德国洪堡基金(V-815102085)
- 作品数：13 被引量：37H指数：4
- 相关作者：王雨生马吉献韩泉洪惠延年陈晓农更多>>
- 相关机构：第四军医大学西京医院北京化工大学第四军医大学唐都医院更多>>
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- 兔玻璃体内注射聚N-异丙基丙烯酰胺-聚氧化乙烯纳米粒的眼内毒理学效应被引量：4
- 2008年
- 目的：评估玻璃体腔内注射新型缓释给药载体聚N-异丙基丙烯酰胺-聚氧化乙烯（PNIPAAm-PEO）纳米粒的眼内毒理学效应。方法：玻璃体腔注射不同浓度（1mg／0．1mL，2mg／0．1mL，3mg／0．1mL．4mg／0．1mL）的PNIPAAm-PEO纳米稀释液后于不同时间点行裂隙灯、检眼镜、视网膜电图以及组织病理学检测。对照组注射0．1mL无菌生理盐水。将所用不同浓度稀释液局部点眼，观察局部组织的刺激反应。结果：兔眼角结膜对检测浓度范围内的PNIPAAm-PEO有良好耐受性，眼部无刺激症状。玻璃体腔内注射1mg和2mg组未见明显视网膜毒性反应。3mg组眼底检查无异常，ERG-b波1～3d下降幅度〉30％，第7～14d略有恢复；第14d光镜下视网膜部分感光细胞外节间隙增宽，外丛状层以内结构空泡变性，细胞排列正常；电镜下各层均有较明显的结构改变，广泛的细胞水肿和空泡变性，细胞间隙增宽，感光细胞膜盘结构基本正常。4mg组ERG-b波波幅下降〉30％；第1～14d组织病理学观察均有明显视网膜结构破坏，广泛空泡变性，部分感光细胞的盘膜崩解，层状结构紊乱、模糊不清。结论：PNIPAAm-PEO纳米粒的眼部耐受性良好，具有用作眼部给药载体的潜力，但大剂量使用时应注意眼部安全性问题。
- 王丽曌王雨生陈晓农崔志利杜红俊马吉献傅亦恬
- 关键词：纳米微粒毒理效应玻璃体腔注射
- 电场对人视网膜色素上皮细胞生物学活性的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:观察电场作用对培养人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelial,hRPE)细胞活力及分裂过程的影响。方法:hRPE细胞置于强度为8V/cm的直流电场中暴露3h,停止电场作用后继续培养12h;未受电场作用的hRPE细胞作为对照组。显微摄像系统记录各时间点细胞图像,观察细胞形态变化;细胞行台盼蓝拒染活细胞计数及核仁嗜银蛋白(AgNORs)染色,图像分析染色结果;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:暴露于电场中的hRPE细胞伸长,垂直于场线方向排列,停止暴露后细胞恢复正常形态及分布;各时间点实验组与对照组细胞的台盼蓝拒染率差异无统计学意义(P>0.05);电场暴露前、暴露3h及停止暴露并继续培养12h后hRPE细胞核内AgNORs颗粒数分别为:6.2,6.5,7.3,与正常对照组细胞比较均无显著差异(P>0.05);流式细胞仪检测结果显示各组均未见明显细胞凋亡。结论:短时间电场作用对hRPE细胞的正常细胞活力及分裂无明显影响,提示该条件下的电场作用可能应用于促进RPE细胞修复的研究。
- 韩静闫小龙惠延年韩泉洪马吉献李越
- 关键词：电场人视网膜色素上皮细胞细胞活力细胞分裂
- MEK/ERK和PI3K/Akt通路对大鼠脉络膜新生血管中DDR2和MMP-13表达的调控作用被引量：5
- 2015年
- 背景 研究表明盘状结构域受体2（DDR2）和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）在肿瘤新生血管发生中具有重要作用,是相关疾病治疗的关键靶点,但DDR2和MMP-13在脉络膜新生血管（CNV）发生中的作用尚不清楚.目的 探讨DDR2和MMP-13在大鼠CNV中的表达特点以及MEK/ERK和PI3 K/Akt通路对DDR2及MMP-13表达的调控作用.方法 采用532 nm倍频激光视网膜光凝法制备棕色挪威（BN）大鼠CNV模型,将78只BN模型鼠按照随机数字表法分为正常对照组（n=7）、模型对照组（n=39）、PD98059（MEK1抑制剂）组（n=16）和LY294002（PI3K抑制剂）组（n=16）,PD98059组和LY294002组大鼠分别于光凝后1d、7d玻璃体内注射5 mmol/L PD98059 3μl或5 mmol/L LY294002 3μl.分别于光凝前和光凝后1、3、7、14 d用过量麻醉法处死动物并制备样本和切片,采用Western blot法检测各组大鼠眼杯中ERK、p-ERK、Akt和p-Akt蛋白的表达变化,采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测各组大鼠眼杯中DDR2 mRNA和MMP-13 mRNA的表达变化,采用组织病理学方法测定各组大鼠CNV厚度,采用免疫组织化学和免疫荧光染色法分别定位和测定大鼠CNV区域DDR2和MMP-13的表达.结果 光凝后3d,光凝局部细胞增生,光凝后7 d CNV形成,至光凝后14 d CNV趋于稳定.免疫组织化学染色结果显示,DDR2在正常大鼠视网膜血管内皮细胞层、视网膜神经节细胞（RGCs）层和内核层细胞中呈弱表达,但在CNV中呈强阳性表达;MMP-13在正常对照组大鼠视网膜内界膜层、光感受器层和巩膜层均呈强阳性表达,在模型对照组中呈强阳性表达.免疫荧光结果显示,CNV组织中DDR2和MMP-13共表达.RT-PCR结果显示,模型对照组光凝后1、3、7、14 d DDR2 mRNA相对表达水平分别为55.22±4.03、47.74±2.23、14.82±4.56和5.59±2.47,MMP-13 mRNA相对表达水平分别为25.54±3.83、43.51±4.36、10.90±4.00和5.23±3.23,与正常对照组相比,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.免疫�
- 杨秀梅王雨生张建李燕药立波
- 关键词：盘状结构域受体2基质金属蛋白酶-13BN大鼠
- 基质金属蛋白酶在体外视网膜色素上皮细胞损伤模型中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:建立体外RPE细胞损伤模型,观察损伤诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞移行以及MMP-2和MMP-9的表达。方法:在近铺满期视网膜色素上皮(retinal pigment epitheli-um,RPE)细胞培养板上,采用角膜移植用的环钻和棉签法做圆形细胞刮伤区,SABC免疫组织化学方法检测RPE细胞受创后48hMMP-2和MMP-9的表达;并应用此损伤模型,计数进入缺损区的细胞数,观察地塞米松(Dex)对RPE细胞移行和对MMP-2及MMP-9表达的影响。结果:RPE细胞受创后损伤边缘的RPE细胞逐渐向缺损区移行;免疫组化结果显示,损伤后48h损伤边缘移行的RPE细胞呈MMP-2的阳性表达,MMP-9呈强阳性表达。Dex处理组中损伤诱导的RPE细胞移行明显减少,MMP-2和MMP-9的表达也明显减弱。结论:MMPs在RPE细胞移行修复中有重要意义,Dex可以通过抑制MMP-2和MMP-9的表达而减少RPE细胞移行。
- 郭长梅王雨生惠延年韩泉洪王静波马吉献
- 关键词：基质金属蛋白酶视网膜色素上皮细胞细胞移行免疫组化
- 脂多糖诱导炎症对大鼠氧诱导视网膜病变的影响被引量：3
- 2015年
- 目的观察不同剂量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导炎症对大鼠氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)的影响,以探讨炎症在早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity,ROP)中的作用。方法将新生SD大鼠随机分组,实验组依据LPS注射剂量的不同分为LPS-50、LPS-100和LPS-500组,并分别设立正常对照组(N组)和氧诱导对照组(OIR组)。N组幼鼠喂养于空气中,实验组和OIR组幼鼠饲养于氧气体积分数为80%/21%(24 h交替一次)的氧箱中至出生后14 d(P14),随后移至空气中继续饲养。实验组幼鼠行OIR处理过程中,于P7行LPS腹腔注射,LPS-50、LPS-100和LPS-500组注射剂量分别为50μg·kg-1、100μg·kg-1和500μg·kg-1。检测各组幼鼠在P7(注射前)、P8、P11和P14等不同时间点的体质量变化;并分别于P14和P18制作全视网膜铺片,通过GS-isolectin B4染色观察各组视网膜血管化及病理性新生血管情况。结果在各检测时间点,各实验组和OIR组幼鼠的体质量均低于N组(P<0.05)。P7时,各实验组和OIR组体质量无差别(P>0.05);至P8、P11和P14时,LPS-500组幼鼠体质量明显低于OIR组和其他实验组(P<0.05)。P14时,N组幼鼠的浅层视网膜血管已覆盖整个视网膜;而OIR组和实验组幼鼠的视网膜均存在无血管区,且LPS-500组无血管区面积最大(27.32%±3.58%,P<0.01)。P18时,N组视网膜血管网层次结构清晰;OIR组和实验组幼鼠的视网膜均出现病理性新生血管,且LPS-500组新生血管累及视网膜的范围最广(累及钟点数为6.83±1.72,P<0.01)。结论 LPS诱导炎症可加重大鼠OIR,且在一定范围内呈剂量依赖性,提示炎症可能参与ROP病理过程。
- 李晓琴张自峰王雨生高翔杨湘敏徐文芹
- 关键词：炎症氧诱导视网膜病变视网膜新生血管早产儿视网膜病变
- 环氧化酶-2和血管内皮生长因子在激光诱导的大鼠脉络膜新生血管中表达的相关性被引量：9
- 2009年
- 目的探讨脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)生成过程中环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及其意义。方法532nm激光诱导棕色挪威(Brown-Norway,BN)大鼠实验性CNV。光凝后7d,采用免疫组织化学法检测COX-2和VEGF在CNV中的表达。采用Western blotting和RT-PCR方法检测光凝后1d、3d、7d和14d CNV中COX-2和VEGF蛋白与mRNA表达的变化。结果CNV区域的血管内皮细胞和基质细胞均有COX-2和VEGF蛋白的表达,主要表达于胞浆中。COX-2蛋白及其mRNA的表达在光凝后3d时达高峰,VEGF蛋白及其mRNA的表达在光凝后7d时达高峰。COX-2蛋白及其mRNA的表达早于VEGF蛋白及其mRNA的表达。结论COX-2在CNV生成早期表达上调,且其表达先于VEGF的表达,提示COX-2可能通过调控VEGF的表达在CNV生成过程中发挥重要作用。
- 蔡岩王雨生徐建锋杨秀梅石圆圆张朝霞
- 关键词：脉络膜新生血管环氧化酶-2血管内皮生长因子
- 玻璃体内注射包载盐酸去甲万古霉素的聚N-异丙基丙烯酰胺-聚氧化乙烯纳米粒治疗兔眼混合细菌性眼内炎的效果被引量：3
- 2009年
- 目的探讨玻璃体腔内注射包载盐酸去甲万古霉素(norvancomycin,NV)的聚N-异丙基丙烯酰胺-聚氧化乙烯[poly(N-isopropyl acrylamide)-polyethylene oxide,PNIPAAm-PEO]纳米缓释给药系统(NV-PNIPAAm-PEO)治疗兔混合细菌性眼内炎模型的效果。方法选取健康成年新西兰兔50只,每只随机选取1眼向玻璃体腔内注入100×103CFU.L-1的金黄色葡萄球菌和大肠埃希杆菌混合悬液建立眼内炎模型。建模成功后24h,将实验动物随机分为1个空白对照组(A组)和4个实验组(B组、C组、D组和E组),每组10眼。A组不作任何处理;B组、C组、D组和E组分别向玻璃体腔内注入0.1mL的空白纳米粒(20g.L-1)、无菌生理盐水、盐酸去甲万古霉素原药(4.4g.L-1)和NV-PNIPAAm-PEO(20g.L-1)。于给药后第1、2、3、7、14、21、28、42天分别进行临床炎症评分、眼部A/B超检查及组织病理学检查。结果A组、B组和C组各时间点眼内炎病变程度无明显差异;D组和E组炎性反应较A组、B组和C组轻(P<0.005);E组与D组在术后21d内无差异,21d后E组玻璃体腔混浊程度较D组明显减轻(P<0.005)。眼部A/B超检查,术后7d之后A组、B组和C组可见玻璃体内团块状回声伴点状或短线状回声点;D组在42d后仍可见玻璃体腔轻度混浊;E组注药后7-14d可见玻璃体内点线状回声,回声强度较同时期A组、B组和C组弱,21d后未见明显异常回声。组织病理学检查见A组、B组和C组眼球结构被破坏,D组近后极部视盘前方玻璃体腔内少量淋巴细胞及浆细胞浸润,E组眼球结构正常,未见典型炎性细胞。结论NV-PNIPAAm-PEO纳米粒玻璃体腔注射治疗细菌性眼内炎疗效确切,与单纯盐酸去甲万古霉素眼内注射相比,具有缓释及药效持久等特性。
- 陈翔王雨生王丽曌陈晓农徐修礼马吉献
- 关键词：细菌性眼内炎眼感染去甲万古霉素纳米粒缓释给药系统
- 稳定表达NDRG2的培养人晶状体上皮细胞株的建立及其对细胞增殖能力的影响
- 2013年
- 目的分别建立人N-Myc下游受调节基因2(N-Myc downstream regulated gene2,NDRG2)表达上调、下调的培养人晶状体上皮细胞稳定转染细胞株,并观察NDRG2对晶状体上皮细胞增殖能力的影响。方法分别用质粒PLenti6-NDRG2、PLenti6-cherry、PLKO-NDRG2shRNA、PLKO-scramble以及PAX2和PMD2G构建慢病毒载体,感染培养人晶状体上皮细胞系(SRA01/04),通过药物筛选获得NDRG2表达上调、下调的晶状体上皮细胞株。采用Real-time PCR、Western blot等方法检测NDRG2的表达。通过MTT、EdU等方法检测所获得细胞株的生长曲线及增殖能力。结果 NDRG2 mRNA在过表达对照组和过表达组细胞中的相对表达量分别为1.04±0.38、6.57±0.97,两组间差异有统计学意义(P<0.05);NDRG2mRNA在干涉对照组和干涉组细胞中的表达量分别为1.05±0.31、0.49±0.14,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。NDRG2过表达和干涉慢病毒载体感染后,SRA01/04细胞中NDRG2 mRNA的表达分别出现了明显的上调和下调。Western blot检测结果显示:与各自对照组相比,在NDRG2过表达组和干涉组细胞中,NDRG2蛋白的表达量分别出现了明显的升高和降低。MTT检测结果显示:与其对照组相比,NDRG2过表达组细胞生长曲线表现出降低趋势,干涉组细胞生长曲线表现出升高趋势,在培养后5d检测时差异有统计学意义(P<0.05)。EdU检测结果显示:过表达对照组Cherry-SRA01/04细胞、过表达组NDRG2-SRA01/04细胞EdU阳性表达率分别为(41.57±2.53)%、(33.53±3.03)%,两组间差异有统计学意义(P<0.05),提示NDRG2表达上调后DNA的合成受到抑制。干涉对照组Scramble-SRA01/04细胞和干涉组shNDRG2-SRA01/04细胞EdU阳性表达率分别为(27.70±1.05)%、(46.43±4.01)%,差异有统计学意义(P<0.05),提示NDRG2表达下调后DNA合成速度加快。结论通过病毒载体感染联合药物筛选,分别建立了NDRG2表达上调和下调的培养人晶状体上皮细胞稳定转染细胞株,且NDRG2基因对晶�
- 张丽霞王雨生安洁张健张自峰
- 关键词：NDRG2晶状体上皮细胞细胞增殖能力
- “二步法”激光诱导脉络膜视网膜静脉吻合术治疗兔视网膜中央静脉阻塞的视觉电生理变化被引量：12
- 2006年
- 目的 评价“二步法”激光诱导脉络膜视网膜静脉吻合术（laser-induced chorioretinalvenousanastomosis，LCRVA）治疗实验性视网膜中央静脉阻塞（centralretinalveinocclusion，CRVO）的有效性。方法 青紫蓝兔30只，8只（16眼）设为正常对照组，其余22只（44眼）采用光动力学方法建立双眼的CRVO模型。CRVO模型成功后，对双眼CRVO兔（15只），随机选1眼先后用倍频Nd：YAG激光器和Nd：YAG激光器分剐在选定部位击破Bruch膜及相邻的静脉壁，以建立视网膜静脉与脉络膜血管之间的吻合通道；对侧眼作为CRVO对照眼；4只单眼CRVO兔中，2只为LCRVA治疗组，另2只为CRVO对照组。于术前1d，术后4h、1d、3d、1周、2周、3周、4周、8周、12周和16周各时间点，分别进行ERG检测。结果 34眼（77．3％，15只兔双眼，4只兔单眼）一次性建立了CRVO模型。对其中的17眼行LCRVA，每眼击射2个点。经眼底荧光素血管造影检查证实，在8眼（47．0％）中的11个点（32．4％）存在功能性吻合。CRVO对照组较正常对照组在各时间点主要表现为ERGb波潜伏期延长，振幅下降。经LCRVA治疗后2～3周，b波振幅呈恢复趋势，与CRVO对照组有显著性差异（P〈0．05）。OPs波振幅与ERGb波呈现相似变化。ERGa波变化不明显。结论 兔CRVO眼的视网膜功能明显受损，LCRVA可一定程度减轻CRV0对视功能的损害。
- 陈立军王雨生王海燕张鹏王伟马吉献
- 关键词：脉络膜视网膜静脉吻合术视网膜中央静脉阻塞视网膜电图
- 磁场对包被磁珠的人视网膜色素上皮细胞丝裂素活化蛋白激酶信号转导通路的影响
- 2006年
- 目的探讨包被磁珠的人视网膜色素上皮(RPE)细胞在受磁场作用时丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的变化。方法将胶原包被的磁珠悬液加入体外培养的人RPE细胞后孵育,附着磁珠的细胞放置在恒定磁场中。用免疫印迹法检测MAPK的细胞外信号调控激酶(ERK)、c-jun氨基端激酶(JNK)及p38信号分子在3~30min时间段的表达情况和p38特异性阻断剂(SB203580)的干预作用,用免疫荧光染色法观察活化型p38的表达变化。结果在RPE细胞中,总ERK、JNK及p38均有表达,活化型ERK、p38亦有表达,活化型JNK未见表达。活化型ERK的表达无明显变化,而活化型p38在受磁场作用前表达量很低,但作用5min后即显著增高。吡啶异咪哒唑类化合物SB203580可以抑制牵拉作用造成的p38磷酸化。免疫荧光染色也显示牵拉刺激可以增加活化型p38的荧光量。结论磁场可以对包被磁珠的RPE细胞产生作用,部分作用可能通过p38信号转导途径产生。
- 侯旭惠延年韩泉洪张晓光胡丹郭长梅
- 关键词：电磁场色素上皮有丝分裂素激活蛋白激酶类
