国家自然科学基金(31071455)
- 作品数：15 被引量：21H指数：2
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- 油菜含MATH结构域基因BnaMT-1的克隆及表达分析被引量：1
- 2012年
- 利用已构建的甘蓝型油菜种子发育过程SSH文库,筛选得到1个含MATH结构域的EST序列,并以其为信息探针,经电子克隆获得了该基因的全长cDNA,命名为BnaMT-1。BnaMT-1的开放阅读框(ORF)全长1 209 bp,编码402个氨基酸,相对分子质量为46 130.7,预测的理论等电点为8.50,其结构包括信号肽、跨膜结构及2个连续的MATH结构域,为亲水性胞外分泌蛋白;进化树分析发现,该基因与拟南芥含MATH结构域基因亲缘关系较近;利用半定量RT-PCR技术对该基因在甘蓝型油菜湘油15号不同组织及种子不同发育时期的表达分析表明:BnaMT-1在叶、花和果荚中都有表达,在根和茎中没有表达;种子发育过程中,BnaMT-1均有表达,且表达量于花后30～35 d最高,之后表达量下降。推测该基因可能与种子发育及油脂合成代谢相关。
- 赵黎明佘媛刘春林阮颖
- 关键词：油菜克隆
- 酵母双杂交诱饵载体pGBKT7_MYC2构建及表达鉴定被引量：1
- 2012年
- MYC2是一类含有helix-loop-helix(bHLH)结构域的转录因子。为进一步研究MYC2因子在植物防御抗性中的作用及其参与植物JA,SA等信号途径的作用机制,克隆了拟南芥的MYC2基因,以此构建了pG-BKT7_MYC2酵母双杂交载体,通过Western blotting验证表明,该载体能在酵母细胞里正常表达。
- 刘武肖牧阮颖刘春林
- 关键词：诱饵载体蛋白表达
- 拟南芥AtSb10基因的克隆及其过表达转基因株系的获得
- 2015年
- 拟南芥At Sb10基因是一个表达谱和功能都未知的基因,生物信息学分析发现其氨基酸序列含有2个连续的MATH结构域。为分析At Sb10基因的功能,首先,利用RT-PCR方法检测At Sb10基因在拟南芥中的表达模式,结果表明,该基因只在根中表达,而茎、叶片、花与果荚中未检测到;然后克隆了At Sb10基因全长,构建了过量表达载体,通过农杆菌介导法将该载体转入拟南芥Col-0中,获得了10株过表达转基因植株,为进一步研究At Sb10基因的功能奠定了基础。
- 赵莺婕刘春林阮颖
- 关键词：拟南芥生物信息学分析表达谱
- AtCS82基因T-DNA插入突变体筛选和过表达转基因植株的获得
- 2013年
- AtCS82是拟南芥中一个功能未知的基因,推测该基因可能与种子油脂合成代谢相关。为探明AtCS82基因的功能,采用半定量RT-PCR法对AtCS82基因在拟南芥不同组织(茎、叶、花、果荚)中的表达情况进行了分析,发现其在果荚中的表达量较高,而在茎、叶、花中的表达量明显偏低,推测AtCS82基因可能参与种子发育;使用三引物法对T-DNA插入突变体进行纯合子筛选,并通过RT-PCR检测纯合子植株中AtCS82基因的表达情况,试验结果证明获得了稳定遗传的AtCS82基因沉默纯合突变体;通过构建pCAMBIA1300-35S::CS82过表达载体,并转化拟南芥哥伦比亚野生型(Col)的方式,获得了AtCS82基因的过表达转基因植株。
- 陈锦华郭磊易力雄刘春林阮颖
- 关键词：过表达转基因植株
- 酵母双杂交表达载体pGBKT7_NPR1与pGADT7_NPR1的构建及酵母菌的转化
- 2013年
- NPR1是水杨酸介导的系统获得性抗性(SAR)途径中不可或缺的一个转录辅助因子。在SA诱导下,NPR1被转运至细胞核内并与一些转录因子结合,以启动下游基因的表达。本研究通过PCR扩增获得拟南芥中NPR1基因CDS序列,经过限制性内切酶酶切后在T4连接酶作用下分别克隆至pGBKT7与pGADT7酵母表达载体上,并成功将其转化至Gold酵母菌株中。为利用酵母双杂交筛选NPR1参与形成的转录复合体中其它可能存在的蛋白质并阐明其在植物防御信号传导途径中的互作模式奠定了基础。
- 肖牧徐健何乐刘春林阮颖
- 关键词：NPR1基因克隆
- 种子芥酸和硫苷含量对甘蓝型油菜遗传转化的影响
- 2014年
- 选取低硫苷低芥酸含量的甘蓝型油菜品种"湘油15号"和"Westar",高硫苷高芥酸含量的甘蓝型油菜品系"GX-272"和"GX29",利用农杆菌介导法,以pFGC5941为目标载体,分别对其进行遗传转化。以磷化麦黄酮(PPT)作为筛选剂,分别对4个油菜品种(系)的子叶柄分化率和转化率进行统计。结果表明,双低油菜"湘油15号"、"Westar"的子叶柄分化率高于高硫苷高芥酸油菜"GX-272"和"GX29";而高硫苷高芥酸油菜"GX-272"和"GX29"的转化率则高于双低油菜"湘油15号"、"Westar"。初步认为种子中硫苷和芥酸含量对甘蓝型油菜子叶柄遗传转化的分化率和转化率有一定影响。
- 魏解冰肖文娟刘春林
- 关键词：甘蓝型油菜硫苷芥酸
- 甘蓝型油菜iMyAP9、iMyAP12基因过表达载体的构建及转化拟南芥被引量：1
- 2012年
- 诱导型黑芥子酶协助蛋白(iMyAP)往往与黑芥子酶和黑芥子酶结合蛋白一起以复合体的形式存在,对植物的防御系统有着重要的作用。为了研究黑芥子酶协助蛋白在植物响应非生物胁迫方面的功能,通过以pBI121为载体,分别构建了CaMV35S::iMyAP9和CaMV35S::iMyAP12,浸花法转化拟南芥,用卡那霉素对转化植株进行筛选,并对抗性苗进行PCR检测,初步得到67株转基因植株;提取转基因拟南芥中RNA进行RT-PCR表达分析。结果表明,iMyAP9基因和iMyAP12基因在随机挑选的转基因拟南芥中获得了有效的表达。拟南芥转基因植株的获得为进一步探讨iMyAP9基因、iMyAP12基因的生物学功能奠定了基础。
- 张伟尹峰何雯魏然刘春林阮颖
- 关键词：油菜转基因拟南芥
- 拟南芥β-罗勒烯合成酶基因T-DNA插入突变体的鉴定
- 2011年
- β-罗勒烯(β-Ocimene)是一种单萜挥发性有机物,亦是一种重要的植物通讯信号分子。为了进一步研究β-罗勒烯的作用机理,需要获得β-罗勒烯合成酶基因表达沉默的实验材料。根据TAIR网站上公布的β-罗勒烯合成酶信息,从美国拟南芥生物资源中心购买该基因的T-DNA插入突变体材料,运用双引物法对这些突变体进行了T-DNA插入位点的鉴定,获得8株稳定遗传的纯合突变体,该结果为深入研究β-罗勒烯的功能奠定了良好基础。
- 马泉芳魏然刘春林
- 关键词：T-DNA插入突变拟南芥
- AtCS25基因过表达载体的构建和拟南芥的遗传转化
- 2012年
- AtCS25基因是拟南芥中一个功能未知的基因。生物信息学分析发现,该基因可能与花粉和花粉管的发育有关。为了进一步探究该基因的功能,克隆了AtCS25基因的全长CDS序列,并将克隆得到的片段插入到过表达载体pBI121相应的位置,构建了AtCS25基因的过表达载体pBI121-AtCS25。通过农杆菌GV3101介导将该载体转入拟南芥Col生态型中,获得了5株转基因植株,为进一步研究AtCS25基因的功能奠定了良好的基础。
- 刘博宇阮颖
- 关键词：生物信息学分析
- AtSDG8启动子区域功能元件的分析
- 2012年
- 启动子控制着基因表达的起始和程度,对基因的活动起着"开关"作用。为了深入了解基因SDG8的功能与特性,对SDG8启动子进行了初步的功能分析。以GUS作为报告基因,选取长度不同的两个启动子片段构建载体,转化到拟南芥中,获得转基因植株SLP和SSP。通过GUS基因的表达分析推测SDG8启动子的核心功能区域在-873～-2 706 bp之间,这一结果为进一步研究SDG8基因的功能和结构打下了基础。
- 金苏虢婷婷阮颖
- 关键词：启动子功能分析
