国家重点科技攻关计划项目(2004BA519A19)
- 作品数：2 被引量：28H指数：2
- 相关作者：杨涛刘明刘春国张云蔡雪辉更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所沈阳农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点科技攻关计划项目黑龙江省科技攻关计划项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立被引量：14
- 2005年
- 采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒(AIV)A/Goose/HLJ/p46/2003(H5N1)的NS1基因,将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上,转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析,表明筛选到了重组质粒pc2X-NS1。SDS-PAGE电泳结果显示,重组质粒转化TB1大肠埃希氏菌后,经0.3mmol/L的IPTG诱导,融合蛋白MBP-NS1得到大量表达,融合蛋白以可溶形式存在,分子质量约为67ku。Western-blotting检测结果表明,融合蛋白MBP-NS1能够与H5N1亚型AIV活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应,而不能够与H5N1亚型AIV灭活疫苗免疫鸭血清发生反应。试验初步建立了以纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的间接ELISA检测方法,为AIV灭活疫苗免疫家禽与AIV感染家禽的鉴别诊断奠定了基础。
- 杨涛刘明张云刘春国杜绍范
- 关键词：禽流感病毒NS1基因原核表达酶联免疫吸附试验
- 重组H5N3禽流感疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖条件研究被引量：14
- 2007年
- 为研究通过反义遗传学技术构建的重组禽流感病毒rH5N3疫苗株在MDCK细胞中大规模增殖规律,确定最佳增殖条件,将rH5N3疫苗株分别在500mL和10L转瓶培养的MDCK细胞中进行增殖试验,检测不同接毒量以及接毒后不同时间里的血凝价,以确定病毒的增殖情况。结果表明,在确定的最佳病毒增殖条件下,该重组rH5N3疫苗株在500mL转瓶和10L转瓶中可获得大量增殖,病毒的最高血凝价均可达到1∶1024。rH5N3疫苗株可以在MDCK细胞中大规模增殖,操作方法简便,成本低廉,该方法为禽流感细胞培养型疫苗的大规模生产奠定了基础。
- 杨涛刘明张云刘春国王洪峰蔡雪辉
- 关键词：禽流感细胞培养MDCK细胞
