国家自然科学基金(30900934)
- 作品数：9 被引量：50H指数：4
- 相关作者：黄军艳刘胜毅董彩华刘学群童超波更多>>
- 相关机构：中国农业科学院油料作物研究所中南民族大学郑州大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用高密度SNP标记定位甘蓝型油菜株高QTL被引量：12
- 2014年
- 为了提高甘蓝型油菜株高的分子标记辅助育种效率,以888-5（矮秆）×M083（高秆）构建的重组自交系为材料,通过利用新开发的油菜60K SNP芯片对群体进行SNP标记分型,并结合单环境和多环境2种QTL检测方法对4个环境下株高进行了QTL定位及其与环境互作分析。结果表明：2种QTL定位方法,共检测出27个油菜株高QTL,分布于8个连锁群（A2、A4、A5、A6、A9、A10、C3和C7）,单个QTL可解释的表型变异为0.70%~26.10%。其中6个QTL与环境存在互作效应,在4个环境下效应大小不一,但效应方向表现一致。主效QTL q PH2-4在2个环境下重复检测到,对表型变异解释为17.96%~26.10%,而且有2个SNP标记距离该QTL的最大峰值小于0.2c M。这些QTL为油菜株高的遗传改良提供了有用的遗传信息。
- 张凤启刘越英程晓辉童超波董彩华唐敏强黄军艳刘胜毅
- 关键词：甘蓝型油菜株高QTL定位
- 甘蓝型油菜Bn19070的表达与同源基因At2g19070的amiRNAi研究被引量：6
- 2011年
- 基于原芯片杂交结果,油菜杂合双显性雄性核不育系差异表达基因Bn19070与拟南芥At2g19070基因高度同源,在油菜可育株雄蕊中高量表达,不育株雄蕊中表达量极低。从雄性不育基因At2g19070入手,利用amiR-NAi(人工微RNA干扰)技术对其两个RNA区段分别设计靶标,转化拟南芥。在多个转基因拟南芥植株和后代中普遍观察到小孢子数量减少、成熟花粉萎缩失去活力、不结实或者少结实的不育表型。两个靶标的干扰使转基因拟南芥出现了类似的表型,基因表达抑制率都在90%以上,干扰效果好,暗示amiRNAi技术在靶标选择上具有一定的灵活性。At2g19070基因的干扰对Bn19070的功能研究有借鉴作用。
- 李振波王琢玉刘学群覃瑞黄军艳董彩华刘胜毅
- 关键词：雄性不育拟南芥
- 人工microRNAs干扰At3A06基因增强了拟南芥对菌核病的敏感性被引量：2
- 2010年
- 基于本研究室自主开发的油菜防御cDNA芯片分析结果,油菜基因Bn3A06受菌核病诱导后特异上调表达。序列比对发现,该基因与拟南芥基因At3A06高度同源,后者编码289个氨基酸,功能未知。本研究用花序浸染法将At3A06基因的人工微RNA(amiRNA)干扰载体(该载体包含一个除草剂草胺磷抗性基因)转化拟南芥。经草胺磷筛选获得3株T1代转基因植株,PCR检测均为阳性;荧光定量PCR检测表明,与野生型对照相比,3个转基因植株的At3A06基因的表达量均显著降低;对其T2代进行菌核病抗性鉴定,结果显示转基因株系对菌核病的敏感性均显著增强(P<0.05)。推测At3A06基因可能参与了植物的防御反应,与植株对核盘菌抗性相关。
- 黄军艳许李明张学江刘胜毅
- 关键词：拟南芥核盘菌防御反应荧光定量PCR
- 甘蓝型油菜LOX2基因在MeJA、BTH和核盘菌诱导下的表达被引量：5
- 2010年
- 利用荧光定量PCR技术,检测了甘蓝型油菜脂氧合酶基因LOX2在化学激素(MeJA和BTH)处理和核盘菌(Sclertinia sclerotiorum)接种后的表达差异,以及核盘菌诱导处理后LOX2基因在不同油菜菌核病抗性品种中的表达差异。结果显示:MeJA处理后,LOX2基因的表达水平在24 h达到最高,是处理前的30.3倍,表明LOX2基因的表达受MeJA诱导;相反,LOX2基因的表达受水杨酸类似物BTH的明显抑制。进一步研究表明:LOX2基因在核盘菌接种后期明显诱导上调表达,接种72 h后在高抗品种D083、中高抗品种ZS9和高感品种84039的表达量分别为接种前的5.0倍2、.7倍和1.7倍。因此,初步推测LOX2基因的高表达在油菜对菌核病抗性中起重要作用,参与了茉莉酸介导的菌核病抗性防御反应。
- 任秋红黄军艳毛晗田保明刘胜毅
- 关键词：油菜菌核病MEJABTH
- 抗菌肽基因BnPCD842895克隆表达及活性检测被引量：2
- 2013年
- 为寻找新型植物抗菌肽,通过生物信息学的手段在全基因组范围内进行油菜抗菌肽基因的预测和分析,初步筛选出与已知抗菌肽具有类似序列结构特征的候选基因BnPCD842895。BnPCD842895基因长度为189bp,编码48个氨基酸,通过overlap PCR方法,将合成的抗菌肽基因克隆到pET30a-EDDIE-GFP表达载体上。将大肠杆菌中表达得到的包涵体融合蛋白在体外复性,并通过融合蛋白EDDIE的自我剪切,从而获得不增加任何多余氨基酸的抗菌肽产物。抑菌活性检测结果表明BnPCD842895对革兰氏阳性菌和阴性菌都具有较强的抑菌活性。
- 黄金黄军艳柯涛周瑢曹慧慧马向东童超波于景印吴南董彩华刘胜毅
- 关键词：抗菌肽甘蓝型油菜活性检测
- 甘蓝型油菜BnERF104超表达增强了转基因拟南芥对核盘菌的抗性被引量：4
- 2011年
- 根据拟南芥乙烯响应因子AtERF104的序列设计保守引物,从甘蓝型油菜品种中双9号中克隆到同源基因BnERF104。序列分析表明BnERF104蛋白含有一个典型的ERF domain保守结构域,属于乙烯响应转录因子ERF家族的成员。甘蓝型油菜用核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)接种6h后,BnERF104基因被诱导显著上调表达。BnERF104基因在转基因拟南芥中的超表达提高了病原相关蛋白(PR)防御素PDF1.2和几丁质酶ChiB基因的表达量,显著增强了对腐生营养型真菌核盘菌的抗性。
- 汪承刚蔡丽董彩华黄军艳赵美霞周瑢刘胜毅
- 关键词：核盘菌
- 拟南芥抗菌核病突变体275-7的初步研究
- 2010年
- 草酸是核盘菌致病过程中产生的毒素因子。以菌核病菌毒素草酸(3mmol/L)为筛选压,从1000个拟南芥T-DNA插入突变体中筛选出了1个草酸不敏感突变体,命名为275-7。通过拟南芥活体接种对突变体275-7进行菌核病抗性鉴定,与野生型相比,突变体275-7对菌核病的抗性显著增强(P<0.05);荧光定量PCR检测结果表明,275-7中茉莉酸途径的标志基因PDF1.2的表达量是野生型的12倍,而水杨酸途径的标志基因PR1基因的表达量与野生型比较无差异。推测拟南芥突变体275-7可能通过增强水杨酸介导的防卫反应,从而表现出对菌核病的抗性。
- 李丹黄军艳张学江刘学群覃瑞刘胜毅
- 关键词：拟南芥突变体菌核病抗性草酸
- 甘蓝型油菜RabGDI3基因启动子的克隆和功能验证被引量：2
- 2013年
- 以甘蓝型油菜(Brassica napus L.)基因组DNA为模板扩增获得BnRabGDI3基因翻译起始位点上游2 064bp的启动子序列。在线预测分析发现该启动子序列中有很多花药特异表达元件。将克隆得到的BnRabGDI3启动子取代pBI121中的CaMV35S启动子,构建BnRabGDI3启动子驱动报告基因gus表达的双元载体pBnRabG-DI3::GUS,并用根癌农杆菌介导法转化拟南芥。对获得的含有报告基因gus的6个转基因株系进行GUS活性分析。结果表明,在BnRabGDI3启动子的驱动下,报告基因gus仅在花药中特异表达。花药的冰冻切片显示gus仅在花药发育的第11到13期有表达,在花药的双核和三核期小孢子细胞中表达量最高。实验结果暗示BnRabGDI3基因可能与小孢子的发育相关。
- 王轩鹏李振波童超波黄军艳于景印董彩华刘胜毅
- 关键词：油菜启动子花药转基因拟南芥
- 一种适用于油菜、大豆、花生、芝麻四种油料作物种子的RNA提取方法被引量：18
- 2012年
- 油料作物种子中,大量油脂、蛋白、酚类物质的存在和易氧化的特点导致RNA提取困难。为了解决这一问题,本研究在商业化RNA提取试剂盒的基础上,通过以下3方面的改进,使之成功应用于油菜、花生、芝麻和大豆的各个时期种子RNA提取和后期的荧光定量分析实验:1)增加抗氧化剂巯基乙醇和PVP;2)根据不同作物的油脂含量调整氯仿的比例;3)改进RNA沉淀方法,加大洗脱液体积后用乙醇沉淀。与常规的CTAB、TRIZOL及文献报道的RNA提取方法比较,本方法提取的RNA更完整、得率更高、纯度更高;所得RNA被成功应用于FAD2基因的荧光定量表达分析,发现了四种作物种子不同发育时期的FAD2基因的表达差异,证明了改良方法的有效性。
- 孙海波王智慧刘学群黄军艳董彩华刘胜毅
- 关键词：RNA提取油菜大豆花生芝麻
