首都医学发展科研基金(2005-2038)
- 作品数：9 被引量：47H指数：3
- 相关作者：郭静霞李伯安徐军刘爱霞刘佳更多>>
- 相关机构：解放军第302医院首都医科大学附属北京地坛医院中国人民解放军第三〇二医院更多>>
- 发文基金：首都医学发展科研基金“首都临床特色应用研究”专项更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 高尔基体蛋白73定量检测方法的建立被引量：4
- 2013年
- 目的建立人血清中高尔基体蛋白73（GP73）的定量酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法辣根过氧化物酶标记GP73单抗，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的ELISA检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、线性范围、特异性、稳定性等性能指标。结果所建立方法的灵敏度为18．5ng／ml，线性范围为25～500ng／ml，批内、批间变异均〈10％。检测GP73临床高、中、低值血清回收率为分别为95．3％、92．6％和103．7％；在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．98，标准偏差〈10％。结论成功建立了定量检测血清中GP73的方法，该方法能够满足临床检测的需球。
- 侯俊郭桐生赵静刘爱霞宋永继郭静霞刘佳陈霖徐军魏红山李伯安
- 关键词：酶联免疫吸附测定高尔基体肝肿瘤
- 血清肝纤维化指标酶联免疫分析实验和增强化学发光免疫分析系统检测的评价被引量：2
- 2009年
- 目的评价增强化学发光免疫分析系统（Enhanted Chemiluminescence Immunoassav，ECLIA）与酶联免疫吸附试验（ELISA），测定血清透明质酸（HA）、层黏蛋白含量（LN）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）和Ⅲ型前胶原（PCⅢ）方法与患者肝纤维化程度的相关性。方法以患者肝穿病理结果为金标准，分别用ECLIA和ELISA法检测253例患者的4项血清纤维化指标，并分别与病理结果进行比较。结果两种方法的检测结果均能反映患者从肝炎到肝硬化的肝纤维化逐渐加重的趋势。但与ELISA法比较，ECLIA方法检测的结果与病理结果的相关性较好。结论ECLIA系统检测血清肝纤维化四项指标，可以更好的反应肝硬化的发展程度。
- 郭静霞马洪滨李永利徐军杨丽华史佳彬李波刘爱霞李小溪李伯安毛远丽
- 关键词：血清学酶联免疫吸附测定
- 乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 目的建立人血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV-LP）的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法辣根过氧化物酶标记HBV-LP单抗，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的ELISA检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、特异性、稳定性等性能指标。结果所建立方法的灵敏度为5ng／ml，批内、批间变异均小于10％。在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．98，标准偏差〈10％。结论成功建立了血清中HBV—LP的检测方法，该方法性能能够满足临床检测的需求。
- 赵静马洪滨侯俊郭静霞徐军宋永继陈霖刘爱霞刘佳魏红山李伯安
- 关键词：酶联免疫吸附测定病毒包膜蛋白质类
- 高尔基体蛋白73原核表达系统的构建及单克隆抗体的制备被引量：4
- 2013年
- 目的克隆、表达高尔基体蛋白73（GP73），并制备单克隆抗体。方法用逆转录聚合酶链反应法从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增GP73编码序列，将产物与pQE31载体连接，转化人大肠埃希菌BL21，诱导表达后通过His标签进行纯化，用纯化后的蛋白免疫BALB／c小鼠，采用常规的细胞融合技术制备单克隆抗体，并对其进行鉴定。结果重组载体经序列分析与报道序列同源性100％，并获得了重组蛋白。筛选出5株能稳定分泌抗GP73的单克隆抗体杂交瘤细胞株，免疫球蛋白类型有2株为IgGl类。WesternBlot印迹显示这些单抗能特异结合GP73蛋白。结论成功构建了人高尔基体蛋白73原核表达体系，并获得了单克隆抗体。
- 郭静霞魏红山宋永继赵静刘爱霞刘佳陈霖徐军李伯安毛远丽
- 关键词：高尔基体肝肿瘤
- Ⅲ型前胶原氨基端肽的化学发光定量检测
- 2013年
- 目的建立人血清中Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢNP）的定量微孔板化学发光酶免疫检测方法。方法辣根过氧化物酶标记PⅢNP单抗，选用鲁米诺化学发光体系检测，优化各类反应液的工作浓度和各种反应条件，建立双抗体夹心的检测方法；同时评价所建立方法的灵敏度、特异性、线性范围、稳定性等性能指标；并应用临床血清与进口试剂进行比对实验。结果所建立方法的线性范围为0．8—85ng／ml，灵敏度0．5rig／ml，批内、批间变异均〈10％。检测PⅢNP的临床高、中、低值血清回收率分别为96．2％、91．2％和101．1％；在4℃和37℃条件下分别进行了3d、5d．7d的稳定性考察，线性相关系数均〉0．99，标准偏差〈6％；比对实验分析显示与进口试剂相关性具有统计学意义。结论成功建立了定量PmNP化学发光酶免疫分析方法，并且有较好的准确性、灵敏度、重复性，与进口试剂检测结果等效。
- 刘佳冯艳青宋永继侯俊陈霖赵静刘爱霞郭静霞徐军魏红山李伯安
- 关键词：化学发光前胶原肝硬化酶联免疫吸附测定
- 甲胎蛋白异质体L3预警原发性肝癌的研究被引量：32
- 2008年
- 目的探讨甲胎蛋白异质体（AFP-L3）的检测在预警原发性肝癌中的作用。方法对100例AFP升高肝病患者血清，应用甲胎异质体微量离心柱分离并洗脱获得AFP-L3，再同时检测原始血清中的AFP以及AFP-L3含量，计算AFP-L3在AFP中的比例，对AFP-L3异常升高者、正常者进行跟踪，结合6个月后临床诊断结果，分析AFP-13升高在鉴别良性肝脏病变与预警肝癌中的作用。结果肝癌、疑似肝癌患者与良性肝病患者中的AFP-L3阳性率差异有统计学意义（分别为81．80％、73．68％、11．80％，P〈0．05）。未确诊肝癌（疑似HCC、肝病）的患者中，AFP—L3阳性的21例中有12例在6个月内被诊断为HCC，而且有6例是通过B超、CT等影像学手段被早期确诊的单发性小肝癌。AFP-L3阴性的62例标本中，6个月内有3例发生肝癌，AFP-L3阳性发生肝癌的危险率增加了11．9倍。结论AFP-L3与AFP值无相关性，可以作为一个独立肝细胞癌诊断因子。AFP-L3的测定对于AFP升高时良、恶性肝病的鉴别及肝癌的早期预警诊断具有重要意义。
- 李永利马洪滨郭静霞史佳彬徐军刘爱霞杨丽华李伯安毛远丽
- 关键词：甲胎蛋白类肝细胞
- 亲和吸附纯化甲胎蛋白异质体方法的建立被引量：3
- 2013年
- 目的利用小扁豆凝集素（LCA）建立基于微量离心柱的甲胎蛋白异质体L3（AFP—L3）的纯化方法。方法采用硫酸铵分级沉淀的方法由小扁豆中提取凝集素，偶联到活化的琼脂糖凝胶4B（sephrose4B）上，灌注离心柱，制备AFP—L3亲和吸附离心管。血清加入离心管后经吸附和洗脱，便可获得纯化的AFP—L3。随机选取10例AFP阳性患者血清，应用亲和吸附纯化法纯化AFP．L3后应用电化学发光法检测，并与传统的亲和免疫电泳方法相比较。结果10例患者血清经纯化后，AFP-L3检测结果有8例〉5ng／ml，亲和免疫电泳有6例呈现阳性反应。结论成功建立基于微量离心柱的亲和吸附纯化AFP—L3的方法，该方法具有较高的灵敏度，重复性好并且操作简便更利于临床实验室应用。
- 宋永继侯俊徐军刘爱霞刘佳赵静郭静霞李靖闫静肖李伯安毛远丽
- 关键词：甲胎蛋白类凝集素类
- 化学发光酶免疫分析法定量检测人血清层粘连蛋白
- 2013年
- 目的建立检测人血清层粘连蛋白(LN)的化学发光酶免疫分析法(CEIA)。方法用3μg/mL抗人LN单抗包被微孔板制成固相抗体,辣根过氧化物酶标记抗人LN单抗浓度为1∶2 000,建立检测人血清LN浓度的CEIA法。评价该法的线性范围、灵敏度、稳定性等性能指标;并与ELISA法检测LN进行比对;初步检测100例健康献血员血清LN水平。结果该法线性范围为22～1 635 ng/mL,灵敏度为12.2 ng/mL,批内、批间变异系数均<10%,检测高、中、低值LN血清的回收率分别为100.9%、95.2%和105.0%;试剂在4℃和37℃条件下至少稳定7 d;健全性良好;与ELISA法检测LN结果差异无统计学意义(t=0.299,P>0.05);100例健康献血员LN水平为(44.9±16.3)ng/mL。结论成功建立定量检测LN的CEIA法,该法性能较好,可用于临床检测。
- 徐军刘佳郭静霞赵静陈霖宋永继刘爱霞戴亮李伯安
- 关键词：层粘连蛋白肝纤维化
- 竞争化学发光酶免疫分析检测血清透明质酸方法的建立被引量：2
- 2013年
- 目的建立人血清透明质酸(HA)化学发光酶免疫定量检测分析方法。方法以偶联了牛血清白蛋白的透明质酸包被,以辣根过氧化物酶标记透明质酸结合蛋白(HABP),以过氧化氢(H2O2)-鲁米诺(luminol)化学发光体系作为检测体系,采用竞争法的反应模式,优化筛选温育条件、抗体包被条件、酶标记物稀释度和发光反应时间等条件。同时进行回收实验、热稳定性等实验,并随机选取60例肝纤维化患者血清与进口试剂进行比对实验。结果所建立方法的检出限为6.12μg/L,批内和批间变异均小于10%。检测HA的临床高、中、低值血清回收率为分别为93.5%、95.6%和101.2%;在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7 d的稳定性考察,线性相关系数均>0.98,标准偏差<9%。比对实验分析证明2种方法差异无统计学意义(P=0.62>0.05)。结论成功建立定量HA微孔板化学发光酶免疫分析方法,该方法具有较高的准确性、灵敏度及良好的重复性,并与进口试剂检测结果一致。
- 刘爱霞侯俊刘佳徐军赵静郭静霞闫静肖李伯安
- 关键词：透明质酸肝纤维化
