国家自然科学基金(39970288)
- 作品数：5 被引量：19H指数：3
- 相关作者：甄永苏王维刚沈恩允张胜华唐勇更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院南方医科大学南方医院广州医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 内质网滞留型抗Ⅳ型胶原酶胞内抗体对肿瘤细胞侵袭和增殖的抑制作用被引量：5
- 2004年
- 背景与目的:侵袭转移是恶性肿瘤细胞的重要特性,Ⅳ型胶原酶(包括基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9)在恶性肿瘤转移扩散中发挥着极其重要的作用。我们通过胞内抗体技术,阻断Ⅳ型胶原酶的分泌,以期达到抑制恶性肿瘤细胞侵袭转移的效果。方法:构建编码可在内质网滞留的抗Ⅳ型胶原酶单链抗体的表达载体pcDNA3.1-ER.scFv,并转染入人巨细胞肺癌PG细胞系内。Westernblot检测pcDNA3.1-ER.scFv的表达,免疫共沉淀实验分析胞内抗体ER.scFv在PG细胞内与靶蛋白相互作用情况,明胶酶谱检测Ⅳ型胶原酶的分泌,以及体外侵袭和增殖实验。结果:ER.scFv在PG细胞内表达,而且能够识别和结合靶蛋白基质金属蛋白酶9。通过胞内抗体的基因转染,显著抑制了Ⅳ型胶原酶的功能和活性。ER.scFv转染的PG细胞较野生型和空白质粒组,侵袭能力明显降低,抑制率为76.3%(P<0.05),在Matrigel上进行细胞培养,ER.scFv对PG细胞有明显的抗增殖效果。结论:内质网滞留型胞内抗体技术可以在蛋白加工、分泌这一关键通路中抑制肿瘤细胞Ⅳ型胶原酶的活性,进而抑制了肿瘤侵袭和增殖,在肿瘤基因治疗中具有应用前景。
- 沈恩允王维刚李毅张胜华甄永苏
- 关键词：胞内抗体肿瘤侵袭增殖基因治疗
- 抗Ⅳ型胶原酶单链抗体的表达及其对肿瘤细胞侵袭的抑制作用被引量：9
- 2001年
- 目的:制备抑制肿瘤细胞侵袭转移的单链抗体片段,用于构建小型化的免疫偶联物。方法:应用噬菌体呈现技术,以产生抗Ⅳ型胶原酶单抗的杂交瘤细胞为基础克隆构建单链抗体(scFv)基因。以表达质粒pET30a+为载体在大肠杆菌中进行诱导表达。ELISA法测定表达产物的免疫反应性,明胶酶谱法测定表达产物对靶酶活性的影响。BoydenChamber测定表达产物对肿瘤细胞侵袭的影响。结果:表达的单链抗体以包涵体形式存在,经变性和复性后,检测表明表达产物保留了对抗原的免疫反应性,对高转移性人肺癌PG细胞分泌的Ⅳ型胶原酶有抑制作用。同时在体外能抑制肿瘤细胞的侵袭,抑制率与表达产物的剂量浓度相关,1mg/ml浓度的片段具有68%的抑制率。结论:运用基因工程手段获得的单链抗体片段保留了亲本抗体的若干特性,对Ⅳ型胶原酶有抑制作用,并能抑制肿瘤细胞的侵袭。
- 唐勇甄永苏
- 关键词：单链抗体工程抗体肿瘤侵袭
- 抗Ⅳ型胶原酶胞内抗体对人巨细胞肺癌PG细胞侵袭的抑制作用被引量：2
- 2006年
- 目的探讨内质网滞留型胞内抗体对Ⅳ型胶原酶分泌及其对人巨细胞肺癌PG细胞侵袭的抑制作用。方法构建了编码胞浆和内质网滞留型抗Ⅳ型胶原酶抗体的表达载体pcDNA3.1-CP.scFv和pcDNA3.1-ER.scFv。对人巨细胞肺癌PG细胞系进行基因转染。以Western blot检测pcDNA3.1-CP.scFv和pcDNA3.1-ER.scFv的表达,明胶酶谱检测PG细胞Ⅳ型胶原酶分泌情况,Matrigel实验检测细胞侵袭。结果CP.scFv和ER.scFv胞内抗体在PG细胞内表达,ER.scFv对Ⅳ型胶原酶分泌具有显著的抑制作用,对基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶-2的抑制率分别为85.7%和51.2%;而CP.scFv对Ⅳ型胶原酶分泌无抑制作用。ER.scFv编码基因转染的PG细胞与野生型和空白质粒组比较,对体外侵袭有明显的抑制,抑制率为76.3%;而CP.scFv编码基因转染的PG细胞未显示出有抑制作用。结论内质网滞留型胞内抗体技术可以在蛋白加工、分泌通路中抑制Ⅳ型胶原酶的活性,进而抑制肿瘤侵袭,可能在肿瘤基因治疗中具有重要的应用前景。
- 沈恩允王维刚张胜华甄永苏
- 内质网滞留型抗明胶酶胞内抗体的基因表达及对肿瘤细胞侵袭和增殖的抑制作用
- 2004年
- 目的 :明胶酶 (包括MMP 2和MMP 9)在恶性肿瘤转移扩散中发挥着重要的作用 ,探讨运用胞内抗体技术通过胞内抗体与明胶酶结合 ,阻断明胶酶向细胞表面的分泌 ,对恶性肿瘤细胞侵袭转移抑制的效果。方法 :构建可在真核细胞内质网表达抗明胶酶抗体基因的真核表达载体PcDNA3.1.ER .scFv ,瞬时和稳定基因转染 ,Westernblot检测基因表达 ,免疫沉淀实验检测胞内抗体与靶蛋白结合情况 ,明胶酶谱检测明胶酶的分泌 ,用相关方法观察细胞体外运动、侵袭和增殖。结果 :ER .scFv抗体基因在PG细胞内表达 ,能与靶蛋白MMP 9特异性结合 ,对PG细胞明胶酶分泌具有显著的抑制作用。ER .scFv胞内抗体对PG细胞体外Matrigel侵袭有抑制作用 ,抑制率为 76 .3% (P <0 .0 5 ) ,对PG细胞的体外迁徙没有影响。在体外增殖实验中 ,稳定表达ER .scFv的PG细胞在Matrigel的增殖受到明显抑制。结论 :内质网滞留型胞内抗体技术可以在蛋白加工、分泌这一关键通路中抑制肿瘤细胞明胶酶的活性 ,进而抑制与明胶酶直接相关的侵袭和增殖 。
- 吴承先冯立忠于江
- 关键词：明胶酶抗体基因肿瘤抑制基因表达
- 兔坐骨神经急性挤压伤MRI定量研究被引量：4
- 2005年
- 目的 探讨兔坐骨神经急性挤压伤MRI神经/肌肉信号比(SIR)在诊断外周神经损伤中的价值。方法 32 只新西兰白兔按钳夹力的不同随机分为A、B两组,建立兔坐骨神经急性挤压伤模型,于损伤后1、2、4、8周分别行双侧坐骨神经MR扫描,测量双侧坐骨神经各序列SIR值。结果 神经挤压伤后,除T1WI上无明显改变,在其余四序列上SIR均不同程度升高,1周时神经远段SIR升高,2周时SIR达高峰,4周时开始下降,8 周时下降较明显,与损伤后神经退变和再生及肢体功能的动态变化相一致。损伤侧神经远段SIR明显高于对照侧(P<0.001)。结论 SIR动态测量可直观、客观、无创性反映神经退变和再生的过程,为临床判断预后提供客观依据。
- 李新春伍筱梅陈健宇沈君曾庆思王欣璐梁碧玲
- 关键词：坐骨神经磁共振成像动物
