国家自然科学基金(39970237)
- 作品数：15 被引量：59H指数：5
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- 成年SD鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化过程中分化与凋亡关系的研究被引量：14
- 2003年
- 目的 :探讨体外诱导骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化过程中分化和凋亡间的关系 ,为进一步延长神经元样细胞的存活提供理论和实验依据。方法 :采用全骨髓法分离培养成年SD鼠骨髓基质干细胞至第 5代 ,以 β-巯基乙醇 (1mmol/L)及维甲酸 (RA ,1 0 - 6 mol/L)诱导分化 ,于诱导后 1h、3h、5h分别行神经元特异性抗原MAP- 2免疫组化鉴定 ,并计数神经元样细胞数 ,计算分化率。核荧光染料DAPI检测诱导后 5h和 2 4h细胞核的凋亡特异性形态学改变 ,流式细胞仪对细胞凋亡峰的分析检测诱导后 1h、3h、5h细胞凋亡率。结果 :成年鼠骨髓基质干细胞经 β -巯基乙醇 (1mmol/L)及维甲酸 (RA ,1 0 - 6 mol/L)诱导 30min后可见神经元样细胞出现 ,经MAP - 2免疫组化鉴定 ,此类细胞呈阳性 ,诱导后 1h、3h、5h神经元样细胞分化率分别为 41 %、44 %、73 %和 2 4 %、37%、61 %。但诱导后 5h见细胞漂浮并死亡 ,此时DAPI染色显示部分细胞核浓缩 ,出现核碎片。流式细胞仪检测经 β -巯基乙醇诱导后 1h、3h、5h细胞的凋亡率分别为 1 .5 %、6 .1 %、2 1 .5 % ,经RA诱导后的凋亡率分别为 1 .5 %、1 .7%、1 2 .3 %。结论 :①β -巯基乙醇及RA诱导骨髓基质干细胞分化成为神经元样细胞的能力不同。
- 张蒙夏谢富康
- 关键词：骨髓基质干细胞神经元样细胞分化中枢神经系统疾病
- 坐骨神经源性弥散因子对成年青蛙再生轴突的定向诱导作用
- 2001年
- 目的 探讨损伤后周围神经产生的活性因子对活体成年青蛙断神经再生轴突的定向趋化诱导作用。方法 通过微型渗透压泵以不同的角度和距离朝被切断的支配左皮胸肌的神经末端提供坐骨神经条件性培养基(conditionedmedium ,CM) 30～ 10 0kD组分 ,形成浓度梯度。 2 8～ 32d后 ,取出胸部组织行免疫组织化学染色示再生的皮胸肌神经轴突 ,并分析再生轴突定向生长的导向值 (directionalvalue)。 结果 再生的皮胸肌神经轴突明显地朝向微型泵管口CM浓度梯度高处生长 ,导向值为 0 84。对照组再生的神经轴突呈无定向生长 ,导向值为 0 0 4。两组间有显著性差异 (P <0 0 0 1)。管口与神经断端间距离和夹角的大小变化对导向值无显著性影响。 结论 损伤后的周围神经可产生分子量介于 30～ 10 0kD可弥散活性因子 。
- 谢富康郑敏
- 关键词：轴突坐骨神经外周神经损伤青蛙
- 中枢髓鞘膜蛋白抑制神经突起生长与胞内cAMP关系的研究被引量：2
- 2001年
- 目的 探讨中枢神经髓鞘膜蛋白抑制神经突起生长与神经元胞内cAMP水平的关系。 方法 应用体外培养方法观察经密度梯度离心法提取的中枢神经髓鞘膜蛋白对小脑颗粒细胞突起生长的影响 ,用放射免疫方法检测神经元接触髓鞘膜蛋白后胞内cAMP水平的变化。 结果 1 中枢神经髓鞘膜蛋白抑制培养小脑颗粒细胞突起的生长 ;2 神经元接触髓鞘膜蛋白后的最初 5min ,胞内cAMP水平即开始下降 ,12h降至最低点。
- 李涛谢富康
- 关键词：髓鞘膜蛋白小脑颗粒细胞神经再生信号转导CAMP
- 施万细胞条件培养基对大鼠骨髓间质细胞的诱导分化作用
- 2002年
- 目的 探讨施万细胞条件培养基对大鼠骨髓间质细胞的诱导分化作用。方法 从大鼠骨髓中分离培养间质细胞并传至第 6代 ,诱导前 2 4h加 1μg·L-1碱性成纤维生长因子 (bFGF)入培养液中以促分裂 ,再以施万细胞条件培养基作诱导剂 ,观察细胞形态的变化 ,并采用免疫组织化学法对诱导后一周的细胞进行Map 2及NSE、GFAP表达的检测。结果 诱导后 48小时间质细胞在形态上表现为神经元样 ,神经元样细胞呈Map 2及NSE阳性 ,而GFAP显阴性。结论 施万细胞的上清液能诱导骨髓间质细胞分化为神经元样细胞。
- 庄菁余克明谢富康罗超权
- 关键词：施万细胞条件培养基骨髓间质细胞诱导分化作用
- 成年SD鼠骨髓基质干细胞培养及向神经元样细胞定向分化的研究被引量：2
- 2003年
- 目的 探讨体外培养、扩增骨髓基质干细胞的方法 ,诱导骨髓基质干细胞向神经元样细胞定向分化。方法 采用全骨髓法培养成年SD大鼠股骨骨髓基质干细胞。传至第 5代 ,用全反式维甲酸诱导分化 ,于诱导后第 5小时行神经细胞特异性抗原MAP - 2和胶质细胞特异性抗原GFAP鉴定。结果 成年鼠骨髓基质干细胞经全反式维甲酸诱导30min后可见神经元样细胞出现 ,经MAP - 2免疫组化鉴定阳性。结论 ⑴骨髓基质干细胞在体外扩增迅速 ,纯化需时短。
- 张蒙夏唐圣松谢富康
- 关键词：骨髓基质干细胞神经元细胞定向分化全反式维甲酸细胞培养
- 成年SD鼠骨髓基质细胞的细胞分化及抗凋亡的研究被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨用不同的抗凋亡剂与诱导剂组合进行诱导 ,以延长分化后神经元样细胞存活时间 ,为临床治疗提供长寿细胞。 方法 采用全骨髓法培养成年SD大鼠股骨骨髓基质细胞。传至第 5代 ,用单一或组合的诱导剂诱导分化 ,诱导分 6组 :RA、褪黑素 (10 - 9mol L)、bFGF、bFGF +RA、褪黑素 +RA、褪黑素 +bFGF。于诱导后第 5h行神经细胞特异性抗原MAP 2和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组织化学鉴定 ,并分别在诱导后的第 1、5和2 4h计数各组神经元样细胞的分化率 ,比较各组诱导后神经元样细胞的存活率。 结果 神经元样细胞皆呈MAP 2阳性 ,GFAP阴性。RA、褪黑素 (10 - 9mol L)、bFGF、bFGF +RA、褪黑素 +RA、褪黑素 +bFGF各组诱导后第 1h分化率分别为 0 2 4、0 2 8、0、0、0 4 4、0 6 4 ;5h为 0 5 6、0 4 0、0、0、0 76、0 83;2 4h为 0 10、0 2 7、0、0 14、0 35、0 5 9。诱导后 2 4h神经元样细胞存活率在RA、褪黑素、褪黑素 +RA、褪黑素 +bFGF 4组分别为 0 0 8、0 37、0 0 5、0 5 1。 结论 1 bFGF单独不能诱导骨髓基质细胞向神经元样细胞分化 ,且拮抗RA的诱导作用 ,但对褪黑素的诱导有互补作用。 2 单独用褪黑素可诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞并有对抗神经元样细胞凋亡作用。 3
- 张蒙夏谢富康
- 关键词：骨髓基质细胞神经元褪黑素碱性成纤维细胞生长因子分化
- 褪黑激素对新生大鼠神经干细胞向神经元样细胞分化的影响被引量：5
- 2002年
- 【目的】探讨褪黑激素对体外培养新生大鼠神经干细胞分化的影响。【方法】从新生SD大鼠室管膜下区分离依赖碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和表皮细胞生长因子 (EGF)生存的神经干细胞进行培养 ,原代及子代细胞鉴定后用于实验。实验细胞均在无生长因子而含 10mL/L胎牛血清条件下培养 ,经褪黑激素或Luzindole作用 1周后做免疫组织化学染色 ,比较Map2阳性细胞出现率。【结果】①依赖bFGF和EGF生长的神经干细胞体外呈集落样生长 ,表达抗原蛋白巢蛋白(Nestin) ,无生长因子培养基中可分化形成胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)、S10 0蛋白、微管相关蛋白 (Map2 )阳性细胞。②褪黑激素能够提高Map2阳性细胞生成率 (2 3 4 5 % ,2 1 82 % ) (P <0 0 1)。③褪黑激素膜受体竞争性阻断剂Luzindole可阻断高浓度 (10 0 μmol/L)褪黑激素促神经干细胞分化作用 ,但不能抑制低浓度褪黑激素 (10nmol/L)的作用。【结论】褪黑激素能促进神经干细胞向神经元样细胞分化 ,不同浓度褪黑激素可能存在不同的作用机制。
- 胡黎平谢富康李海标
- 关键词：褪黑激素细胞分化
- 胞内cAMP对髓鞘膜蛋白抑制神经突起生长的影响
- 2001年
- 目的 :探讨预先升高小脑颗粒神经元胞内cAMP是否可抵消髓鞘膜蛋白对神经再生的抑制作用。方法 :用霍乱毒素、双丁酰环磷腺苷预先孵育小脑颗粒神经元以间接和直接提高胞内cAMP ,培养神经元于髓鞘膜蛋白基质上 ,观察对神经元突起生长的影响。结果 :未经霍乱毒素和双丁酰环磷腺苷预孵的小脑颗粒神经元在髓鞘膜蛋白基质上仅有较短的神经元突起生长 ,最长长度均值为 1 2 43 μm ;而经霍乱毒素、双丁酰环磷腺苷预孵后的神经元在髓鞘膜蛋白基质上有较长的神经突起生长 ,最长长度均值分别为 3 0 .2 1 μm和 3 0 .85 μm。预孵前后差别明显 (P <0 .0 5 )。结论 :预先间接和直接升高神经元胞内cAMP水平 ,均可有效抵消髓鞘膜蛋白抑制神经突起生长的作用。
- 李涛谢富康
- 关键词：小脑小脑颗粒神经元髓鞘膜蛋白神经元突起
- 骨髓间充质干细胞向肌管状结构分化的动态被引量：5
- 2006年
- 目的探讨5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌细胞分化的最佳条件和体外分化的过程。方法体外培养Sprague-Dawley(SD)大鼠的MSCs,传代至P3、P6或P12;用5-氮胞苷诱导,比较不同诱导浓度组、不同诱导时间组和不同体重动物组MSCs的分化率,观察诱导后细胞分化过程中形态学的变化,并且用cardiactroponinI、desmin和α-sarcomericactin抗体鉴定分化的心肌样细胞。结果P12代较P3或P6代骨髓MSCs易向心肌样细胞分化并融合成肌管样结构。经10"mol/L的5-氮胞苷诱导24h后细胞分化率为(27±2.5)%,20"mol/L的5-氮胞苷诱导24h后细胞分化率为(17±2.2)%,其它诱导浓度和诱导时间均不能诱导细胞分化;50g(幼年鼠)体重组细胞分化率为(27±2.8)%,150g(成年鼠)体重组细胞分化率为(15±2.9)%,各组的差异有统计学意义。结论5-氮胞苷诱导MSCs向心肌样细胞分化并融合成肌管样结构,年幼的SD大鼠MSCs易向心肌样细胞分化。
- 张志冯英谢富康
- 关键词：间充质干细胞5-氮胞苷细胞分化
- 髓鞘膜蛋白对小脑颗粒细胞突起生长的抑制作用
- 2002年
- 为探讨大鼠中枢神经髓鞘膜蛋白对小脑颗粒细胞突起生长的抑制作用 ,本研究采用蔗糖密度梯度离心法提取大鼠中枢神经髓鞘膜蛋白用做培养基质 ,观察了体外分离培养中髓鞘膜蛋白对小脑颗粒细胞突起生长的抑制作用以及此抑制作用的时效与量效关系。结果证明 ,髓鞘膜蛋白对培养的小脑颗粒细胞突起的生长有抑制作用 ,这种抑制作用在培养 2 4h最明显 ;在一定范围内 ( 0 .1μg/ml～ 2 0 μg/ml)
- 李涛谢富康
- 关键词：髓鞘膜蛋白小脑颗粒细胞突起生长神经再生
