国际科技合作重点项目计划(2005DFA31070)
- 作品数：3 被引量：19H指数：2
- 相关作者：岳明丁宏标乔宇吴秀丽更多>>
- 相关机构：中国农业科学院饲料研究所更多>>
- 发文基金：国际科技合作重点项目计划国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 海藻酸裂解酶基因在毕赤酵母中的表达及重组酶性质的初步研究被引量：3
- 2007年
- 褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）是一种海藻酸降解菌.本实验采用PCR的方法,以褐球固氮菌基因组DNA为模板,克隆出约1.05 kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列,并将其插入巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-algL.重组质粒线性化后用聚乙二醇（PEG）法导入毕赤酵母菌株GS115中,获得高效分泌表达海藻酸裂解酶的毕赤酵母工程菌株.用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,表达得到43 kDa的目的蛋白,酶活力可达1 400 U/cm^3左右.经测定,该重组酶的最适反应pH为8.5,最适反应温度为40℃,并且在20-55℃,pH2.0-11.0具有较好的稳定性.另外,10 mmol/cm^3的Cu^2＋,Fe^2＋,Co^2＋,Mn^2＋和Ca^2＋对酶有不同程度的抑制作用.
- 岳明丁宏标乔宇
- 关键词：毕赤酵母
- 海藻糖合酶的研究进展被引量：14
- 2009年
- 海藻糖是一种天然存在的非还原性二糖,对生物膜和蛋白质等大分子有独特的保护作用,在食品、医药、化妆品等多个领域中都有广泛的发展空间。海藻糖合酶(TreS)是一类分子内转糖苷酶,专一性地以麦芽糖为底物,一步转化生成海藻糖,操作工艺简单、底物价格低廉、应用前景良好。本文综述了海藻糖合酶的酶学性质、催化机理、基因工程以及目前存在的主要问题和拟解决方案。
- 吴秀丽岳明丁宏标
- 关键词：海藻糖海藻糖合酶麦芽糖
- 铜绿假单胞菌algL基因在毕赤酵母中的表达及其性质研究被引量：2
- 2008年
- 【目的】通过构建毕赤酵母工程菌株,以期获得重组海藻酸裂解酶,并对其性质加以研究。【方法】采用PCR的方法,以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)基因组DNA为模板,克隆出约1.0kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列,并将其插入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-algL。重组质粒线性化后用聚乙二醇(PEG)法导入毕赤酵母菌株GS115中表达。【结果】用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,表达得到40kD的目的蛋白,酶活力达540U·ml-1左右。经测定,该重组酶的最适反应pH为8.5,最适反应温度为40℃,并且在20～45℃,pH3.0～12.0具有较好的稳定性。50mmol·L-1的Co2+和Ca2+对酶活力均有显著的促进作用,Zn2+、Cu2+和Fe2+在不同浓度下对酶活力均有不同程度的抑制作用。在重组酶的辅助作用下,抗生素的抑菌效果明显提高。【结论】用重组毕赤酵母可高效表达外源海藻酸裂解酶,为其今后在工农业中的应用奠定了基础。
- 岳明丁宏标乔宇
- 关键词：毕赤酵母
