细胞密度梯度离心
