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国家重点基础研究发展计划(2012CB114600): 作品数：52 被引量：133H指数：5; 相关作者：夏庆友赵萍贡成良曹广力薛仁宇更多>>; 相关机构：西南大学苏州大学中国农业科学院生物技术研究所更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>

Characterization of the Bombyx mori Cecropin A 1 promoter regulated by IMD pathway被引量：3: 2016年; Cecropin A1 （CeeA1） promoter from Bombyx mori was cloned and character- ized to provide insight into the transcriptional control of this antimicrobial peptide gene upon immune challenges. Reporter gene assays demonstrated that both Escherichia coli and lipopolysaccharide could induce expression in BmE cells but B. bombyseptieus or peptidoglycan failed, and the induction pattern of the reporter gene was coincident with the endogenous CecAl. Analysis of deletion and mutation constructs revealed that the regulatory region was the κB motif located between -176 and -166, and no other pre- dicted elements on CecAl promoter affected its inducibility. Insertion of additional κB motifs increased the activity of CecAl promoter. Furthermore, binding of Relish to lob motif was confirmed by electrophoretic mobility shift assay. These findings indicate the regulatory mechanism of CecAl expression in IMD pathway and suggest an approach of engineering antimicrobial peptide promoter with enhanced activities that may lead to broad applications.; Xiao-Ting HuaXiao-Juan MaRen-Ju XueTing-Cai ChengFei WangQing-You Xia

Abnormal expressions of Ultrabithorax and abdominal-A genes are responsible for an extra thoracic prolegs mutant(EKh) in the silkworm, Bomybx mori: In insects, there are many sets of serially homologous appendages. Nevertheless, they show great divergences i...; Ming-Yue FuPeng ChenXiao-Ling TongLei ChenZhong-Huai XiangCheng LuFang-Yin Dai; 关键词：THORACIC LEGS ULTRABITHORAX ABDOMINAL-A; 文献传递

家蚕墨蝶呤还原酶基因的体外表达及酶活性研究被引量：1: 2014年; 家蚕(Bombyx mori)黄体色突变体(lem)的幼虫体壁富含墨蝶呤(SP),SP经墨蝶呤还原酶(SPR)的催化作用合成四氢生物蝶呤(BH4)。作为芳香族氨基酸羟化酶的重要辅酶,BH4的缺乏会导致多种神经性代谢综合症。前期研究已克隆获得家蚕SPR基因(BmSpr),确定了BmSpr为lem突变体的遗传本质。本实验将重组质粒pET-24b-BmSpr转化至E.coli不同菌株的感受态细胞,对BmSpr的体外表达条件进行了优化。SDSPAGE和Western Blot的检测结果表明BmSPR融合蛋白能够在原核表达系统中得到稳定表达,酶活性分析结果显示体外表达的重组BmSPR对其底物SP有较好的催化活性。本研究为进一步以从家蚕lem突变体资源大量提纯的SP为底物,利用原核表达BmSPR,开展体外合成BH4的应用基础研究奠定了实验基础。; 李闻天龚美霞戴伟宏张蕾王文静刘朝良孟艳; 关键词：四氢生物蝶呤酶活性

基于16S rRNA基因序列分析家蚕肠道细菌的多样性被引量：22: 2015年; 家蚕肠道菌群与蚕体对营养物质的消化吸收及健康性密切相关。为了解家蚕肠道细菌的多样性及雌、雄个体间肠道细菌类群的差异,通过应用454焦磷酸测序技术检测细菌16S rRNA基因序列的方法分析家蚕5龄第3天雌、雄幼虫中肠内容物中的细菌类群,共发现5 578个分类操作单元(operational taxonomic units),包括14个门、21个纲、30个目、71个科、120个属的细菌,雌、雄个体在上述分类阶元共有的肠道细菌菌群分别为8、9、20、38和46种。在属水平上对细菌菌群构成的分析显示,雄蚕肠道中的主要优势细菌为代尔夫特菌属Delftia、橙单胞菌属Aurantimonas、肠球菌属Enterococcus、嗜糖假单胞菌属Pelomonas、青枯菌属Ralstonia、台湾温单胞菌属Tepidimonas、假单胞菌属Pseudomonas、阿斯普罗单胞菌属Aspromonas、甲基杆菌属Methylobacterium和葡萄球菌属Staphylococcus;雌蚕肠道中的主要优势细菌为代尔夫特菌属Delftia、橙单胞菌属Aurantimonas、假单胞菌属Pseudomonas、嗜糖假单胞菌属Pelomonas、佩特罗菌属Petrobacter、肠球菌属Enterococcus、台湾温单胞菌属Tepidimonas、狭义的梭菌属Clostridium sensu stricto、阿斯普罗单胞菌属Aspromonas。其中,雄蚕肠道中有23个属的细菌丰度是雌蚕的1.5倍以上,在雌蚕肠道中有7个属的细菌丰度是雄蚕的1.5倍以上,表明雌性与雄性家蚕肠道细菌类群的组成和比率存在明显差异。基于16S rRNA基因序列的聚类分析显示,家蚕肠道中的优势细菌属可分为2个大类。家蚕肠道细菌的多样性研究结果可作为探讨雌蚕和雄蚕经济性状差异的新线索。; 许刚孙振丽胡小龙薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：多样性 RRNA基因序列

家蚕中肠特异启动子BmAPN的克隆及活性分析被引量：7: 2012年; 【目的】克隆和鉴定1个家蚕中肠特异启动子,为研究家蚕的免疫应答和应用研究提供新的工具。【方法】从家蚕品种大造中提取基因组总DNA,用PCR方法克隆家蚕中肠特异表达基因BmAPN(GenBank登录号:BAA33715.1)的上游调控序列。利用此序列构建以EGFP为报告基因的转基因表达载体pBac[BmAPN-EGFP-SV40,3×P3-DsRed],通过显微注射获得转基因家蚕,在个体水平上检测启动子的活性。【结果】所克隆的BmAPN启动子长度为1 598 bp,其驱动的EGFP仅在转基因家蚕中肠特异表达,与内源基因BmAPN的表达特征一致。该启动子在家蚕幼虫时期活性相对较高,且在起蚕期的活性要明显高于眠蚕期,推测该启动子中的特异元件受激素调控。【结论】经克隆获得的BmAPN启动子为有活性的启动子,且为家蚕中肠特异启动子。; 陆改程廷才蒋亮金盛凯林平胡翠美夏庆友; 关键词：家蚕启动子

Study of microRNAs related to the liver regeneration of the whitespotted bamboo shark,Chiloscyllium plagiosum: To understand the mechanisms of liver regeneration better to promote research examining liver diseases and mar...; Conger LuJie ZhangZuoming NieJian ChenWenping ZhangXiaoyuan RenWei YuLili LiuCaiying JiangYaozhou ZhangJiangfeng GuoWutong WuJianghong ShuZhengbing Lv; 关键词：REGENERATIVE MIRNAS; 文献传递

Northern杂交检测家蚕microRNA的技术流程被引量：5: 2014年; microRNA(miRNA)是一类长度约22个碱基、具有重要转录后调控作用的非编码RNA。Northern杂交方法曾被认为是检测miRNA的金标准,但是由于影响实验结果的因素很多,要高质量地检测到这些短小、特殊的RNA分子也并非易事。在建立检测家蚕miRNA的Northern杂交技术平台基础上,详细介绍了相关的检测技术流程,包括miRNA的分离纯化、探针标记和Northern杂交的全过程,总结了该技术流程的特点以及操作中须重视的环节。所述内容具有很强的可操作性和实用性,可供研究人员检测家蚕miRNA和其他小RNA参考。; 刘仕平夏庆友; 关键词：家蚕微小RNA NORTHERN杂交

家蚕组织蛋白酶基因家族的鉴定及表达特征分析被引量：4: 2015年; 家蚕是鳞翅目完全变态昆虫,在其变态过程中伴随着巨大的形态变化,包括旧组织的解离和新组织的形成,在这过程中有多种组织蛋白酶参与。组织蛋白酶是一类细胞内蛋白酶,广泛存在于各个物种中,包括组织蛋白酶B、H、L等几个亚家族。对家蚕组织蛋白酶的研究将有利于阐明家蚕变态发育的详细过程。通过对家蚕基因组数据库进行筛选,共在家蚕中鉴定到13种组织蛋白酶,并对这13种组织蛋白酶的基本信息和表达模式进行了分析。另外,利用家蚕基因芯片数据和荧光定量PCR分析,鉴定编号为BGIBMGA004622的基因为卵巢特异表达的组织蛋白酶L亚家族基因。该基因全长1 209 bp,编码402个氨基酸。经过序列分析,该酶与其他物种的组织蛋白酶L具有较高的同源性,其活性位点高度保守,且与鳞翅目的组织蛋白酶L在进化上聚为一支。同时,对该基因进行克隆并原核表达,结果显示重组蛋白以包涵体的形式表达。定量PCR结果显示,该酶在蛹发育初期表达量逐渐升高,至蛹3 d达到最高值,推测其可能参与卵巢与卵母细胞的发育过程。; 李懿周小英黎治浪李建伟陈世达郭超侯勇赵萍; 关键词：家蚕组织蛋白酶变态发育卵巢

动物microRNA靶基因的筛选与鉴定研究进展被引量：3: 2014年; miRNA(microRNA)是一类在生物体内广泛存在的长度约22 nt的小分子非编码RNA,其在转录后水平调控靶基因的表达,在生物体生长发育过程中起重要的调控作用。近年来,miRNA的功能研究越来越受到人们的重视,而miRNA功能研究的关键在于其调控靶基因的确定。miRNA主要作用于靶基因mRNA的3’UTR区的结合位点,但由于miRNA和靶基因的作用位点并不完全匹配,没有明显的规律可寻,导致应用传统方法鉴定靶基因十分困难。近年来,人们开发了各种特异的、灵敏度高的高通量miRNA靶基因筛选与鉴定方法,极大地促进了miRNA的功能研究。; 刘悦李丹张玉王婵盛清吕正兵陈健张耀洲聂作明; 关键词：MIRNA 基因调控靶基因

蓖麻蚕核型多角体病毒基因gp64的克隆及荧光定量表达分析被引量：4: 2013年; Gp64是杆状病毒CRV(Cell-released virus)的主要嚢膜蛋白,在CRV借吸附和内吞作用侵入细胞过程中起关键作用,能促进CRV嚢膜与胞饮体膜之间的融合从而促进杆状病毒对宿主细胞的吸附。本试验克隆了蓖麻蚕核型多角体病毒(Philosamia cynthia ricini nuclear polyhedrosis virus,PcrNPV)的gp64基因,序列分析表明该基因ORF全长1 530bp,编码509个氨基酸残基,其相应的GP64蛋白质分子量为58.46kD,等电点为5.59;同源性分析表明,PcrNPV的GP64蛋白与柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nuclear polyhedrosis virus,ApNPV)的GP64同源性高达99%,而与家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclear polyhydrosis virus,BmNPV)的GP64仅为76%;荧光定量分析表明,PcrNPV的gp64基因在不同蓖麻蚕品种的中肠、血液及其脂肪体中均有相同的增殖趋势,但在不同品种的各组织中的增殖量不同,增殖量多的品种与感染试验中相对易感的品种一致。; 钱荷英徐安英张月华孙平江高坤郭锡杰; 关键词：GP64 基因克隆荧光定量PCR

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